袁佳，張苑雯，遆慧慧，2，3，王淑美

（1.廣東藥科大學(xué)臨床藥學(xué)院，廣東廣州 510006;2.國家中醫(yī)藥管理局中藥數(shù)字化質(zhì)量評價技術(shù)重點(diǎn)研究室，廣東 廣州 510006;3.廣東省中藥質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，廣東廣州 510006;4.廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院，廣東廣州 510006）

石仙桃（Pholidota chinensisLindl.）為蘭科（Orchidaceae）石仙桃屬植物，又名石橄欖、石上仙桃、石蓮等。以假鱗莖或全草入藥，是一種重要的中藥材，最早記載于清代醫(yī)藥學(xué)家何諫撰寫的《生草藥性備要》[1]。石仙桃味甘、微苦，性涼，歸肺、腎經(jīng)，具有養(yǎng)陰、清肺、利濕、消瘀和清熱解毒等功效，臨床用于肺熱咳嗽、肺結(jié)核咳血、淋巴結(jié)結(jié)核、小兒疳積、胃十二指腸潰瘍等[2]。研究發(fā)現(xiàn)，石仙桃的水提液具有鎮(zhèn)痛、耐缺氧以及抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用[3]。

石仙桃屬植物在全世界約有30種，分布于亞洲東南部至澳大利亞和太平洋一些島嶼，我國有14種，包括石仙桃、節(jié)莖石仙桃和細(xì)葉石仙桃等，主要分布于福建、廣東、廣西、云南等地[4]。石仙桃屬植物化學(xué)成分豐富，主要有菲、聯(lián)芐、二苯乙烯、三萜、木脂素、甾體和酚酸等類型化合物[5]。其中，菲類化合物是石仙桃屬的主要化合物，已從中鑒定出64個，包括簡單的菲類，9，10?二氫菲，9,10?二氫菲二聚體和菲類其他衍生物。此類化合物具有廣泛的藥理學(xué)活性，如抗炎、抗腫瘤、抗氧化等[6]。目前，針對石仙桃全草的研究發(fā)現(xiàn)其主要含有三萜類的蟲漆蠟醇（laccerol）、環(huán)石仙桃醇（cyclopholidonol）、環(huán)石仙桃酮（cyclopholidone）以及一些酚類化合物等成分[7]。為了更深入了解石仙桃的化學(xué)成分及藥理活性，本研究對石仙桃全草中分離出的12個菲類化合物進(jìn)行了光譜鑒定，并評價了化合物的抗炎作用以及對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus subsp.Au-reus）ATCC29213的抗菌作用。

1 材料與方法

1.1 材料

石仙桃（Pholidota chinensisLindl.）全草15 kg，2016年10月從中國云南開遠(yuǎn)市采集，由中國科學(xué)院昆明植物學(xué)研究所陳玉教授鑒定。憑證樣本（No.BBP0734）存放于云南西麗有限公司（中國昆明）實(shí)驗(yàn)室。金黃色葡萄球菌金黃亞種（Staphylococcus aureus subsp.aureus）ATCC29213由中國普通微生物菌種保藏管理中心（China General Microbiologi?cal Culture Collection Center,CGMCC）提供。

頭孢他啶（上海源葉生物科技有限公司）；青霉素G鈉（Biosharp公司）；DMSO（Sigma公司）；Muller Hinton（MH）肉湯、Luria?Bertani（LB）肉湯（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）；瓊脂粉（Scientific Research Special公司）。小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7由中科院上海細(xì)胞庫提供，DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清由BI公司生產(chǎn)，Griess Reagent、LPS及對照藥物L(fēng)?單甲基精氨酸（L?NMMA）由Sigma公司生產(chǎn)。

