柯帥，徐消寒，苗明亮

（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

前列腺癌是男性生殖泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，多發(fā)于老年人群，具有較高的發(fā)病率和病死率[1]。前列腺癌的發(fā)生與家族遺傳、飲食結(jié)構(gòu)改變、吸煙、性激素水平等因素密切相關(guān)，患者常出現(xiàn)排尿、排便困難等局部壓迫癥狀，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和生命安全[1-2]。根治性切除手術(shù)是前列腺癌的有效治療方式，經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)是其中的一種新型微創(chuàng)術(shù)式，具有精確切割、組織損傷小等優(yōu)點，可在完整切除病灶的基礎(chǔ)上有效改善患者局部壓迫癥狀[3]。但晚期患者術(shù)后仍存在一定的復(fù)發(fā)率和骨轉(zhuǎn)移率，導(dǎo)致預(yù)后較差[3]。因此，積極尋求前列腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測指標(biāo)對于改善患者預(yù)后具有重要意義。鈣黏蛋白E和Stathmin-1與前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展具有密切聯(lián)系，下調(diào)鈣黏蛋白E的表達(dá)和上調(diào)Stathmin-1的表達(dá)均被認(rèn)為會增加前列腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移風(fēng)險[4-5]，但二者在前列腺癌經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后復(fù)發(fā)中的預(yù)測價值仍不明確，尚未見有鈣黏蛋白E和Stathmin-1于前列腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)關(guān)系的研究報道?；诖?，本研究主要探討鈣黏蛋白E、Stathmin-1表達(dá)在前列腺癌患者經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后復(fù)發(fā)中的預(yù)測價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性選取2016年3月至2018年6月期間于我院經(jīng)手術(shù)治療的108例前列腺癌患者作為研究對象，對其臨床資料和癌組織標(biāo)本進(jìn)行分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合《前列腺癌診斷治療指南》中前列腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]者；⑵直腸超聲檢查顯示前列腺增大體積＞30 ml者；⑶均行經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)治療，并保存癌組織標(biāo)本者；⑷均完成2年隨訪，且具備完整的臨床及隨訪資料者。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并嚴(yán)重肝腎功能障礙、免疫性疾病者；⑵合并其他惡性腫瘤、嚴(yán)重心腦血管疾病者；⑶合并急性或嚴(yán)重機(jī)體炎癥反應(yīng)者；⑷隨訪資料不完整者。本次研究已通過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。依據(jù)入組患者隨訪2年后的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移情況將其分為兩組：有復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的復(fù)發(fā)組（n=32）和無復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的未復(fù)發(fā)組（n=76），復(fù)發(fā)組中年齡55～80歲，平均年齡（65.83±9.64）歲；TNM分期T1期-T2期19例，T3期-T4期13例；并發(fā)尿路梗阻21例；平均手術(shù)時間（94.46±4.72）min；未復(fù)發(fā)組中年齡57～83歲，平均年齡（66.17±10.25）歲；TNM分期T1期-T2期31例，T3期-T4期45例；并發(fā)尿路梗阻58例；平均手術(shù)時間（93.84±4.25）min，與復(fù)發(fā)組比較無明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 組織芯片制備 兩組患者的癌組織樣本經(jīng)10%甲醛溶液固定后，常規(guī)處理并石蠟包埋，按照病理結(jié)果標(biāo)記組織靶點，準(zhǔn)備合適大小的受體蠟塊。采用組織芯片制作儀（美國Beecher Instrument公司）制作組織芯片，每個組織芯片含128個位點。制作完成后進(jìn)行4μm厚度連續(xù)切片，切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水后進(jìn)行EDTA高溫抗原修復(fù)、PBS沖洗、H2O2孵育，去除內(nèi)源性過氧化物酶活性。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 按照免疫組織化學(xué)試劑盒（北京中杉金橋生物公司）的操作說明進(jìn)行染色，PBS沖洗3次后滴加正常血清，室溫孵育15 min，以兔抗人鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白單克隆抗體（均購自美國Santa Cruz公司）作為一抗，抗體稀釋至1:100，4℃過夜。采用PBS沖洗3次后滴加即用型二抗，經(jīng)孵育15 min、PBS沖洗、DAB顯色劑顯色、蘇木精復(fù)染、脫水、封固等操作后，以PBS代替一抗作陰性對照，在顯微鏡下觀察切片染色情況，每張切片至少觀察5個高倍視野。

1.2.3 結(jié)果判定 鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白的染色結(jié)果以細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，檢測結(jié)果依據(jù)兩種蛋白的染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分，染色強(qiáng)度無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色或棕褐色為2分；陽性細(xì)胞比例：1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。將陽性細(xì)胞比例得分與染色強(qiáng)度得分相乘判定最終檢測結(jié)果，總分1～2分為陰性，≥3分為陽性[7]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，本研究中涉及的計數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗；計量資料采用“±s”表示，兩組間比較采用兩樣本t檢驗，多因素分析采用Logistic回歸模型，采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白表達(dá)及其與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系 經(jīng)免疫組化染色檢測后，108例前列腺癌患者中鈣黏蛋白E陽性表達(dá)47例（43.52%），Stathmin-1蛋白陽性表達(dá)79例（73.15%）。不同TNM分期、Gleason評分、術(shù)前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的前列腺癌患者其鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白的陽性表達(dá)率存在明顯差異（P＜0.05），不同年齡、術(shù)前前列腺特異性抗原（prostate specific antigen,PSA）水平、手術(shù)切緣情況前列腺癌患者的鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表達(dá)無明顯差異（P＞0.05），見表1。經(jīng)Spearman分析結(jié)果顯示，前列腺癌組織中的鈣黏蛋白E和Stathmin-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.795，P＜0.05）。

