程蔚蔚，孫碩彤，鄧青，徐鵬育，田笑笑

（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南 洛陽 471000）

前列腺癌多發(fā)于老年男性，其發(fā)病率在我國泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中居于第三位，僅次于膀胱癌與腎癌[1]。根治性手術(shù)是目前治療前列腺癌的主要手段，但術(shù)后復(fù)發(fā)率高達(dá)20%-50%，而復(fù)發(fā)后采用化療、放療等補(bǔ)救性治療的效果不佳[2]。因此，尋找前列腺癌早期診治與預(yù)后評(píng)價(jià)的可靠的生物學(xué)指標(biāo)，對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要意義。細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2（CHK2）是參與受損DNA的修復(fù)過程的重要因子，近年研究報(bào)道，CHK2表達(dá)水平與胃癌等多種腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)以及治療預(yù)后密切相關(guān)[3]。染色質(zhì)重染色質(zhì)重塑因子-1（Rsf-1）是乳腺癌患者中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤體積、分期、化療藥物耐藥性等具有明顯相關(guān)性[4]。但關(guān)于前列腺癌患者CHK2、Rsf1的研究還較少見，本研究檢測(cè)了前列腺癌組織中CHK2與Rsf1的表達(dá)情況，并分析其與病理特征及患者預(yù)后的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2017年 12月在我院治療的前列腺癌患者121例為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)病理檢查確診前列腺癌；⑵均行根治性手術(shù)；⑶自愿參加研究，臨床及隨訪資料完整；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴非首次確診；⑵合并糖尿病、冠心病等基礎(chǔ)疾病；⑶合并其他惡性腫瘤。另選取同期行手術(shù)治療的良性前列腺增生患者148例為對(duì)照組。觀察組年齡53～74歲，平均（65.24±9.48）歲；前列腺特異抗原（PSA）水平：≤20 ug/L 67例，＞20 ug/L 54例；TNM分期：Ⅰ期26例，Ⅱ期31例；Ⅲ期46例，Ⅳ期18例；Gleason評(píng)分：＜8分52例，≥8分69例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。對(duì)照組年齡59～78歲，平均年齡（66.84±11.42）歲，兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 檢驗(yàn)方法 采用免疫組化法檢測(cè)癌組織、良性增生組織中CHK2、Rsf1表達(dá)情況，癌組織進(jìn)行石蠟包埋、切片、脫水、修復(fù)后，HE染色，光學(xué)顯微鏡下（400×）隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野選擇200個(gè)細(xì)胞，分別由2位工作經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師雙盲閱片，觀察染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比。當(dāng)兩位醫(yī)師評(píng)估結(jié)果不一致時(shí)，取評(píng)估結(jié)果平均值。染色強(qiáng)度計(jì)分，無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按照參考文獻(xiàn)CHK2陽性細(xì)胞百分比計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)為：5%及以下計(jì)0分，6%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，75%以上計(jì)4分。Rsf-1陽性細(xì)胞百分比計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)為：25%及以下計(jì)0分，26%～50%計(jì)1分，51%～75%計(jì)2分，75%以上計(jì)3分。結(jié)果判讀取二者之積，選取中位數(shù)，分?jǐn)?shù)大于等于中位數(shù)為高表達(dá)；反之為低表達(dá)。

1.2.2 隨訪情況 術(shù)后通過電話以及門診復(fù)查對(duì)觀察組患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間至2020年12月。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。生存分析用Kaplan-Meier法，組間生存率比較用Logrank檢驗(yàn)；采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響生存預(yù)后的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CHK2與Rsf1的表達(dá)情況 觀察組CHK2低表達(dá)、Rsf1高表達(dá)比例明顯高于對(duì)照組（P＜0.001），見表1。

表1 CHK2與Rsf1的表達(dá)情況

2.2 CHK2與Rsf1表達(dá)水平與前列腺癌臨床特征的相關(guān)性 見表2。

表2 CHK2與Rsf1表達(dá)水平與前列腺癌臨床特征的相關(guān)性

2.3 CHK2與Rsf1表達(dá)水平對(duì)前列腺癌患者3年生存情況的影響 術(shù)后隨訪3年，觀察組共32例患者死亡，89例患者生存，總生存率73.55%。Kaplan-Meier生存分析表明，CHK2高表達(dá)患者3年總生存率 （56.52%）低于CHK2低表達(dá)患者（77.55%）（χ2=4.235，P=0.039）；Rsf1高表達(dá)患者總生存率（82.35%）高于Rsf1低表達(dá)患者（62.26%）（χ2=6.179，P=0.013），見圖1、圖2。