1.2 儀器

旋光度用Perkin?Elmer 341旋光計測量；UV光譜在MeOH中用Perkin?Elmer Lambda 25 UV?vis分光光度計記錄；以TMS為內(nèi)參照，1H（400 MHz）、13C(100 MHz)和2D NMR波譜通過Bruker DRX?500 MHz核磁共振光譜儀（德國Bruker公司）記錄；HRESIMS數(shù)據(jù)用LC?IT?TOF質(zhì)譜儀（日本島津公司）獲取；ESIMS數(shù)據(jù)用MDSSCIEX API 2000 LC/MS/MS儀器采集；Water2535型半制備液相色譜儀（美國Waters公司）；Agilent1206型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；SephadexLH?20（瑞典Amer?sham Biosciences公司）；制備型反相色譜柱（250 mm×20 mm，10μm，日本Daisogel公司），RP?C18（40~63μm，德國Merck公司）；GF254硅膠板（50~100nm，臨沂市海祥化工有限公司）；柱層析硅膠60（100~200目，青島海洋化工有限公司）和Develosil ODS（75μm，日本Nomura Chemical Co.Ltd.）。

1.3 提取與分離

干燥石仙桃（Pholidota chinensisLindl.）全草15 kg經(jīng)粉碎后，室溫下用100 L的體積分?jǐn)?shù)95%乙醇浸泡提取3次，合并濾液進(jìn)行減壓濃縮，得到浸膏800 g。乙醇提取液經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚?丙酮（體積比10∶1，7∶1，5∶1，3∶1，1∶1）進(jìn)行梯度洗脫，得到Fr1?Fr9共9個組分。Fr6組分經(jīng)硅膠柱層析，以三氯甲烷?甲醇（體積比100∶1~60∶1）進(jìn)行梯度洗脫，過Sephadex LH?20（三氯甲烷?甲醇，體積比1∶1）凝膠柱色譜分離純化，經(jīng)甲醇重結(jié)晶后，得到化合物3（225 mg）。Fr7組分經(jīng)硅膠柱層析，以三氯甲烷?甲醇（體積比100∶0，100∶1，50∶1，30∶1）進(jìn)行梯度洗脫，得到Fr7?1~Fr7?3共3個亞組分。其中，F(xiàn)r7?2的濾液過Sephadex LH?20（三氯甲烷?甲醇，體積比1∶1）凝膠柱色譜后，用Waters制備液相，甲醇?水（體積比56∶44）等度洗脫得到化合物6（tR=7.9 min，65 mg）。Fr7?3組分經(jīng)硅膠柱層析，以三氯甲烷?甲醇（體積比60∶1）為洗脫劑，再過Sephadex LH?20（甲醇）凝膠柱色譜，得到Fr7?3?1和Fr7?3?2 2個組分，其中Fr7?3?1組分經(jīng)Agilent制備液相，甲醇?水（體積比55∶45）等度洗脫得到化合物11（tR=9.0 min，73 mg）和12（tR=7.7 min，56 mg），F(xiàn)r7?3?2組分經(jīng)Ag?ilent制備液相，甲醇?水（體積比54∶46）等度洗脫得到化合物2（tR=7.0 min，43 mg）。Fr8組分經(jīng)分離得到Fr8?1~Fr8?3共3個亞組分，其中Fr8?1組分經(jīng)Sep?hadex LH?20（三氯甲烷?甲醇，體積比1∶1）凝膠柱色譜后，經(jīng)Agilent制備液相，以60%%~100%甲醇進(jìn)行梯度洗脫，分別得到化合物9（tR=8.0 min，11 mg）、7（tR=8.4 min，53 mg）和1（tR=8.6 min，25 mg）；Fr8?2組分經(jīng)Sephadex LH?20（三氯甲烷?甲醇，體積比1∶1）凝膠柱色譜后，經(jīng)Agilent制備液相，甲醇?水（體積比58∶42）等度洗脫得到化合物8（tR=8.0 min，46 mg）。Fr8?3組分經(jīng)Sephadex LH?20（三氯甲烷?甲醇，體積比1∶1）凝膠柱色譜后，經(jīng)Agilent制備液相，甲醇?水（體積比44∶56）等度洗脫得到化合物4（tR=6.1 min，12 mg）。Fr9組分經(jīng)硅膠柱層析，以三氯甲烷?甲醇（體積比30∶1~15∶1）梯度洗脫，得到Fr9?1~Fr9?3共3個亞組分，其中Fr9?2經(jīng)常壓反相C18色譜柱層析（0%~70%），經(jīng)Sephadex LH?20（甲醇）凝膠柱色譜分離純化，得到化合物10（17 mg）；Fr9?3經(jīng)常壓反相C18色譜柱層析（0%~70%），經(jīng)硅膠柱層析，以三氯甲烷?甲醇（體積比60∶1）洗脫，經(jīng)Sephadex LH?20（三氯甲烷?甲醇，體積比1∶1）凝膠柱色譜純化，再經(jīng)甲醇重結(jié)晶，得到化合物5（41 mg）。

