胡有寧 李 倩 李兆波

(1 西安文理學(xué)院生物與環(huán)境工程學(xué)院，陜西省西安市 710065，電子郵箱：huyouning@163.com； 2 陜西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，咸陽(yáng)市 712046)

【提要】 青藤堿是從傳統(tǒng)中藥青風(fēng)藤中提取的一種活性物質(zhì)。近年來(lái)，青藤堿在肝臟疾病治療方面受到廣泛關(guān)注。本文通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外最新相關(guān)研究報(bào)告，對(duì)青藤堿在肝損傷及肝移植術(shù)后中的肝保護(hù)、促進(jìn)肝再生、減緩肝纖維化和抗肝癌方面的功效進(jìn)行綜述，旨在為進(jìn)一步研究青藤堿治療肝病提供參考，也為青藤堿的新藥開(kāi)發(fā)與臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

作為人體最主要的代謝器官，肝臟容易受到各種因素侵?jǐn)_而出現(xiàn)損傷。肝損傷誘發(fā)的炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致肝硬化甚至肝癌的直接病因[1-2]。全球每年約有200萬(wàn)人死于肝硬化和肝癌，占全球死亡人數(shù)的3.5%，由此可見(jiàn)，肝臟疾病已對(duì)全球公共衛(wèi)生構(gòu)成巨大威脅[3]。近年來(lái)，有研究人員發(fā)現(xiàn)一些植物的活性成分具有很好的肝臟保護(hù)作用[4-7]。 青藤堿是從防己科植物青藤和毛青藤的干燥根莖中提取的一種生物堿，屬于異喹啉類生物堿，分子式為C19H23NO4，分子量為329.39，其結(jié)構(gòu)與嗎啡類似，藥用形式以鹽酸鹽居多[8-9]。國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有的研究結(jié)果證實(shí)青藤堿具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，如具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答、抗病毒、保肝、降血壓、消腫、利尿、抗心律失常、抗藥物依賴、抗血管新生、治療顱腦損傷及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、鎮(zhèn)咳鎮(zhèn)靜、戒毒和抗腫瘤等功效[5，8-10]。本文對(duì)青藤堿在肝臟疾病治療中作用的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 通過(guò)抗氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)發(fā)揮肝保護(hù)作用

肝臟是人體最主要的代謝器官，在有毒有害物質(zhì)侵犯及代謝過(guò)程中易發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，隨后啟動(dòng)細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，肝細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能受到破壞，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和死亡，嚴(yán)重者會(huì)引發(fā)肝硬化甚至肝癌[2，11]。大量研究表明青藤堿可通過(guò)多種途徑發(fā)揮保護(hù)肝臟的作用[11-12]。(1)抗氧化應(yīng)激：劉剛等[13]發(fā)現(xiàn)，青藤堿作為一種天然的抗氧化劑，可有效清除細(xì)胞代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)量超氧陰離子自由基和羥自由基，從而可抑制大鼠肝勻漿自氧化及維生素C-Fe2+系統(tǒng)誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化，對(duì)肝細(xì)胞線粒體有保護(hù)作用。王效蕊等[11]采用過(guò)氧化氫損傷人肝細(xì)胞系HLO2細(xì)胞建立氧化應(yīng)激細(xì)胞模型，并給予不同濃度青藤堿進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果提示青藤堿能夠顯著提高受損肝細(xì)胞活力，抑制細(xì)胞凋亡，并具有劑量依賴效應(yīng)。(2)抑制炎癥相關(guān)信號(hào)通路和炎癥因子：吳剛等[14]采用膽總管結(jié)扎法建立Wistar大鼠梗阻性黃疸模型，發(fā)現(xiàn)高劑量(80 mg/kg)、低劑量(40 mg/kg)的青藤堿均可減輕梗阻性黃疸大鼠的肝組織病變，并可降低其血清中總膽紅素、直接膽紅素、AST、ALT水平，具有顯著的保肝護(hù)肝作用；同時(shí)，青藤堿還可下調(diào)梗阻性黃疸大鼠肝臟組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)的表達(dá)，說(shuō)明青藤堿可能是通過(guò)抑制TGF-β1的表達(dá)來(lái)發(fā)揮保肝作用。Chen等[12]也認(rèn)為青藤堿對(duì)肝臟的保護(hù)作用是多靶點(diǎn)的，青藤堿不僅可以減輕急性肝損傷模型小鼠肝臟微環(huán)境的氧化應(yīng)激反應(yīng)，還可以通過(guò)TGF-β/Smad信號(hào)通路調(diào)節(jié)肝臟免疫反應(yīng)以達(dá)到保肝護(hù)肝的效果。除此之外，張家薇等[15]使用阿奇霉素誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷后給予青藤堿治療，發(fā)現(xiàn)青藤堿可明顯改善急性肝損傷大鼠肝臟組織病變，認(rèn)為其通過(guò)抑制p38 信號(hào)通路活化，進(jìn)而抑制促炎因子過(guò)度產(chǎn)生、降低肝細(xì)胞凋亡率，從而發(fā)揮保護(hù)肝臟細(xì)胞的作用。朱昱豪等[16]用刀豆蛋白A建立大鼠急性免疫性肝損傷模型，觀察青藤堿的治療作用及其機(jī)制，結(jié)果顯示青藤堿通過(guò)抑制細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-2的產(chǎn)生、促進(jìn)細(xì)胞因子IL-10的產(chǎn)生以及保護(hù)細(xì)胞膜等多種途徑減輕肝損傷發(fā)揮肝保護(hù)的作用。

