喬俊，徐征，史曉靜，程天厚

（河南省信陽(yáng)市中心醫(yī)院，河南 信陽(yáng) 464000）

顱內(nèi)感染是腦外傷患者術(shù)后最嚴(yán)重、最常見(jiàn)的院內(nèi)感染，降低手術(shù)效果，延長(zhǎng)患者住院時(shí)間，致使患者喪病[1]。現(xiàn)階段，顱內(nèi)感染病原體包括細(xì)菌、支原體、梅毒螺旋體、結(jié)核桿菌、病毒、真菌等，其中最為常見(jiàn)的是細(xì)菌[2]。如果患者術(shù)后發(fā)生顱內(nèi)感染，早期診治是降低顱內(nèi)感染患者死亡風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)鍵。但是，在顱內(nèi)感染早期，患者結(jié)核桿菌、病毒、細(xì)菌性感染等不同病原體引起的顱內(nèi)感染早期體征及癥狀極為相似，降鈣素原（PCT）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）等傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)無(wú)法鑒別不同病原體引起的顱內(nèi)感染[3]，雖然腦脊液細(xì)菌培養(yǎng)是腦外傷術(shù)后顱內(nèi)感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn),但是陽(yáng)性率不高，消耗時(shí)間長(zhǎng)，因此有必要尋找高效的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。為探究腦外傷術(shù)后顱內(nèi)感染患者神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、中樞神經(jīng)特異性蛋白（S100β）、白介素-6（IL-6）、腦髓鞘堿性蛋白（MBP）、高遷移率族蛋白B-1（HMGB-1）表達(dá)意義，本文對(duì)此進(jìn)行了相關(guān)研究，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2020年9月我院腦外傷手術(shù)患者80例及同期未行手術(shù)的患者75例作為研究對(duì)象，分別作為手術(shù)組及未手術(shù)組。手術(shù)組男性41例，女性39例；年齡36～75歲，均值（52.95±7.38）歲。未手術(shù)組男性為39例，女性36例，年齡36～78歲，均值（52.85±9.85）歲。2組患者基線資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn) 80例腦外傷手術(shù)疑似顱內(nèi)感染患者病例納入標(biāo)準(zhǔn)[4]選擇：⑴存在不典型顱內(nèi)感染的特征及癥狀，懷疑為顱內(nèi)感染；⑵腦脊液細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果顯示為陽(yáng)性，而且腦脊液或者血液中性粒細(xì)胞比例、白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢查結(jié)果表現(xiàn)異常，或者腦脊液蛋白含量、葡萄糖檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴免疫功能異常，比如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡；⑵輸血患者；血液系統(tǒng)疾?。荒[瘤；⑶其他臟器功能受損，比如心臟衰竭、呼吸衰竭、慢性腎病等；⑷術(shù)前存在泌尿系統(tǒng)、肺部等其他部位感染。

對(duì)照組含有低顱壓性頭痛、周圍神經(jīng)病、脊髓病等，腦脊液WBC<10×106/L。排除標(biāo)準(zhǔn)：心肝功能異常；血液系統(tǒng)異常；免疫系統(tǒng)缺陷；合并精神系統(tǒng)和認(rèn)知功能障礙；合并腦疝、腦部惡性腫瘤患者。

1.3 方法

1.3.1 檢測(cè)方法 腦外傷手術(shù)患者在術(shù)后行腰椎穿刺，采集4 ml腦脊液注入兩支無(wú)菌管中，第1管用于常規(guī)檢測(cè)，第2管于離心機(jī)[5]以3000 r/min轉(zhuǎn)速10 min，取沉渣用于微生物培養(yǎng)，上清保存于-80℃用于檢測(cè)NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1。感染患者行抗感染1周后以相同方法采集腦脊液、檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。對(duì)照組患者進(jìn)行頭部核磁共振檢查排除顱內(nèi)疾病，經(jīng)患者同意、在自愿情況下行腰穿取腦脊液，標(biāo)本處理及檢測(cè)項(xiàng)目相同。全部受檢者均同時(shí)抽取肘靜脈血5 ml，以3000 r/min轉(zhuǎn)速處理10 min，取上清保存于-80℃環(huán)境中成批檢測(cè)[6]。

