（沈陽二四二醫(yī)院病理科，遼寧 沈陽 110000）

乳腺癌是臨床常見病、多發(fā)病。近幾年，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升的勢態(tài)，其在很大程度上對(duì)民眾的生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重影響[1-2]。在對(duì)乳腺癌患者開展化療過程中，通常需要應(yīng)用蒽環(huán)類藥品。但現(xiàn)如今尚缺少關(guān)于蒽環(huán)類藥品劑量強(qiáng)度有效靶標(biāo)。拓?fù)洚悩?gòu)酶2A（TOP2A）屬于核基質(zhì)主要成分。其在核內(nèi)能夠體現(xiàn)出相關(guān)效用[3]。該物質(zhì)參與了DNA轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、修復(fù)和重組過程，是蒽環(huán)類藥品有效的作用靶點(diǎn)。本文全面探究乳腺癌患者拓?fù)洚悩?gòu)酶2A基因變異臨床病理意義，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年12月至2019年12月本院所收治的218例浸潤性乳腺導(dǎo)管癌患者為研究對(duì)象。受試者年齡26～71歲，平均年齡（45.32±2.62）歲?；颊咴诮邮苁中g(shù)治療以前，沒有進(jìn)行過分子靶向治療或者放化療。病理樣本在離體后30 min通過濃度為10%的甲醛溶液完成固定、脫水、石蠟包埋、切片與HE染色。邀請(qǐng)2位高資歷病理科醫(yī)師閱片并診斷，確定受試者為浸潤性乳腺癌。

1.2 方法

1.2.1 試劑以及探針 本實(shí)驗(yàn)所利用的免疫組化檢測為福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)的HER-2/neu、Ki-67、PR、ER。熒光原位雜交檢測試劑盒為廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司生產(chǎn)的HER2/neu/TOP2A/CSP17多色檢測試劑盒。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 ①FISH：將玻片利用常規(guī)方式脫蠟復(fù)水，于100 ℃環(huán)境下水浴處理，時(shí)間為20 min。后進(jìn)行蛋白酶消化，時(shí)間為10 min，85 ℃變性，37 ℃雜交過夜，開展DAPI染核和封片，發(fā)生熒光反應(yīng)，應(yīng)用顯微鏡觀察反應(yīng)結(jié)果。②IHC法：取用玻片，利用常規(guī)方法實(shí)施脫蠟復(fù)水，有效修復(fù)抗原。一抗孵育4 ℃過夜、二抗孵育30 min，室溫。經(jīng)DAB染色，實(shí)施蘇木精復(fù)染，脫水，透明封片，于顯微鏡下觀測結(jié)果。

1.3 具體判讀標(biāo)準(zhǔn) 針對(duì)于TOP2A具體判定標(biāo)準(zhǔn)，利用本實(shí)驗(yàn)所使用的試劑盒推薦標(biāo)準(zhǔn)完成。癌瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)共計(jì)30個(gè)，統(tǒng)計(jì)出Ratio值。TOP2A擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)為：①拓?fù)洚悩?gòu)酶2A信號(hào)點(diǎn)為簇狀或者點(diǎn)簇狀。②TOP2A/CSP17比例在2.0以上。TOP2A缺失標(biāo)準(zhǔn)為：TOP2A/CSP17比例在8.0以下。針對(duì)于HER-2中的FISH以及IHC測定利用我國乳腺癌HER2檢測指南中的判讀標(biāo)準(zhǔn)完成該項(xiàng)工作。IHC、PR、ER判讀標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合乳腺癌雌激素孕激素受體免疫組織化學(xué)檢測指南中的相關(guān)條目完成。分子分型分為Luminal A型以及Luminal B型、基底細(xì)胞型與HER-2過度表達(dá)型，細(xì)則為：Luminal A型：Ki67在14%以下、HER2-、ER+和（或）PR+。Luminal B型：其分為兩類，其一、ER+或/和PR+，Ki67在14%以上；其二、HER2+、ER+或/和PR+。HER-2過度表達(dá)型：Ki67呈高度表達(dá)、HER2+、PR-、ER-?；准?xì)胞型：HER2-，PR-、ER。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)利用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)本研究產(chǎn)生的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對(duì)數(shù)據(jù)內(nèi)的計(jì)量資料開展Spearman相關(guān)性分析，計(jì)數(shù)資料實(shí)施χ2檢驗(yàn)分析，若P＜0.05，證實(shí)相關(guān)數(shù)據(jù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者TOP2A變異和HER2基因相關(guān)性 TOP2A基因擴(kuò)張共計(jì)52例、缺失10例、總變異例數(shù)為62例。TOP2A以及HER2基因擴(kuò)增共計(jì)52例，在此其中共計(jì)10例TOP2A基因缺失但HER2基因擴(kuò)張；有46例受試者TOP2A基因不存在異常表達(dá)，但存在HER2基因擴(kuò)張。和TOP2A基因變異率相比，HER2基因變異率明顯更高，HER2基因變異率和TOP2A基因變異率存在顯著相關(guān)性（r=0.698，P＜0.05），HER2蛋白變異和TOP2A基因變異存在相關(guān)性（r=0.3998，P＜0.05）。見表1。

2.2 TOP2A基因變異和臨床病理特點(diǎn)關(guān)聯(lián)性 TOP2A基因變異和患者腫瘤直徑、年齡無明顯相關(guān)性，P＞0.05，而與組織學(xué)分級(jí)情況、淋巴結(jié)數(shù)量存在明顯相關(guān)性，P＜0.05。見表2。