2 減緩肝纖維化的作用

肝纖維化是多種慢性肝臟疾病發(fā)展為肝硬化及肝癌的必經(jīng)病理過(guò)程，其本質(zhì)為肝臟持續(xù)受損導(dǎo)致肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性、壞死，肝臟微環(huán)境發(fā)生改變，引起肝星狀細(xì)胞過(guò)度活化，從而表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白，合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白和層粘連蛋白；與此同時(shí)，基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑的平衡失調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)分泌增加、降解減少而出現(xiàn)大量沉積，最終導(dǎo)致肝纖維化[1-2]。

研究表明，肝纖維化可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)，但肝纖維化往往癥狀隱匿，隨著肝纖維化程度的逐漸加重會(huì)引起肝臟結(jié)構(gòu)改變、功能喪失并最終導(dǎo)致肝硬化，進(jìn)一步發(fā)展可引起肝癌；病情一旦發(fā)展到肝硬化、肝癌階段，治療困難，預(yù)后更差[17]。阻止或減緩肝纖維化的發(fā)生，是治愈大多數(shù)慢性肝病患者的核心要素。解建中[18]使用不同濃度的青藤堿溶液處理人肝星狀細(xì)胞系LX-2細(xì)胞，結(jié)果表明青藤堿可抑制肝星狀細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡；其還應(yīng)用四氯化碳誘導(dǎo)雄性C57BL/6小鼠建立肝纖維化模型，并給予青藤堿干預(yù)，發(fā)現(xiàn)給予青藤堿灌胃治療可下調(diào)肝纖維化小鼠肝組織中TGF-β的表達(dá)、降低膠原生成、減少肝星狀細(xì)胞活化并誘導(dǎo)其凋亡。這表明青藤堿可減緩小鼠肝組織纖維化進(jìn)程，但具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步闡明。

3 抗腫瘤作用

肝癌是一種臨床上十分常見(jiàn)的惡性腫瘤，2020年全球患病率位居第6，死亡率位居第3位[19]，而中國(guó)是肝癌新增病例最多的國(guó)家[3]。諸多研究表明，青藤堿能通過(guò)調(diào)控多種信號(hào)通路、影響腫瘤微環(huán)境從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，對(duì)肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌和前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞增殖均具有顯著的抑制作用；同時(shí)其可抑制腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移，并可降低腫瘤細(xì)胞的耐藥性等[9，20-21]。

