吳文冰，陳雯，林一

（福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院檢驗科 福建省立醫(yī)院檢驗科，福建 福州 35001）

慢性腎小球腎炎是慢性腎病和腎衰竭的主要病因，臨床表現(xiàn)為各種不同的組織學(xué)類型、與先天性腎源性免疫反應(yīng)有關(guān)的嚴(yán)重腎損害及相應(yīng)的臨床表現(xiàn)，越來越多的研究表明，免疫因素在慢性腎小球腎炎的發(fā)病及發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，故此我們通過檢測慢性腎小球腎炎患者體液免疫和細胞免疫，來分析慢性腎小球腎炎患者免疫系統(tǒng)狀況，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

1.1.1 慢性腎小球腎炎組(Ⅰ組)選取2020年1月到9月在我院腎內(nèi)科住院的慢性腎小球腎炎患者100例，男65例，女35例，平均年齡(45.08±17.96)歲，所有患者均符合1992年原發(fā)性腎小球疾病分型與治療及診斷標(biāo)準(zhǔn)專題座談會紀(jì)要的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除了乙肝相關(guān)性、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過敏性紫癜等所有可引起慢性腎炎綜合征的繼發(fā)病因。

1.1.2 正常對照組（Ⅱ組）選取同期在我院健康體檢中心體檢的患者50例，男30例，女20例，平均年齡(35.12±10.23)歲，體格檢查、胸片、心電圖、腹部B超無明顯異常。血常規(guī)、尿常規(guī)、糞便常規(guī)、血沉、C-反應(yīng)蛋白、腫瘤標(biāo)志物、凝血功能及自身抗體正常，心肝腎肺功能相關(guān)指標(biāo)都正常，乙肝表面抗原陰性，排除妊娠、哺乳、體質(zhì)指數(shù)(BMI)大于28的肥胖者的樣本。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有檢測對象在清晨、安靜狀態(tài)下空腹采集靜脈血，分別注入含促凝劑的真空采血管和含EDTA-K2抗凝的真空采血管中，含EDTA-K2抗凝的真空采血管采集后迅速、輕柔顛倒混勻，避免血液凝固，含促凝劑的真空采血管在采血后2 h內(nèi)分離得無溶血的血清，所有標(biāo)本均于6 h內(nèi)完成檢測。

1.2.2 體液免疫檢測 體液免疫檢測血清中的IgG、IgA、IgM、C3和C4。采用德國西門子的BNⅡ特定蛋白檢測儀檢測，所有定標(biāo)品、質(zhì)控品和試劑均為德國西門子原裝進口試劑。在保證儀器狀態(tài)正常，質(zhì)控在控的情況下，將含促凝劑的真空采血管分離得到的血清上機進行檢測。

1.2.3 細胞免疫檢測 細胞免疫檢測全血中的CD3、CD4、CD8、CD19（B細胞）和CD16+56+（NK細胞）。采用美國BD公司的FACSCalibur流式細胞儀檢測，試劑為美國BD公司的BD Multitest IMK Kit，定標(biāo)品為美國BD公司的BD Calibrite 3-colour Kit和BD Calibrite APC beeds，質(zhì)控品為美國貝克曼公司的IMMUNO-TROL試劑盒，細胞絕對計數(shù)采用美國BD公司的BD Trucount Tubes。將含EDTA-K2抗凝的真空采血管充分混勻后，嚴(yán)格按照BD Multitest IMK Kit操作說明書進行操作，在保證儀器狀態(tài)正常，質(zhì)控在控的情況下，將處理過的標(biāo)本嚴(yán)格按照流式細胞儀操作手冊上機檢測。

1.3統(tǒng)計方法 采用SPSS 19.0軟件分析。正態(tài)性檢驗采用Kolmogorov-Smimov檢驗，性別間差異采用Mann-Whitney U檢驗，組間比較采用t檢驗，指標(biāo)間比較采用方差分析，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性、性別間差異及指標(biāo)間統(tǒng)計 正態(tài)性檢驗采用Kolmogorov-Smimov檢驗，性別間差異采用Mann-Whitney U檢驗，年齡間差異和指標(biāo)間比較采用方差分析，檢驗結(jié)果P＞0.05，表明所有數(shù)據(jù)為正態(tài)性分布、年齡間差異、指標(biāo)間及性別間無統(tǒng)計學(xué)差異。

2.2 體液免疫檢測結(jié)果 與正常對照組比較，慢性腎小球腎炎組的IgG、IgA、IgM、C3和C4都明顯降低（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1 體液免疫檢測結(jié)果（±s）

表1 體液免疫檢測結(jié)果（±s）

注：*代表與Ⅱ組相比P＜0.05。

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2.3 細胞免疫檢測結(jié)果 與正常對照組比較，慢性腎小球腎炎組的CD3、CD4和CD8百分比明顯增加（P＜0.05），而絕對計數(shù)卻減少，其中以CD4絕對計數(shù)降低最明顯（P＜0.05），CD19和NK細胞百分比和絕對計數(shù)均明顯降低（P＜0.05），見表2。