圖1 不同CHK2水平患者生存曲線

圖2 不同Rsf1水平患者生存曲線

2.4 影響前列腺癌患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素分析單因素分析結(jié)果顯示，年齡（HR=1.235，95%CI：0.743～1.530）與患者總生存時(shí)間無關(guān)（P＞0.05）。PSA（HR=3.157，95%CI：1.335～3.285）、TNM分期（HR=3.328，95%CI：1.834～4.245）、Gleason評(píng) 分（HR=2.288，95%CI：1.628～3.382）、淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移（HR=1.729，95%CI：1.598～3.453）以及CHK2（HR=3.693，95%CI：1.894～4.553）、Rsf1（HR=1.839，95%CI：1.678～3.552）是影響前列腺癌患者總體生存時(shí)間的因素（均P＜0.05）。

以患者是否生存為因變量，以上述單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素為自變量，建立Cox回歸模型，見表3。

表3 影響前列腺癌患者總生存時(shí)間的危險(xiǎn)因素分析

3 討論

手術(shù)、激素治療和放療等對(duì)局限性前列腺癌的治療效果較好，患者5年生存率可達(dá)95%，然而一旦發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或激素非依賴性前列腺癌，患者治療效果不佳[1]。尋找利于前列腺癌診治和預(yù)后評(píng)價(jià)的指標(biāo)是臨床及基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)。

在腫瘤的發(fā)病過程中，細(xì)胞受到自身以及外界等多種因素的影響,可造成細(xì)胞內(nèi)DNA的損傷，從而導(dǎo)致體內(nèi)原癌或者抑癌基因、DNA修復(fù)基因等出現(xiàn)病理改變,繼而促使細(xì)胞向異常方向轉(zhuǎn)化。CHK的重要作用是在DNA雙鏈?zhǔn)軗p時(shí)，延緩細(xì)胞周期的進(jìn)行，為DNA修復(fù)提供充足時(shí)間[3]。已有多項(xiàng)研究證實(shí)，CHK2在胃癌、卵巢癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)低頻突變狀態(tài)[5-7]。此外，研究還報(bào)道，在甲狀腺癌患者中普遍存在CHK2基因座丟失[8]；在頭頸鱗狀細(xì)胞癌患者中發(fā)現(xiàn)CHK2表達(dá)的表觀遺傳沉默[9]。因此多數(shù)研究者認(rèn)為CHK2可能是重要的抑癌基因，其通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，參與DNA損傷修復(fù)過程，從而影響惡性腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[5-8]。本研究結(jié)果顯示，觀察組CHK2低表達(dá)比例明顯高于對(duì)照組，且PSA＞20μg/L、III～I(xiàn)V期、Gleason評(píng)分≥8分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者普遍存在CHK2低表達(dá)，表明CHK2水平與前列腺癌患者臨床病理特征密切相關(guān)。

Rsf-1是由染色體11q13.5區(qū)域基因所表達(dá)的一種特殊蛋白質(zhì)，它能夠作用于蔗糖非發(fā)酵蛋白2同源物（h SNF2H），形成染色質(zhì)重塑因子（RSF）復(fù)合物，參與多種細(xì)胞生長信號(hào)的調(diào)節(jié)過程，可引起核小體的空間重構(gòu)，誘發(fā)正常細(xì)胞惡變，在腫瘤進(jìn)展過程中起著重要作用[4]。已有研究表明，Rsf-1在胃癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌組織中高表達(dá)，并且其表達(dá)水平與腫瘤體積、TNM分期存在正相關(guān)[10-12]。謝兆光等[13]研究報(bào)道，Rsf-1高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲性相關(guān)，Rsf-1表達(dá)水平越高，患者對(duì)化療藥物的耐藥性越高，預(yù)后越差。本研究結(jié)果顯示，觀察組Rsf1高表達(dá)比例高于對(duì)照組，且Rsf1表達(dá)水平與PSA水平、TNM分期、Gleason評(píng)分及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，表明Rsf1與前列腺癌的進(jìn)展有關(guān)，與上述關(guān)于其他惡性腫瘤的研究結(jié)論一致。

影響前列腺癌預(yù)后的因素較多，本研究顯示，Gleason評(píng)分和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是前列腺癌3年總體生存時(shí)間的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這與既往研究一致[14]。本研究中，CHK2高表達(dá)患者3年總生存率（56.52%）低于CHK2低表達(dá)患者（77.55%）；Rsf1高表達(dá)患者總生存率 （82.35%）高于Rsf1低表達(dá)患者（62.26%）。多因素分析顯示，CHK2低表達(dá)（HR=1.628，95%CI：1.378～2.345）、Rsf1高 表 達(dá) （HR=4.282，95%CI：2.682～4.339）是影響患者生存時(shí)間的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明CHK2、Rsf1的表達(dá)水平均與前列腺癌患者的總體生存時(shí)間密切相關(guān)，可作為評(píng)估患者長期預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，前列腺癌組織中CHK2呈明顯低表達(dá)、Rsf1明顯高表達(dá)，兩者均與患者PSA水平、TNM分期、Gleason評(píng)分以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示此兩種蛋白參與前列腺競(jìng)品的發(fā)生及發(fā)展，可作為評(píng)估前列腺癌病情及預(yù)后的參考指標(biāo)。