談曉梅，田 鑫，杜麗超，牛德彪，惠旭潔，韓若羽，鄭吉昌，柳東陽，楊雪峰

(河南科技學院 動物科技學院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

傳統(tǒng)的動物骨骼標本制作方法主要有：土埋法、蟲蝕法、漚制法、煮制法和晾曬法等[1]。這些方法存在兩個共同缺點：① 骨骼的前期處理花費時間較長，如利用土埋法需要兩年自然腐敗分解后方能獲得豬骨骼[2]。② 后期一般都包括脫脂和漂白環(huán)節(jié)，不但比較繁瑣費時，且使用的脫脂劑和漂白劑具有一定的腐蝕性，存在安全隱患和污染環(huán)境的潛在風險。這些缺點在一定程度上限制了動物骨骼標本的制作。

課題組在制作多種動物骨骼標本的過程中，摸索出一種既高效又環(huán)保的標本制作方法—高壓法，即利用高壓蒸汽滅菌鍋的高壓作用進行動物骨骼的前處理，后期處理中無需脫脂和漂白環(huán)節(jié)，在較短時間內(nèi)即可制作出標本。目前此方面的研究報道較少，利用該法制作了貓的全身骨骼標本，以期為其他種動物骨骼標本的制作，提供一種高效又環(huán)保的方法。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

貍花貓，7歲，3.12 kg，腎衰而亡后，主人贈與河南科技學院教學動物醫(yī)院。

1.2 主要器材

高壓蒸汽滅菌鍋，骨鉆，手術(shù)刀，解剖剪，手術(shù)鑷子，解剖盤，一次性10 mL注射器，牙刷，紗布，普通棉線，鞋用膠，細銅絲，鐵絲等，均由河南科技學院教學動物醫(yī)院提供。

1.3 方法

1.3.1 剝皮和去內(nèi)臟

將貓側(cè)放于解剖盤上，首先用手術(shù)刀從腹中線劃開皮膚，然后分別向兩側(cè)方向分離全身皮膚與肌肉，直至皮膚剝離掉。由于貓身體已僵硬，剝皮過程中不可強行撕扯，尤其是前后肢末端。最后打開腹腔，將肝、胃、脾、大小腸、腎、膀胱等內(nèi)臟器官一一取出。

1.3.2 分離部分連結(jié)

如果動物體格較大或高壓蒸汽滅菌鍋容積較小時，應(yīng)該按照其解剖學結(jié)構(gòu)特征對頭頸部和四肢部連結(jié)進行簡單的分離。具體分離部位是：在枕寰關(guān)節(jié)處剪斷周圍的肌肉和韌帶，將頭部和頸部分離；在肩帶部剪斷肩帶肌，將前肢與軀干部分離；在髖關(guān)節(jié)處，剪斷周圍的肌肉和韌帶，將后肢和軀干部分離；在最后腰椎和薦骨前端之間破壞椎間盤，使軀干前部與后部分離；在薦骨后端與第一尾椎之間破壞椎間盤，可將尾巴與軀干部分離。在本試驗中，由于高壓蒸汽滅菌鍋的容積較大，未將尾巴與薦骨分離。

1.3.3 高壓處理

將分離好的頭、前肢、后肢、前后部軀干擺放入解剖盤內(nèi)，置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)進行高壓處理，參數(shù)為0.10～0.14 MPa(120～126 ℃)8 min，高壓完成后降壓接近0 MPa時取出解剖盤，冷卻后即可剔肉。

1.3.4 剔肉

有些部位如頭骨、四肢近端骨經(jīng)高壓處理后已經(jīng)部分骨肉分離，可以快速地剔去肌肉和韌帶，獲得骨骼，如頭骨、四肢近端骨。在剔除前后腳骨的肌肉和韌帶時，務(wù)必做好標記，分別用紗布包起來，并盡量保留結(jié)構(gòu)的完好，以防散亂和遺失以及方便后期串裝固定。在剔除軀干骨凹陷處的細小肌肉和韌帶時，可以使用牙刷刷除。在處理胸廓部位時，盡量保留其各連接處的結(jié)構(gòu)完整性，這將為后期的連接固定節(jié)約大量時間。

從枕骨大孔處插入注射器針頭，搗碎腦髓后多次注射清水沖凈。用一根粗細適當?shù)蔫F絲由前向后插入椎管內(nèi)破壞脊髓，然后向椎管內(nèi)多次注入清水沖凈脊髓。脊柱各椎骨間的椎間盤可以去掉，使各椎骨散開；也可以不去掉椎間盤，保留各椎骨緊密連結(jié)的原狀。本試驗采用不處理椎間盤的方法、效果好、節(jié)省時間、減少了后期串裝工作量。

1.3.5 清洗油脂

肌肉等軟組織剔除完成后，需要清洗掉骨骼內(nèi)外的油脂。在清水中放入適量的日常用洗潔精攪勻，將骨骼置于其中浸泡0.5 h后漂洗出來。再重復(fù)用新鮮的洗潔精溶液浸泡骨骼2次，即可將骨骼上的油脂去除干凈。對于長骨，需要在其骨體上用骨鉆鉆幾個小孔，并用注射器往骨髓腔中反復(fù)注射洗潔精溶液，以沖洗出骨髓腔中的油。所有骨骼自然晾干后即可進行連接固定。