1.4 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末；分子式為C27H26O7；ESIMSm/z：461[M?H]?，497[M+Cl]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：5.34（1H，d，J=7.0 Hz，H?2），3.63（1H，m，H?3），7.99（1H，s，H?4），6.35（1H，d，J=2.0 Hz，H?6），6.26（1H，d，J=2.0 Hz，H?8），2.59?2.61（1H，m，H?9），6.62（1H，dd，s，H?11），4.28（1H，dd，J=11.0，7.5 Hz，H?1′′），4.35（1H，dd，J=11.0，7.5 Hz，H?1′′），6.89（1H，br s，H?2′），6.72（1H，br d，J=8.0 Hz，H?5′），6.77（1H，br d，J=8.0 Hz，H?6′），3.76（3H，s，5?OCH3），3.76（3H，s，3′?OCH3）。13C NMR（125 MHz，CD3OD）δ：89.1（C?2），51.6（C?3），125.2（C?4），159.1（C?5），99.4（C?6），157.7（C?7），108.3（C?8），31.8（C?9），31.5（C?10），109.2（C?11），125.1（C?3a），127.6（C?4a），116.8（C?5a），142.0（C?8a），140.7（C?10a），158.8（C?11a），67.1（C?1′′），134.3（C?1′），110.6（C?2′），149.2（C?3′），147.7（C?4′），116.2（C?5′），120.0（C?6′），172.7（-CO），55.9（5?OCH3），56.4（3′?OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道的基本一致，故鑒定化合物1為shanciol H。

化合物2：黃色結(jié)晶；分子式為C15H12O3；ESIMSm/z：239[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：6.80（1H，d，J=2.4 Hz，H?1），6.74（1H，d，J=2.4 Hz，H?3），9.32（1H，d，J=9.3 Hz，H?5），7.06（1H，dd，J=9.3，2.8 Hz，H?6），7.12（1H，d，J=2.8 Hz，H?8），7.48（1H，d，J=8.9 Hz，H?9），7.44（1H，d，J=8.9 Hz，H?10），4.05（s，4?OCH3）。13C NMR（125 MHz，CD3OD）δ：105.6（C?1），156.2（C?2），100.2（C?3），160.6（C?4），116.0（C?4a），125.5（C?4b），130.1（C?5），117.2（C?6），155.3（C?7），112.3（C?8），134.7（C?8a），128.4（C?9），127.9（C?10），135.8（C?10a），55.9（4?OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道的基本一致，故鑒定化合物2為4?甲氧基菲?2，7?二醇（flavanthrinin）。

化合物3：黃色粉末；分子式為C16H14O4；ESIMS m/z：269[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：6.61（1H，s，H?1），6.18（1H，d，J=2.2 Hz，H?6），6.26（1H，d，J=2.2 Hz，H?8），2.74（2H，s，H?9），2.74（2H，s，H?10），5.10（1H，s，H?1′），3.76（s，-OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道的基本一致，故鑒定化合物3為宿苞石仙桃（imbricatin）。