腦 脊 液 及 血 清 NSE、MBP、S100β、IL-6、HMGB-1指標(biāo)均采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)。MPB、NSE試劑盒來(lái)源于上海酶研生物科技有限公司，HMGB-1試劑盒來(lái)源于上海恒遠(yuǎn)生物有限公司，IL-6試劑盒來(lái)源于上海研生生化有限公司；S100β試劑盒購(gòu)自深圳欣博盛生物科技有限公司，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)方法 取離心后的沉淀物，接種在巧克力瓊脂平板、血瓊脂平板，放置于35℃CO2環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間約18～24 h，挑取單菌落展開(kāi)質(zhì)譜鑒定[7]。若個(gè)別標(biāo)本無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，則需要繼續(xù)培養(yǎng)一天，如果觀察仍然未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，延遲培養(yǎng)7 d。

1.3.3 分組方法 ⑴80例腦外傷手術(shù)患者中15例細(xì)菌性顱內(nèi)感染及65例術(shù)后未發(fā)生感染；未行手術(shù)75例患者中包括非顱內(nèi)感染性疾?。X脊液WBC＜10×106/L）36例（即對(duì)照組）、非細(xì)菌性顱內(nèi)感染組39例。以上各組分別作為術(shù)后細(xì)菌性顱內(nèi)感染組（n=15）、術(shù)后非感染組（n=65）、對(duì)照組（n=36）、非細(xì)菌性顱內(nèi)感染組（n=39）。⑵依據(jù)感染嚴(yán)重程度分為輕中癥感染（n=7）、重癥感染（n=8），其中輕癥患者：CSF顏色存在輕度渾濁表現(xiàn)，WBC＜500×106/L；中度感染：CSF顏色存在中度渾濁，WBC=500×106/L；重度感染：存在腦膜刺激征、頭痛、嘔吐白色粘狀物、高熱、寒戰(zhàn)、自言自語(yǔ)，CSF顏色存在重度渾濁表現(xiàn)，WBC計(jì)數(shù)＞500×106/L；⑶依據(jù)出院時(shí)格拉斯哥預(yù)后量表評(píng)分（GOS）分為預(yù)后不良組（n=27）、預(yù)后良好組（n=19），其中GOS評(píng)分1～3分的患者納入預(yù)后不良組，4～5分患者納入預(yù)后良好組患者。⑷將顱內(nèi)感染患者不同時(shí)期分為感染急性期（感染出現(xiàn)48 h內(nèi)）、恢復(fù)期（48 h內(nèi)癥狀減輕）接受腦脊液采集。

1.4 觀察指標(biāo) ⑴對(duì)比術(shù)后細(xì)菌性顱內(nèi)感染組、術(shù)后非感染組、對(duì)照組、非細(xì)菌性顱內(nèi)感染組4組患者NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1表達(dá)水平。⑵對(duì)比細(xì)菌性感染組不同感染嚴(yán)重程度患者五指標(biāo)表達(dá)水平；⑶對(duì)比不同感染時(shí)期五指標(biāo)表達(dá)水平；⑷對(duì)比細(xì)菌性感染組不同預(yù)后效果五指標(biāo)表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0工具進(jìn)行處理，計(jì)量資料（NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1等指標(biāo)）用（±s）表示，計(jì)數(shù)資料（比如性別）采用（例，率）表示，比較分別采用Mann-Whitney U、χ2檢驗(yàn)，采用ROC曲線評(píng)估預(yù)后診斷效能，P＜0.05則提示對(duì)比具有明顯差異。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比術(shù)后細(xì)菌性顱內(nèi)感染組、術(shù)后非感染組、對(duì)照組、非細(xì)菌性顱內(nèi)感染組各指標(biāo)對(duì)比 4組患者血清及腦脊液NSE、S100β、MBP、HMGB-1指標(biāo)兩兩組對(duì)比具有明顯差異（P＜0.05），同組血清及腦脊液NSE、S100β、MBP、HMGB-1指標(biāo)對(duì)比無(wú)明顯差異（P＞0.05）；術(shù)后細(xì)菌性顱內(nèi)感染組患者血清及腦脊液IL-6較其他三組高（P＜0.05），但是其他三組對(duì)比無(wú)明顯差異（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組各指標(biāo)對(duì)比

2.2 對(duì)比細(xì)菌性感染組不同分組各指標(biāo)對(duì)比 輕中癥感染患者血清及腦脊液NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1表達(dá)水平較重癥感染患者低(P＜0.05),恢復(fù)期患者血清及腦脊液NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1表達(dá)水平較感染急性期患者低（P＜0.05），預(yù)后良好組患者血清及腦脊液NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1表達(dá)水平較預(yù)后不良組患者低（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 對(duì)比細(xì)菌性感染組不同感染嚴(yán)重程度患者各指標(biāo)對(duì)比

2.3 診斷效能 以對(duì)照組為對(duì)照，繪制ROC曲線，腦脊液NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1診斷及預(yù)測(cè)細(xì)菌性顱內(nèi)感染ROC曲線面下面積分別為0.975、0.986、0.813、0.784、0.954，見(jiàn)表3。