表1 乳腺癌患者TOP2A變異和HER2基因相關(guān)性

表2 TOP2A基因變異和臨床病理特點(diǎn)關(guān)聯(lián)性

2.3 TOP2A基因于各個(gè)乳腺癌分子分型內(nèi)變異情況 本組內(nèi)，分子分型為Luminal A型共計(jì)30例、TOP2A基因擴(kuò)增0例、缺失2例、正常28例。分子分型為Luminal B型共計(jì)130例、TOP2A基因擴(kuò)增34例、缺失2例、正常94例。HR2過度表達(dá)型共計(jì)46例，TOP2A基因擴(kuò)增18例、缺失6例、正常22例。基底細(xì)胞型共計(jì)12例，其中TOP2A基因擴(kuò)張以及缺失均為0例，正常12例。TOP2A基因于Luminal B型以及HER2過表達(dá)型呈現(xiàn)為高表達(dá)，其在Luminal A型以及基底細(xì)胞型為低表達(dá)。乳腺癌患者臨床分子分型和TOP2A基因變異情況無相關(guān)性（r=-0.189，P＞0.05）。

3 討論

諸多文獻(xiàn)表明，TOP2A蛋白屬于蒽環(huán)類化療藥物直接作用靶點(diǎn)。TOP2A參與了轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞復(fù)制、有絲分裂和基因重組等過程，TOP2A和乳腺癌患者化療敏感度與預(yù)后存在顯著關(guān)聯(lián)性[4]。利用IHC法測定乳腺癌受試者病變組織內(nèi)TOP2A蛋白表達(dá)有著良好的公允性。有文獻(xiàn)表明，TOP2A蛋白與乳腺癌組織內(nèi)表達(dá)率在1%～90%，中位表達(dá)率大約為30%。有學(xué)者依照10%的截?cái)嘀禍y定TOP2A陽性表達(dá)率范圍為50%～80%[5]。人體的HER基因和TOP2A基因均在17號(hào)染色體中。上述二者位置相鄰[6]。有研究表明，在HER2陽性乳腺癌患者群體中，有89%～90%的患者存在TOP2A基因缺失或者擴(kuò)增現(xiàn)象，但在HER2正常群體中則少有TOP2A基因變異情況。因此可以認(rèn)為：上述兩類基因?qū)儆趨f(xié)同變異，到HER2基因完成擴(kuò)增以后，染色體發(fā)生重排，進(jìn)而使TOP2A基因缺失或者擴(kuò)張。于HER2基因正常乳腺癌患者中也會(huì)存在TOP2A變異現(xiàn)象[7]。有調(diào)查表明[8]，HER2基因正常群體中，TOP2A缺失以及擴(kuò)張概率分別達(dá)到了3.7%以及6.6%。而在HER2基因擴(kuò)增樣本內(nèi)，TOP2A基因缺失以及擴(kuò)增則達(dá)到了24.0%以及26.5%。由此可見，TOP2A基因變異于HER2擴(kuò)增標(biāo)本內(nèi)更容易出現(xiàn)TOP2A表達(dá)。拓?fù)洚悩?gòu)酶2A為基因轉(zhuǎn)錄、復(fù)制所需要的關(guān)鍵物質(zhì)。發(fā)生TOP2A基因變異的乳腺癌患者往往預(yù)后不佳，生存期較短。這一點(diǎn)重點(diǎn)體現(xiàn)在TOP2A基因缺失患者群體之中，其預(yù)后往往更差[9]。

本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過對(duì)218例乳腺癌受試者實(shí)施HER2蛋白、TOP2A基因、HER2蛋白、分子分型和組織分型等臨床病理特點(diǎn)開展分析，結(jié)果表明：TOP2A變異率為28.4%。該項(xiàng)報(bào)道和國內(nèi)文獻(xiàn)相似。該基因的擴(kuò)張和HER2基因擴(kuò)張與其自身蛋白表達(dá)存在極大關(guān)聯(lián)性。其一般發(fā)生于HER2基因擴(kuò)張的受試者之中。本組內(nèi)僅有2例TOP2A基因缺失受試者同時(shí)出現(xiàn)了HER2基因沒有擴(kuò)張的情況。另外值得說明的是，TOP2A基因變異和癌瘤組織分級(jí)以及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)也存在關(guān)聯(lián)性。TOP2AR基因變異和乳腺癌疾病分子分型無關(guān)聯(lián)性[10-14]。本實(shí)驗(yàn)研究表明，與基底細(xì)胞形態(tài)以及Luminal A型內(nèi)TOP2A基因變異率較低，而在HER2過表達(dá)型以及Luminal B型變異率則較高。TOP2A基因變異一般集中于分化不佳的癌瘤受試者之中。這也在根本上代表了TOP2A基因變異和乳腺癌患者預(yù)后不良存在關(guān)聯(lián)性。其屬于預(yù)測患者疾病預(yù)后情況的公允化指標(biāo)。

針對(duì)于乳腺癌患者來講，為其開展新輔助化療已然成為了臨床常用方法。但值得注意的是，上述指標(biāo)是否能夠預(yù)測化療效率還沒有形成一致的觀點(diǎn)。相關(guān)研究證實(shí)：對(duì)于發(fā)生TOP2A基因擴(kuò)增的患者在接受化療時(shí)具有良好的總生存率和無病生存率，而對(duì)于TOP2A基因缺失的機(jī)制和相關(guān)臨床意義尚未被深入性研究，這也是日后臨床進(jìn)一步研究的方向，以期為日后臨床實(shí)施個(gè)體化治療以及提升臨床治療成效提供理論依據(jù)。