表2 細胞免疫百分比及絕對計數(shù)檢測結(jié)果（±s）

表2 細胞免疫百分比及絕對計數(shù)檢測結(jié)果（±s）

注：*代表與Ⅱ組相比P＜0.05。

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3 討論

慢性腎小球腎炎通常由糖尿病及其并發(fā)癥、高血壓、代謝綜合征及自身免疫性疾病引起的，表現(xiàn)為多種并發(fā)癥，包括心血管疾病、高血壓、急性腎損傷、骨骼疾病、抑郁、衰弱及免疫缺陷，而免疫系統(tǒng)功能障礙是其中最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。在慢性腎小球腎炎發(fā)生和發(fā)展過程中，免疫系統(tǒng)通過不斷促進全身性炎癥反應(yīng)而發(fā)揮重要作用[1-2]。

體液免疫是機體免疫系統(tǒng)重要組成部分，通過檢測血清中的IgG、IgA和IgM、水平，可以反映機體體液免疫功能,本實驗中慢性腎小球腎炎患者的IgG、IgA和IgM都比正常人明顯降低（P＜0.05），表明慢性腎小球腎炎患者體液免疫功能降低，導(dǎo)致其容易發(fā)生感染等并發(fā)癥。慢性腎小球腎炎患者補體也較正常人明顯降低（P＜0.05），尤其C3只有正常人一半左右，這與補體在慢性腎小球腎炎中的過度激活有關(guān)。補體激活的替代途徑中C3轉(zhuǎn)化酶（C3bBb）的形成受因子H和I調(diào)控，而針對這些因子的突變或自身抗體可以導(dǎo)致C3轉(zhuǎn)化酶活性增強，導(dǎo)致活化的C3水平明顯增加，另外，IgG自身抗體、C3腎病因子（C3 nephritic factor）和穩(wěn)定C3轉(zhuǎn)化酶（stabilizes C3 convertase）等都會阻止其失活，從而導(dǎo)致補體系統(tǒng)過度激活，補體被大量消耗，補體激活產(chǎn)生的碎片在腎小球大量沉積，激活下游的炎癥級聯(lián)反應(yīng)和促進白細胞浸潤，加重慢性腎小球腎炎[3-4]。

淋巴細胞是細胞免疫的重要組成部分，其在慢性腎小球腎炎發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。淋巴細胞包括T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞，T淋巴細胞又可以分為CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞（CTL細胞），前者又稱為T輔助細胞（Th細胞），后者又稱為殺傷性T細胞（CTL細胞）。Th細胞參與免疫應(yīng)答中抗原提呈和免疫細胞的激活。CTL細胞在慢性腎小球腎炎中的作用比較復(fù)雜，一方面它可以像NK細胞一樣清除感染的和惡變的細胞，另一方面，它可以被特異的腎臟自身抗原所激活，引起局部的損傷和炎癥，并且激活的CTL細胞可以吸引更多的CTL細胞到達損傷部位，引起腎臟更大損傷以及釋放更多的特異的腎臟自身抗原，形成惡性循環(huán)[5-9]。

腎臟NK細胞可通過分泌干擾素-γ誘導(dǎo)巨噬細胞活化，從而參與急性腎臟損傷。NK細胞在慢性自身免疫性腎病中具有重要作用。它們可以被樹突狀細胞刺激并釋放細胞因子，如IFN-γ，最終促進腎臟疾病的進展。腎損傷后，腎小管上皮細胞產(chǎn)生骨橋蛋白（osteopontin），將NK細胞吸引到損傷部位，引起腎功能不全[10-12]。B細胞在慢性腎小球腎炎中的作用還不是很明確，在動物模型中，IgM抗體似乎限制了腎臟的修復(fù)，B細胞的缺乏可以促進腎臟的修復(fù)。有報道，B細胞數(shù)量增加導(dǎo)致腎損傷，損害腎臟修復(fù)[13-15]。

我們實驗結(jié)果表明，慢性腎小球腎炎患者CD3、CD4和CD8百分比明顯增加（P<0.05），而絕對計數(shù)卻減少，其中CD4絕對計數(shù)降低最明顯（P<0.05），B細胞和NK細胞百分比和絕對計數(shù)均明顯降低（P<0.05）。由于慢性腎小球腎炎患T細胞、B細胞和NK細胞數(shù)量都減少，提示他們細胞免疫功能降低，同時由于B細胞和NK細胞百分比明顯減少，導(dǎo)致CD3、CD4和CD8百分比假性增加。

綜上所述，慢性腎小球腎炎患者體液免疫和細胞免疫都比正常人降低，導(dǎo)致其容易產(chǎn)生感染并發(fā)癥，從而增加其死亡的風(fēng)險。因此，及時監(jiān)測慢性腎小球腎炎患者免疫功能狀態(tài)，對其治療具有重要的作用。