表3 預(yù)測(cè)及診斷細(xì)菌性感染的診斷效能

3 討論

本研究結(jié)果顯示，血清及腦脊液NSE表達(dá)水平在術(shù)后細(xì)菌性顱內(nèi)感染與非細(xì)菌性顱內(nèi)感染、術(shù)后非感染患者中表達(dá)存在差異，而且在不同感染程度、不同恢復(fù)時(shí)期中表達(dá)水平也對(duì)比具有明顯差異。這說(shuō)明，NSE在預(yù)測(cè)感染嚴(yán)重程度、預(yù)后效果評(píng)估中具有積極意義。NSE是一種糖酵解途徑中的關(guān)鍵酶，特異地存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，腦出血患者血腫直徑超過(guò)5 cm者的NSE水平明顯高于血腫直徑小于5 cm者[9]。有的學(xué)者[10]通過(guò)對(duì)比腦出血患者與健康體檢者血清NSE水平發(fā)現(xiàn)，NSE水平在發(fā)病后不斷升高，24 h內(nèi)達(dá)最高峰。

本研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌性顱內(nèi)感染組腦脊液S100β較其他三組高，S100β是影響術(shù)后顱內(nèi)感染發(fā)生的相關(guān)危險(xiǎn)因素，直接證實(shí)S100β與 術(shù)后顱內(nèi)感染的發(fā)生有關(guān)。S100β是一種鈣離子結(jié)合蛋白，生理濃度的S100β可營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)，但高濃度時(shí)可通過(guò)放大炎癥反應(yīng)，促進(jìn)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞凋亡[11]。有的學(xué)者[12]研究表明，重度腦外傷患者血清S100β水平高于中輕度損傷患者，提示sTB I可能與S100β有關(guān)，但在腦脊液中表達(dá)尚不明確。

本次研究中，術(shù)后細(xì)菌性顱內(nèi)感染組患者血清及腦脊液IL-6較其他三組高，血清及腦脊液IL-6在不同感染時(shí)期、不同感染程度、不同預(yù)后對(duì)比有明顯差異，這說(shuō)明IL-6在診斷及鑒別細(xì)菌性感染與非細(xì)菌性感染上具有重要意義，而且能夠評(píng)估感染程度、病情進(jìn)展。IL-6是免疫細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，可在機(jī)體免疫應(yīng)答以及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用，同時(shí)也是維持機(jī)體生理穩(wěn)定的重要因子。研究表[13]明，感染性疾病的病理生理變化的是宿主與致病菌的免疫反應(yīng)所致的局部或全身性炎性反應(yīng)，感染常伴有全身凝血、炎性因子大量釋放等，感染患者機(jī)體內(nèi)IL-6含量較高，可以根據(jù)該指標(biāo)判斷患者預(yù)后情況。

本次研究中，血清及腦脊液MBP、HMGB-1在不同感染程度、不同感染時(shí)期、不同預(yù)后組別中對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這說(shuō)明MBP、HMGB-1測(cè)定能了解患者恢復(fù)情況，能有效的評(píng)估患者預(yù)后，指導(dǎo)臨床治療。對(duì)于正常人而言，機(jī)體內(nèi)的MBP水平相對(duì)較低，當(dāng)患者顱腦損傷后，腦脊液中的MBP水平將會(huì)迅速上升。HMGB-1會(huì)加重心血管疾病患者炎性反應(yīng)，加重心血管損傷程度，還可能抑制細(xì)胞或組織修復(fù)，對(duì)評(píng)估多發(fā)傷患者病情及預(yù)后有一定價(jià)值[14]。

本次研究中，腦脊液NSE、S100β、IL-6、MBP、HMGB-1診斷及預(yù)測(cè)細(xì)菌性顱內(nèi)感染ROC曲線面下面積分別為0.975、0.986、0.813、0.784、0.954。這提示，NSE、S100β、HMGB-1能夠診斷及鑒別細(xì)菌性顱內(nèi)感染，但是IL-6預(yù)測(cè)效能不高，原因可能在于術(shù)后患者不管是否發(fā)生細(xì)菌性感染炎癥因子也增高，鑒別細(xì)菌感染與其他病原體感染的效能不高，與既往研究[15]一致。

綜上所述，NSE、S100β、HMGB-1能夠診斷及鑒別細(xì)菌性顱內(nèi)感染，在早期診斷鑒別、指導(dǎo)制定救治方案、病情評(píng)估、預(yù)后效果評(píng)估中具有重要作用。