化合物4：白色針晶；分子式為C14H12O3；ESIMS m/z：227[M?H]?，263[M+Cl]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：8.06（1H，d，J=9.5 Hz，H?5），6.55（2H，m，H?6，8），6.19（1H，d，J=2.0 Hz，H?1），6.14（1H，d，J=2.0 Hz，H?3），2.57（4H，s，H?9，10）。13CNMR（125 MHz，CD3OD）δ：157.0（C?2），156.4（C?4），155.8（C?7），141.8（C?10a），140.2（C?8a），126.7（C?4b），115.3（C?4a），115.0（C?8），113.6（C?6），107.6（C?1），102.8（C?3），31.8（C?10），31.3（C?9）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道的基本一致，故鑒定化合物4為2，4，7?三羥基?9，10?二 氫 菲（2，4，7?trihydroxy?9，10?dihydro?phenanthrene）。

化合物5：黃色針晶；分子式為C30H22O6；ESIMS m/z：477[M?H]?。1H NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.92（2H，d，J=9.2 Hz，H?10，10′），6.93（2H，s，H?3，3′），7.00（2H，d，J=2.8 Hz，J=H?8，8′），7.03（2H，dd，J=9.2，2.8 Hz，J=H?6，6′），7.23（2H，dd，J=9.2，J=H?9，9′），9.40（2H，d，J=9.2 Hz，J=H?5，5′），4.14（6H，s，-OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道的基本一致，故鑒定化合物5為blestriareneC。

化合物6：白色粉末；分子式為C16H16O4；ESIMS m/z：271[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.74（1H，s，H?5），6.74（1H，s，H?8），6.38（1H，d，J=2.4 Hz，H?1），6.29（1H，d，J=2.4 Hz，H?3），3.82（3H，s，-OCH3），3.84（3H，s，-OCH3），2.62（4H，m，H?9/10）。13C NMR（125 MHz，CD3OD）δ：107.3（C?1），154.9（C?2），99.1（C?3），158.0（C?4），114.6（C?4a），124.0（C?4b），114.5（C?5），145.7（C?6），143.3（C?7），110.1（C?8），129.9（C?8a），29.6（C?9），29.5（C?10），141.2（C?10a），55.5（-OCH3），56.0（-OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報道的基本一致，故鑒定化合物6為callosin。

化合物7：黃色油狀；分子式為C27H26O7；ESIMS m/z：461[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：5.49（1H，d，J=3.5 Hz，H?2），3.60（1H，m，H?3），2.53?2.64（1H，m，H?4），6.56（1H，m，H?6），6.56（1H，m，H?8），7.94（1H，d，J=9.5 Hz，H?9），6.49（1H，s，H?11），4.08（1H，dd，J=11.0，4.0 Hz，H?1"），4.37（1H，m，H?1"），6.80（1H，s，H?2′），6.70（1H，s，H?4′），6.70（1H，s，H?6′），3.79（3H，s，10?OCH3），3.73（3H，s，5′?OCH3），1.98（3H，s，CH3）。13CNMR（125 MHz，CD3OD）δ：89.0（C?2），51.1（C?3），27.9（C?4），30.8（C?5），115.0（C?6），156.2（C?7），113.7（C?8），130.2（C?9），159.7（C?10），93.9（C?11），115.7（C?3a），137.8（C?4a），140.2（C?5a），126.0（C?9a），118.2（C?10a），160.5（C?11a），67.0（C?1′′），135.0（C?1′），110.1（C?2′），147.5（C?3′），116.3（C?4′），149.1（C?5′），119.2（C?6′），172.7（-CO），56.2（10?OCH3），56.4（5′?OCH3），20.8（-CH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道的基本一致，故鑒定化合物7為pleionesinC。