表1 鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系（n/%）

2.2 前列腺癌患者經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析 單因素分析結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組在年齡、術(shù)前PSA水平、飲酒史、吸煙史、合并基礎(chǔ)疾病及術(shù)中出血量方面比較無明顯差異（P＞0.05），兩組在術(shù)前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表達(dá)方面存在明顯差異（P＜0.05），見表2。

表2 前列腺癌患者經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析（n/%）

2.3 影響前列腺癌患者經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素Logisitic回歸分析 以前列腺癌患者經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后是否出現(xiàn)復(fù)發(fā)作為因變量，將單因素中差異存在統(tǒng)計學(xué)意義的因素（術(shù)前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表達(dá)）作為自變量，并進(jìn)行賦值，術(shù)前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（無=0，有=1）、鈣黏蛋白E表達(dá)（陽性=0，陰性=1）、Stathmin-1蛋白表達(dá)（陰性=0，陽性=1），并將其納入Logisitic回歸模型中，結(jié)果顯示：術(shù)前有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、鈣黏蛋白E表達(dá)陰性和Stathmin-1蛋白表達(dá)陽性是前列腺癌患者經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立預(yù)測因素，見表3。

表3 影響前列腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素Logisitic回歸分析

3 討論

前列腺癌是一種較為常見的男性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，在歐洲老年男性中的發(fā)病率較高，致死率較高，嚴(yán)重威脅男性健康與生命安全。經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)在治療晚期前列腺癌和伴發(fā)尿路梗阻方面具有明顯優(yōu)勢，可在完整切除前列腺癌灶組織基礎(chǔ)上有效解決患者的局部壓迫癥狀，改善患者術(shù)后生活質(zhì)量[8]。但前列腺癌的術(shù)后仍存在35%左右的復(fù)發(fā)率[9]，而傳統(tǒng)的臨床病理數(shù)據(jù)難以準(zhǔn)確預(yù)測某些前列腺癌患者復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。因此，尋找和發(fā)掘可靠的生化指標(biāo)以評估前列腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險就顯得尤為重要。

鈣黏蛋白E存在于上皮細(xì)胞膜上，是參與機(jī)體上皮細(xì)胞和鈣黏蛋白之間組成的一種重要成分，其表達(dá)缺失可對機(jī)體組織內(nèi)的細(xì)胞黏附情況造成影響，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的分化能力[10]。多項研究指出[11-12]，下調(diào)鈣黏蛋白E的表達(dá)可能有助于前列腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，108例前列腺癌患者中鈣黏蛋白E陽性表達(dá)率為43.52%，鈣黏蛋白E在TNM分期T3期-T4期、Gleason評分≥7分和術(shù)前有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的前列腺癌患者組織中的陽性表達(dá)率相比于T1期-T2期、Gleason評分<7分和無淋巴轉(zhuǎn)移患者明顯更低，其中Gleason評分是前列腺癌分級的常用方法，其分?jǐn)?shù)越高，提示前列腺癌的病情程度越嚴(yán)重。由此可見，鈣黏蛋白E的低表達(dá)與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，鈣黏蛋白E陰性是前列腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的重要影響因素，提示其低陽性表達(dá)率可能對于臨床上評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)具有較好的參考價值。由于鈣黏蛋白E表達(dá)降低導(dǎo)致其黏附性降低，增加腫瘤細(xì)胞之間的解離，進(jìn)而缺乏接觸抑制并開始無線增殖，局部脫落，從而導(dǎo)致其浸潤和轉(zhuǎn)移，增加患者復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移風(fēng)險[13]。

Stathmin-1蛋白屬于一種微管不穩(wěn)定蛋白，已被研究報道在胃癌、乳腺癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中具有較高陽性表達(dá)率，與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[14]。本研究中結(jié)果顯示，108例前列腺癌患者中Stathmin-1蛋白陽性表達(dá)率為73.15%，Stathmin-1蛋白在TNM分期T3期-T4期、Gleason評分≥7分和術(shù)前有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的前列腺癌患者組織中具有較高的陽性表達(dá)率，并與鈣黏蛋白E呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。目前對于Stathmin-1蛋白參與腫瘤惡性轉(zhuǎn)變過程的機(jī)制尚不十分清楚，但已有多項研究發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)陽性率與腫瘤的較高增殖活性有關(guān)，并能參與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移。本研究還發(fā)現(xiàn)Stathmin-1蛋白陽性表達(dá)是前列腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立預(yù)測因素，其對前列腺癌復(fù)發(fā)患者的影響機(jī)制可能與Stathmin-1蛋白的高表達(dá)影響微管動力和紡錘體的形成，進(jìn)而影響有絲分裂，使細(xì)胞周期分布改變，并影響細(xì)胞的生物學(xué)行為有關(guān)[15]。臨床上可將其與前列腺癌鈣黏蛋白E一起檢測用于指導(dǎo)和預(yù)測前列腺癌患者的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，以盡早采取干預(yù)措施，改善患者預(yù)后。

綜上所述，鈣黏蛋白E在經(jīng)尿道等離子前列腺剜除術(shù)后復(fù)發(fā)患者的組織中呈低表達(dá)，Stathmin-1蛋白則呈高表達(dá)，鈣黏蛋白E表達(dá)陰性和Stathmin-1蛋白表達(dá)陽性均是前列腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的重要影響因素，對于臨床上前列腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險評估具有一定的應(yīng)用價值。