吳緒才 高子軍 肖莉 董補(bǔ)懷

(西安交通大學(xué)附屬紅會醫(yī)院麻醉科，陜西 西安 710054)

持續(xù)性術(shù)后疼痛是術(shù)后常見的一類疼痛綜合征，發(fā)生率為10%～50%，其中重度疼痛占2%～20%[1-3]。皮膚/肌肉切口牽拉模型是模擬臨床切口牽拉手術(shù)的一種新型持續(xù)性術(shù)后疼痛模型[4]。作為臨床常用的一種新型高選擇性α2腎上腺素能受體激動劑，右美托咪定可誘發(fā)模型動物的條件性位置范式中的條件性位置偏愛，進(jìn)而可用于模型自發(fā)痛的實(shí)驗(yàn)研究[5]。因此，本研究通過制備皮膚/肌肉切口牽拉模型，誘發(fā)持續(xù)性術(shù)后疼痛，進(jìn)而探討右美托咪定對模型小鼠疼痛行為學(xué)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 70只健康清潔級雄性C57BL/6小鼠，體質(zhì)量20～32 g，6～8周齡，購自南京君科生物工程有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動物模型的建立及分組 小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(皮膚/肌肉只切開不牽拉)和實(shí)驗(yàn)組(皮膚/肌肉切口牽拉)，每組各11只。實(shí)驗(yàn)組：腹腔注射戊巴比妥鈉(上海新亞藥業(yè)有限公司)40 mg/kg常規(guī)麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺上，除去術(shù)區(qū)(右側(cè)后肢中部)鼠毛，75%乙醇擦拭術(shù)區(qū)，于隱靜脈內(nèi)側(cè)3 mm作一皮膚切口(長約1 cm)，顯露淺層股薄肌，鈍性分離淺層肌肉，置入顯微牽開器。皮膚肌肉拉開后持續(xù)牽開1 h，用無菌生理鹽水紗布保濕切口，縫合皮膚肌肉。假手術(shù)組：僅分離暴露肌肉1 h，不牽拉，其余步驟與實(shí)驗(yàn)組一致。另選取48只健康雄性C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組和實(shí)驗(yàn)組，每組各24只，造模方法與上述相同，于術(shù)前1 d時(shí)行機(jī)械痛閾值測試，隨后實(shí)驗(yàn)組均于腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(安徽天禾藥業(yè)有限責(zé)任公司)和不同劑量的右美托咪定(四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司)(0.50、2.00、10.00 μg/kg)，每亞組各6只，給藥時(shí)間均為30 min，給藥周期均為1次。

1.2.2 機(jī)械痛閾值測試 小鼠置于有機(jī)玻璃隔間，間距1 cm，在距離桌面孔徑為40 cm的金屬網(wǎng)格平臺上進(jìn)行測試。測試前3～5 d適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，提前30 min適應(yīng)行為學(xué)測試環(huán)境。采用“up and down”法[6]進(jìn)行測試，使50%小鼠出現(xiàn)縮足反射的強(qiáng)度為機(jī)械縮足反射閾值。

1.2.3 熱縮足潛伏期測試 采用熱痛刺激儀(天津伯爾尼科技有限公司)照射小鼠足底，以照射開始至小鼠出現(xiàn)抬腿回避時(shí)為熱縮足潛伏期。實(shí)驗(yàn)中熱刺激強(qiáng)度始終一致，在環(huán)境安靜條件下進(jìn)行測試，每只小鼠均測試3次，每次間隔5 min，取均值為最終結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 小鼠皮膚/肌肉切口牽拉模型疼痛行為學(xué)檢測 兩組小鼠術(shù)前1 d機(jī)械痛閾值的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；假手術(shù)組術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)同側(cè)足底術(shù)后機(jī)械痛閾值與術(shù)前比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。與術(shù)前比較，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1～14 d機(jī)械痛閾值均顯著降低(均P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后21 d時(shí)機(jī)械痛閾值與術(shù)前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與假手術(shù)組，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1 d開始機(jī)械痛閾值顯著降低，且持續(xù)至術(shù)后10 d，隨后升高(均P<0.05)，直至術(shù)后21 d時(shí)恢復(fù)術(shù)前水平(P>0.05)，見表1。兩組手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)熱縮足潛伏期的組內(nèi)和組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見表2。