化合物8：棕色粉末；分子式為C25H24O6；ESIMS m/z：419[M?H]?，455[M+Cl]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：8.00（1H，d，J=9.2 Hz，H?9），6.90（1H，J=2.0Hz，H?2′），6.79（1H，dd，J=8.2，2.0Hz，H?6′），6.74（1H，d，J=8.2 Hz，H?5′），6.63（1H，d，J=2.8 Hz，H?6），6.62（1H，dd，J=9.2，2.8 Hz，H?8），6.55（1H，s，H?11），5.65（1H，d，J=3.0 Hz，H?2），3.85（1H，m，H?1′′a），3.85（3H，s，10?OCH3），3.80（3H，s，3′?OCH3），3.59（1H，m，H?1′′b），3.46（1H，m，H?3），2.62（4H，m，H?4/5）。13C NMR（125 MHz，CD3OD）δ：160.6（C?11a），159.4（C?10），156.1（C?7），149.0（C?3′），147.1（C?4′），140.2（C?5a），137.5（C?3b），135.7（C?1′），130.2（C?9），126.1（C?9a），119.0（C?6′），117.9（C?9b），116.7（C?3a），116.1（C?5′），114.9（C?6），113.7（C?8），110.0（C?2′），93.8（C?11），88.7（C?2），64.9（C?1′′），56.2（10?OCH3），56.3（3′?OCH3），54.6（C?3），30.9（C?5），27.9（C?4）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14?15]報道的基本一致，故鑒定化合物8為deacetylpleionesinC。

化合物9：黃色粉末；分子式為C25H24O6；ESIMS m/z：419[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：8.00（1H，d，J=9.0 Hz，H?1），6.65（1H，m，H?2），6.67（1H，d，J=2.5 Hz，H?4），2.68（1H，m，H?5），2.68（1H，m，H?6），6.54（1H，s，H?7），5.61（1H，d，J=4.5 Hz，H?9），3.64（1H，m，H?10），6.93（1H，d，J=2.0 Hz，H?2′），6.76（1H，d，J=8.5 Hz，H?5′），6.83（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H?6′），4.06（1H，dd，J=11.0，4.0 Hz，H?1"），3.73（1H，m，H?1′′），3.57（3H，s，11?OCH3），3.82（3H，s，3′?OCH3）。13CNMR（125 MHz，CD3OD）δ：128.0（C?1），113.1（C?2），155.6（C?3），114.0（C?4），29.9（C?5），30.8（C?6），104.9（C?7），159.6（C?8），87.5（C?9），53.3（C?10），155.2（C?11），124.6（C?1a），139.5（C?4a），141.8（C?6a），117.3（C?10a），120.3（C?11a），134.2（C?1′），109.1（C?2′），147.9（C?3′），146.2（C?4′），115.0（C?5′），118.1（C?6′），62.9（C?1′′），59.1（11?OCH3），55.2（3′?OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道的基本一致，故鑒定化合物9為5'?demethoxycyrton?esinA。

化合物10：黃色油狀；分子式為C25H24O6；ESIMS m/z：419[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3OD）δ：6.31（1H，d，J=2.3 Hz，H?1），6.40（1H，d，J=2.3 Hz，H?3），8.06（1H，s，H?5），6.67（1H，s，H?8），2.63（1H，m，H?9），2.66（1H，m，H?10），6.94（1H，d，J=1.9 Hz，H?2′），6.76（1H，d，J=8.2 Hz，H?5′），6.83（1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H?6′），5.49（1H，d，J=5.5 Hz，H?7′），3.46（1H，dd，J=7.5，5.5 Hz，H?8′），3.84（1H，dd，J=11.0，5.5 Hz，H?9′），3.76（1H，dd，J=11.0，7.7Hz，H?9′）。13C NMR（125 MHz，CD3OD）δ：108.3（C?1），157.6（C?2），99.3（C?3），159.0（C?4），140.3（C?4a），125.8（C?5），142.0（C?5a），125.4（C?6），159.1（C?7），109.0（C?8），127.3（C?8a），31.6（C?9），31.8（C?10），116.9（C?10a），135.4（C?1′），110.4（C?2′），149.5（C?3′），147.4（C?4′），116.1（C?5′），119.6（C?6′），88.7（C?7′），55.2（C?8′），65.6（C?9′），56.4（3′?OCH3），55.9（4?OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報道的基本一致，故鑒定化合物10為bletillatinA。

化合物11：黃色油狀；分子式為C15H14O3；ESIMS m/z：241[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3COCD3）δ：8.03（1H，d，J=8.3 Hz，H?5），6.66（1H，d，J=8.3 Hz，H?6），6.65（1H，brs，H?8），6.44（1H，d，J=2.4 Hz，H?3），6.36（1H，d，J=2.4 Hz，H?1），3.80（3H，s，4?OCH3），2.62（4H，brs，H?9，10）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報道的基本一致，故鑒定化合物11為coelonin。