青藤堿可通過(guò)多種途徑抑制肝癌細(xì)胞增殖：(1)青藤堿可以促進(jìn)肝癌腫瘤細(xì)胞系HepG2細(xì)胞中Apo2.7的表達(dá)、誘導(dǎo)線粒體內(nèi)凋亡因子釋放，下調(diào)抑凋亡基因B細(xì)胞淋巴瘤-2基因的表達(dá)，上調(diào)促凋亡基因Fas的表達(dá)，從而引發(fā)人肝癌細(xì)胞的凋亡[22]。(2)0.125～2.5 mmol/L 的青藤堿可以抑制HepG2細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶9、CD44的表達(dá)，從而抑制肝癌細(xì)胞體外增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[23]。(3)鹽酸青藤堿可顯著抑制HepG2細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及環(huán)氧化酶2的表達(dá)，其與抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體聯(lián)合使用能產(chǎn)生正協(xié)同效應(yīng)，從而提升藥物的抗腫瘤效應(yīng)[26]。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，青藤堿可抑制IL-1β、腫瘤壞死因子α及CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白 β的表達(dá)，推測(cè)青藤堿可能通過(guò)抑制Ras信號(hào)通路傳導(dǎo)從而抑制下游靶分子(環(huán)氧化酶2)的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控炎癥因子的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞所處的組織微環(huán)境發(fā)生改變，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡[27]。(4)青藤堿能夠誘導(dǎo)多種肝癌細(xì)胞系(Hep3B、SMMC-7721、MHCC97H、MHCC97L、HHCC、BEL-7402系細(xì)胞)的細(xì)胞周期阻滯于G1期，并上調(diào)細(xì)胞中p21表達(dá)水平、激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase)細(xì)胞凋亡途徑，最終達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用[26]。而其他學(xué)者對(duì)HepG2、Huh7細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)也獲得相似的結(jié)果[27-28]。(5)青藤堿還可上調(diào)肝癌細(xì)胞SMMC-7721內(nèi)死亡受體DR4、DR5的表達(dá)從而抑制肝癌細(xì)胞增殖并促使其凋亡[29]。(6)王高峰等[30]認(rèn)為青藤堿不僅可以調(diào)控Caspase-3、Caspase-9、內(nèi)凹陷蛋白1和SOX2的表達(dá)進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，而且青藤堿還是一種高效的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，可以抑制或阻斷肝癌細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制，以達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的目的。

4 肝移植術(shù)后的保護(hù)作用

肝病一旦發(fā)展到肝硬化、肝癌階段，治療十分困難，目前臨床上最為有效的治療措施就是進(jìn)行肝移植[3]。肝移植過(guò)程中最常見(jiàn)的問(wèn)題之一就是肝臟缺血再灌注引發(fā)組織損傷，約10%的移植器官因此發(fā)生功能衰竭。而減輕缺血再灌注損傷有助于促進(jìn)肝移植患者術(shù)后的恢復(fù)。林峰等[31]采用Kamada法建立大鼠原位肝移植模型，并給予青藤堿干預(yù)，發(fā)現(xiàn)青藤堿能夠抑制肝細(xì)胞凋亡，減輕肝細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞損傷，降低血清ALT水平，顯著提高肝移植大鼠1周存活率，具有修復(fù)肝移植缺血再灌注損傷的效果。

其次，肝臟移植后CD4+T淋巴細(xì)胞被進(jìn)一步激活，其亞群Th1、Th17細(xì)胞大量增殖，激發(fā)免疫效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生大量IL(IL-2、IL-17等)，啟動(dòng)、加劇移植器官的免疫應(yīng)答，造成移植器官損傷[32]，此時(shí)若使用藥物控制過(guò)度的免疫應(yīng)答，阻斷抗原遞呈，減少IL的表達(dá)，可有效減緩急性排斥反應(yīng)[33]。越來(lái)越多的研究表明，合理應(yīng)用青藤堿可明顯減輕肝移植器官排斥反應(yīng)，有效延長(zhǎng)移植動(dòng)物生存時(shí)間[31，34]。蔡振剛等[35]使用“二袖套”法建立大鼠原位肝移植模型，分別選用環(huán)孢素A、青藤堿和兩者聯(lián)合進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)肝移植術(shù)后排斥反應(yīng)的干預(yù)效果，結(jié)果顯示環(huán)孢素A雖然具備較好的免疫抑制作用，但它會(huì)過(guò)度抑制IL-2的表達(dá)，進(jìn)而降低肝臟內(nèi)淋巴細(xì)胞的凋亡率，此外，肝臟內(nèi)環(huán)境缺乏IL-2會(huì)影響調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的產(chǎn)生和功能狀態(tài)；而聯(lián)合用藥后，青藤堿不但可以減少環(huán)孢素A的使用劑量，還可以促進(jìn)肝內(nèi)淋巴細(xì)胞凋亡，維持促炎、抑炎因子的動(dòng)態(tài)平衡，減輕肝臟損傷。鄧衛(wèi)平等[32]建立大鼠巨細(xì)胞病毒性肝炎模型后進(jìn)行肝臟移植，使用青藤堿緩釋膠囊灌胃干預(yù)，結(jié)果表明青藤堿可抑制CD4+T淋巴細(xì)胞分化成Th1、Th17細(xì)胞，抑制肝組織中TGF-β1、腫瘤壞死因子α、IL-2和IL-17的表達(dá)，能有效抑制巨細(xì)胞病毒性肝炎大鼠肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)。王欣玲等[36]建立大鼠肝細(xì)胞癌模型，觀察青藤堿對(duì)肝細(xì)胞癌大鼠肝移植術(shù)后免疫應(yīng)答的影響，發(fā)現(xiàn)青藤堿可以顯著降低肝細(xì)胞癌大鼠肝臟組織中IL-2、IL-6 、腫瘤壞死因子α、TGF-β1和趨化因子-10的水平、降低肝細(xì)胞癌大鼠靜脈血中Treg和CD4+T細(xì)胞的百分率，說(shuō)明青藤堿可抑制肝細(xì)胞癌大鼠肝移植術(shù)后細(xì)胞免疫，而這有利于減輕肝移植術(shù)后的肝損傷。