表1 兩組小鼠手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)機(jī)械痛閾值的比較

2.2 兩組小鼠腹腔注射不同劑量右美托咪定后機(jī)械痛閾值的比較 兩組小鼠給予0.9%氯化鈉注射液后機(jī)械痛閾值與給藥前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。假手術(shù)組腹腔注射不同劑量右美托咪定前后機(jī)械痛閾值比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組給予右美托咪定(0.50、2 μg/kg)30 min后機(jī)械痛閾值與給藥前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；實(shí)驗(yàn)組給予右美托咪定(10 μg/kg)30 min后機(jī)械痛閾值明顯高于給藥前(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組給予0.9%氯化鈉注射液、右美托咪定(0.50、2、10 μg/kg)前后機(jī)械痛閾值均明顯低于假手術(shù)組(均P<0.05)。見表3。

表2 兩組小鼠手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)熱縮足潛伏期比較

表3 兩組小鼠腹腔注射不同劑量右美托咪定后機(jī)械痛閾值的比較

3 討論

足底切口模型是既往探究術(shù)后疼痛的常用模型[7-9]，但該模型引起的疼痛持續(xù)時(shí)間相對較短(僅約5 d)，而臨床中腹股溝疝氣手術(shù)和胸科手術(shù)等類型的患者可發(fā)生數(shù)月甚至數(shù)年的慢性疼痛[10-11]。臨床中持續(xù)性術(shù)后疼痛的發(fā)病人數(shù)較多，但目前有關(guān)其具體發(fā)生機(jī)制并未完全闡明，因此需進(jìn)一步深入研究。臨床中持續(xù)性術(shù)后疼痛多為自發(fā)性、無外界刺激、持續(xù)性[12]，而既往的慢性疼痛模型多為冷或熱觸、機(jī)械性誘發(fā)痛，因此難以準(zhǔn)確測試并評價(jià)模型動物的自發(fā)痛行為狀況[13]。皮膚/肌肉切口牽拉模型是以大鼠為造模動物，其基因敲除大鼠較少，在基因?qū)用娴纳钊胙芯侩y度較大。因此，本實(shí)驗(yàn)以成年雄性C57BL/6小鼠為造模對象，制備皮膚/肌肉切口牽拉小鼠模型，并測定該造模方法的穩(wěn)定性和可行性，有助于今后從基因水平探究持續(xù)性術(shù)后疼痛的具體發(fā)生機(jī)制。

右美托咪定具有抗焦慮、阻滯交感神經(jīng)、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等多種作用[14-19]。此外，有研究[18-20]發(fā)現(xiàn)，右美托咪定對持久性、隨機(jī)性、自發(fā)性疼痛具有良好的鎮(zhèn)痛作用，且經(jīng)靜脈給藥對阿片類鎮(zhèn)痛藥物具有一定程度的增效功能，可降低不良反應(yīng)發(fā)生率，具有較強(qiáng)的安全性。本研究發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)同側(cè)足底術(shù)后機(jī)械痛閾值與術(shù)前比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相比術(shù)前，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1～14 d機(jī)械痛閾值均顯著降低(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后21 d時(shí)機(jī)械痛閾值與術(shù)前比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相比假手術(shù)組，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1 d開始機(jī)械痛閾值顯著降低，且持續(xù)至術(shù)后10 d，隨后升高，直至術(shù)后21 d時(shí)恢復(fù)術(shù)前水平。兩組手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)熱縮足潛伏期的組內(nèi)和組間比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究中，假手術(shù)組腹腔注射不同劑量右美托咪定前后機(jī)械痛閾值的比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組給予右美托咪定(0.50 μg/kg、2 μg/kg)30 min后機(jī)械痛閾值與給藥前比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組給予右美托咪定(10 μg/kg)30 min后機(jī)械痛閾值明顯高于給藥前(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組給予0.9%氯化鈉注射液、右美托咪定前后機(jī)械痛閾值均明顯低于假手術(shù)組(P<0.05)。結(jié)果表明，相比0.9%氯化鈉注射液，給予右美托咪定(10 μg/kg)干預(yù)可提高小鼠機(jī)械痛閾值。但本實(shí)驗(yàn)僅從行為學(xué)的角度探討右美托咪定對模型小鼠持續(xù)性術(shù)后疼痛的鎮(zhèn)痛效果，可能需要進(jìn)一步排除其對小鼠血腦屏障和記憶力等方面的影響。另外，持續(xù)性術(shù)后疼痛的發(fā)生機(jī)制較復(fù)雜，有關(guān)右美托咪定的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制、分子生物學(xué)機(jī)制和電生理學(xué)機(jī)制等目前尚未明確，仍需今后進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)以深入分析。

4 結(jié)論

通過小鼠皮膚/肌肉切口牽拉構(gòu)建持續(xù)性術(shù)后疼痛模型的方法簡單方便、安全有效、穩(wěn)定可行，且通過右美托咪定干預(yù)可有效減輕模型小鼠觸誘發(fā)痛。