化合物12：白色粉末；分子式為C15H14O3；ESI/MS m/z：241[M?H]?。1H NMR（500 MHz，CD3COCD3）δ：6.37（1H，d，J=2.6 Hz，H?1），6.42（1H，d，J=2.6 Hz，H?3），6.68（1H，dd，J=9.3，2.1 Hz，H?6），6.70（1H，d，J=2.1 Hz，H?8），2.67（1H，m，H?9），2.67（1H，m，H?10），3.73（3H，s，2?OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報道的基本一致，故鑒定化合物12為lusianthridin。

1.5 抗菌活性評價

將金黃色葡萄球菌亞種標(biāo)準(zhǔn)菌經(jīng)24 h懸浮培養(yǎng)，用無菌生理鹽水稀釋至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濃度單位（1.5×108CFU/mL）。將待測樣品加入96孔培養(yǎng)板，其終濃度為100μmol/L。向各孔中加入100μL菌液，使其終濃度為5×105CFU/mL，終體積為200μL，每組設(shè)置一組復(fù)孔。37℃培養(yǎng)24 h，酶標(biāo)儀測定625 nm下的OD值。同時設(shè)置培養(yǎng)基空白對照、細(xì)菌對照以及青霉素G鈉陽性藥對照。MIC50（50%minimal inhibitory concentration）按Reed＆Muench法計算。

1.6 細(xì)胞毒性評價

在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中將巨噬細(xì)胞RAW 264.7置于DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。取孵育好的RAW264.7細(xì)胞均勻接種于96孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)24 h，將96孔板劃分為空白對照組和5個不同濃度的給藥組，每組設(shè)置3個復(fù)孔，待測藥物按連續(xù)兩倍稀釋濃度給藥，加樣200μL，培養(yǎng)24 h后，采用MTT法測細(xì)胞存活率，在570 nm處測定吸光度。

1.7 抗炎活性評價

將孵育好的RAW264.7細(xì)胞接種至96孔板，用1μg/mL的LPS進(jìn)行誘導(dǎo)刺激，同時加入待測化合物處理，其終濃度從50μmol/L開始2倍稀釋處理，同時設(shè)置不含藥物組和L?NMMA陽性藥物組作對照，每組設(shè)置3個復(fù)孔。細(xì)胞在37℃、5%CO2條件下過夜培養(yǎng)后，取培養(yǎng)基上清液檢測NO生成，在570 nm處測定吸光度。在剩余培養(yǎng)基中加入MTS進(jìn)行細(xì)胞存活率檢測，排除化合物對細(xì)胞的毒性影響。NO生成抑制率=（A非藥物處理組?A樣品組）/A非藥物處理組×100%。IC50（50%concentration of inhibition）按Reed＆Muench法計算。

2 結(jié)果與討論

石仙桃醇提取物經(jīng)過硅膠柱層析、HLPC制備等色譜分離手段，得到了12個菲類化合物，通過波譜數(shù)據(jù)分析與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對比鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為shanciol H（1）、4?甲氧基菲?2,7?二醇（2）、宿苞石仙桃（3）、2,4,7?三羥基?9,10?二氫菲（4）、blestri?arene C（5）、callosin（6）、pleionesin C（7）、deacetyl?pleionesin C（8）、5'?demethoxycyrtonesin A（9）、bletillatin A（10）、coelonin（11）、lusianthridin（12），其中化合物1~3、5~10首次從該植物中分離得到。

對化合物1~12進(jìn)行金黃色葡萄球菌的抗細(xì)菌活性篩選的結(jié)果顯示，濃度為100μmol/L時，與陽性對照藥青霉素G鈉相比[MIC50為（98.337±0）%]，化合物1、3和7對金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)抑制作用，MIC50分別為（73.198±1.767）%、（80.92±4.658）%和（54.458±0.964）%，其他化合物的抑菌效果不明顯，與先前研究報道中部分菲類化合物具有顯著抗菌活性的結(jié)果一致[20]，表明石仙桃在治療細(xì)菌感染相關(guān)疾病中可能發(fā)揮重要作用。