5 促進(jìn)肝再生

肝臟作為人體內(nèi)重要的消化器官，具有很強(qiáng)的再生能力。但肝再生過(guò)程復(fù)雜，易受到多種因素的影響，確切的機(jī)制有待進(jìn)一步闡明。近年來(lái)，中醫(yī)藥調(diào)控肝再生能力治療急慢性肝病的作用和機(jī)制正成為新的研究熱點(diǎn)。王品[37]通過(guò)左肝葉切除術(shù)建立大鼠肝損傷模型，并給予靜脈注射青藤堿治療，結(jié)果顯示青藤堿無(wú)明顯的腎毒性，且可以提高肝損傷大鼠的肝再生指數(shù)，降低血清ALT、AST水平和肝組織中TGF-β1的表達(dá)水平，提示青藤堿具有促進(jìn)肝再生的作用，而這主要通過(guò)抑制肝組織中的TGF-β1表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。

6 小結(jié)與展望

青藤堿在肝病治療中的作用機(jī)制研究目前已成為熱點(diǎn)，綜合現(xiàn)有的研究結(jié)果，青藤堿對(duì)肝損傷的保護(hù)、對(duì)肝移植術(shù)后保護(hù)和抗肝癌方面研究報(bào)告較多，而對(duì)于促進(jìn)肝再生、減緩肝纖維化的研究還比較薄弱。目前，雖然已經(jīng)在多方面開(kāi)展了青藤堿治療肝病的研究，揭示了青藤堿保護(hù)肝臟和抗肝癌的部分機(jī)制，但大部分研究仍然停留在體外試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；此外，青藤堿對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用與作用時(shí)間、濃度有著密切關(guān)系，但大部分實(shí)驗(yàn)只分析干預(yù)后數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)的結(jié)果，缺乏長(zhǎng)期的定性與定量研究，這也在很大程度上限制了青藤堿的使用范圍。因此，應(yīng)進(jìn)一步深入研究青藤堿治療肝臟疾病的分子生物學(xué)機(jī)制，全面評(píng)估藥用效果與臨床應(yīng)用價(jià)值。

青風(fēng)藤種類繁多，現(xiàn)已將其提取物制成多種制劑，如鹽酸青藤堿注射劑、毛青藤堿片、正清風(fēng)痛寧膠囊等[38]，均具有廣闊的應(yīng)用與推廣前景。然而目前對(duì)青藤堿藥用效果的評(píng)價(jià)并不一致。部分研究表明青藤堿生物半衰期短，在體內(nèi)代謝較快，用藥劑量大，毒副作用較大，容易引起過(guò)敏性休克、皮疹、白細(xì)胞減少及胃腸道反應(yīng)等毒副作用[31，39-40]。但也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)青風(fēng)藤毒性低，不良反應(yīng)小[41]，在促進(jìn)肝再生的過(guò)程中沒(méi)有明顯腎毒性[37]；葉木榮等[42]還發(fā)現(xiàn)，采用青藤堿以較高劑量、較長(zhǎng)時(shí)間對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射，青藤堿在大鼠肝臟的分布濃度最高，且有短暫的蓄積性，但對(duì)肝功能影響不大；此外，蔡振剛等[35]發(fā)現(xiàn)青藤堿和其他藥物配合使用還可減緩其他藥物對(duì)腎臟等器官的損傷。在研究青藤堿藥用機(jī)制與臨床應(yīng)用時(shí)，要將其毒副作用研究作為重點(diǎn)之一，以積極推動(dòng)我國(guó)中醫(yī)藥在國(guó)際上的競(jìng)爭(zhēng)力，全面開(kāi)發(fā)利用我國(guó)的青藤資源。