1.3.6 串裝固定

提前準備好固定骨骼標本用的帶前后2個支柱的標本架。串裝骨骼時，先分別把前后肢的小骨骼用膠水粘牢固定，大骨骼用細鐵絲直接固定，然后按照貓的解剖學結(jié)構(gòu)特征和自然姿勢，用稍粗的鐵絲把頭骨和軀干骨固定在支架上，之后再把四肢骨固定在軀干上，注意調(diào)整好各部位的高度。

2 結(jié)果與分析

利用高壓法制作的貓頭部骨骼見圖1A和圖1B；軀干部骨骼的頸椎、胸廓和腰椎除個別肋軟骨有誤折斷需粘接修復(fù)外，其他自然連接均比較完整，見圖1C和圖1D；髖骨、薦骨和尾巴骨骼自然連接完好，見圖1E；前肢骨見圖1F；不包括髖骨的后肢骨見圖1G；全身骨骼標本見圖1H，標本解剖結(jié)構(gòu)完整、真實自然、形態(tài)逼真、立體感強、易于保存。

圖1 貓全身骨骼標本

3 討論與結(jié)論

制作動物骨骼標本時，其年齡、性別、體重、營養(yǎng)狀況等因素都應(yīng)該考慮，特別是年齡。一般選擇成年動物，因為未成年動物的骺軟骨板未完全骨化，用于制作骨骼標本時，兩端的骨骺與骨干易在此處分離；老齡動物較易出現(xiàn)骨質(zhì)疏松，會影響標本的制作質(zhì)量。性別以雄性為佳，雄性骨骼強健，做出的骨骼標本質(zhì)量較好[3]。體重和營養(yǎng)狀況適中較好。

此外，最好選用健康動物，以防因人畜共患病或不明原因死亡的動物對公共衛(wèi)生安全構(gòu)成潛在威脅。當因病死亡的珍稀動物需要制作骨骼標本時，推薦使用本試驗采用的高壓法。在這類特殊動物的骨骼標本制作過程中，高壓前的處理如剝皮、去內(nèi)臟、分離部分連結(jié)處等環(huán)節(jié)需要做好個人安全防護和廢棄物的無害化處理，一般用時較短。但經(jīng)過高壓滅菌后，可以安全操作長時間暴露環(huán)境的各環(huán)節(jié)。

高壓蒸汽滅菌鍋是各實驗室極為常見的設(shè)備，也是消毒滅菌的理想設(shè)備，消毒徹底，用時較短，一般控制在15-30 min內(nèi)即可達到高壓滅菌的作用。當用于處理帶肌肉的骨骼時，短于15 min時是利用其高壓作用，大于15 min就是利用其既高壓又滅菌的作用了，需要的具體時間主要根據(jù)壓力的大小、動物的年齡、骨骼上肌肉的厚度和部位等來確定，并需要注意不要因過度高壓而破壞骨質(zhì)，從而影響標本制作質(zhì)量。本試驗只利用其高壓作用，0.10～0.14 MPa(120～126 ℃)維持8 min，骨質(zhì)未破壞，冷卻后剔肉容易又干凈，并且除極少肋軟骨有誤折斷需粘接修復(fù)外，很好的保留了軀干骨的各椎間盤、胸廓結(jié)構(gòu)、薦髂關(guān)節(jié)和尾巴等部位的完整性，即這些部位不需要再用膠水粘結(jié)，效果比較理想，高效省時。這也為串裝整個骨骼標本省去了大量時間。

傳統(tǒng)骨骼標本的制作方法中多需要利用脫脂劑如NaOH、Na2CO3[2]、汽油[4]、二甲苯、乙醚[5]等進行脫脂處理，但本試驗不需要這些具有腐蝕性、易燃性和對環(huán)境有害的化學試劑，因為經(jīng)過高壓處理的骨骼內(nèi)外脂肪已經(jīng)發(fā)生變化和部分溢出，其脂肪較其他方法更易去除，只需要利用生活中常用的洗潔精、洗衣粉等進行清洗即可。本試驗以價廉又常見的洗潔精為清洗劑，不但去除油脂干凈徹底，成本低廉，而且安全無毒又環(huán)保。

漂白處理并非制作骨骼標本必須的環(huán)節(jié)，是否需要應(yīng)視情況而定。漂白的目的主要是增加骨骼標本的美觀性，缺點是骨骼失去了原來的真實顏色，漂白過度時還會破壞骨質(zhì)。常用的漂白劑主要有過氧化氫、次氯酸、84消毒液、草酸等[6]，這些漂白劑也具有不同程度的腐蝕性和環(huán)境污染性，在使用過程中切記要做好個人和環(huán)境的安全防護。本試驗未進行漂白處理，不但制作出了本色的骨骼標本，而且省去了這些危險和有害的漂白劑，節(jié)約了制作成本。這種高效又環(huán)保的貓骨骼標本制作方法也適用于其他動物，值得推廣應(yīng)用。此外，為延長成品骨骼標本的保存時間，建議在串裝固定前把各散骨刷清漆加以保護，不建議噴白漆。

利用高壓蒸汽滅菌鍋的高壓作用，制作出的貓全身骨骼標本解剖學結(jié)構(gòu)完整、連接穩(wěn)定、真實自然、立體感強、易于保存。該制作方法具有簡單省時、高效環(huán)保、成本低廉等優(yōu)點，為其他動物骨骼標本的制作提供了參考。