使用MTT法在50μmol/L時對化合物1~12進(jìn)行細(xì)胞毒活性測試，結(jié)果顯示化合物1~12在50 μmol/L時RAW264.7的存活率均在對照組的95%以上，對RAW264.7無細(xì)胞毒性。對12種化合物的NO生成抑制率的測定結(jié)果顯示，與L?NMMA對照組相比較[IC50為（37.34±0.22）μmol/L]，化合物3、4、8、11和12具有較好的抑制作用，IC50值分別為（7.37±1.06）、（28.25±0.62）、（21.73±0.27）、（5.84±0.08）和（18.66±0.61）μmol/L，其中化合物11的抑制活性最強(qiáng)，其他化合物無明顯抑制活性。

菲類化合物是石仙桃醇提取物的主要化學(xué)成分，具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗炎、抗菌、抗氧化和抗腫瘤等[6]。本文分離得到的化合物中，有研究報道表明，化合物flavanthrinin（2）具有較好的抗氧化活性和抗腫瘤活性，能夠直接清除NO自由基從而抑制NO的產(chǎn)生達(dá)到抗氧化的作用，對人口腔鱗狀細(xì)胞癌HSC?2、HSC?3、HSC?4、Ca9?22和人早幼粒白血病細(xì)胞HL?60具有抑制其生長的作用，從而顯示出有細(xì)胞毒活性[21]?；衔飈usianthridin（12）對A549、SK?OV?3、HL?60等人類癌細(xì)胞系都顯示出很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用（ED50值分別為7.7、9.4、9.8μg/mL），對移植肉瘤S180也有抑制作用，顯示出具有一定的抗腫瘤作用[22]。

此外，化合物3能抑制H2O2誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生活性氧（EC50值為8.8μmol/L），具有開發(fā)成為一種抗氧化劑的潛力[23]。Bisoli等[24]報道了化合物Callosin（6）也具有較強(qiáng)的DPPH自由基清除能力，其IC50為（17.7±0.3）μmol/L，顯示具有抗氧化活性?；衔?1能清除DPPH自由基（IC50為16.7μmol/L）從而發(fā)揮其抗氧化活性[25]?；衔?2能清除DPPH自由基產(chǎn)生抗氧化活性（IC50為22.3μmol/L）[25]。

文獻(xiàn)報道除具有抗腫瘤和抗氧化作用外，Sim?mler等[23]報道了化合物imbricatin（3）具有抗炎作用，能抑制LPS誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞產(chǎn)生NO（IC50值為20.8μmol/L），對HACaT細(xì)胞PGE2的產(chǎn)生具有抑制作用（IC50值為12.2μmol/L），且呈劑量依賴性。化合物coelonin（11）能劑量依賴性的降低IL?1β、IL?6和TNF?αmRNA的表達(dá)水平，抑制NF?κB的活性產(chǎn)生抗炎作用[26]，從抑制炎癥因子表達(dá)的角度闡明其具有抗炎作用；化合物12可抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO發(fā)揮抗炎作用[IC50為（9.6±0.3）μmol/L][27]。

綜上所述，石仙桃作為中草藥已有廣泛的應(yīng)用，石仙桃和其中的化學(xué)成分在治療疾病上有很大的用途。前人研究結(jié)果顯示本文中報道的石仙桃中的菲類化合物2和12在抗腫瘤方面具有較好的作用，化合物3、6、11和12具有抗氧化活性，提示石仙桃在抗腫瘤和抗氧化作用方面具有進(jìn)一步研究開發(fā)的潛力。本文結(jié)果顯示化合物3、11和12具有抗炎作用，與前人研究結(jié)果基本一致，推測這些菲類活性成分可能是石仙桃具有抗炎作用的活性成分。本文研究結(jié)果為石仙桃的進(jìn)一步藥用開發(fā)及臨床應(yīng)用提供了參考依據(jù)。