王心媛，王貴平

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410128)

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)又稱”藍(lán)耳病” ,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起的以母豬嚴(yán)重繁殖障礙、斷奶仔豬普遍發(fā)生呼吸道癥狀為主要特征的疾病。豬圓環(huán)病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)又稱斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)，是由豬圓環(huán)病毒II型(Porcine circovirus type-II ,PCV-II)感染引起的以斷奶仔豬進(jìn)行性消瘦、呼吸困難、虛弱及淋巴結(jié)腫大為主要特征的傳染性疾病。

臨床上常發(fā)生豬繁殖與呼吸綜合征與豬圓環(huán)病毒II型等的混合感染，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重危害。此外，由于抗生素濫用，耐藥菌株不斷出現(xiàn)，給細(xì)菌疾病的防治也帶來了一定困難[1]。2021年1月，湖南衡陽某豬場發(fā)生了一起以仔豬消瘦、大量死亡為特征的疾病，為查明病因以采取相應(yīng)的防制措施，對(duì)該豬場送檢的4頭仔豬進(jìn)行處死、剖檢，觀察并記錄病理變化，采集樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料來源

衡陽某豬場送檢的4頭發(fā)病仔豬。剖檢后收集淋巴結(jié)、扁桃體、肺臟等臟器組織。

1.1.2 主要試劑

豬藍(lán)耳病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑盒(批號(hào)：2020012)、豬圓環(huán)病毒II型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑盒(批號(hào)：2020011)，購自湖南冠牧生物。血瓊脂培養(yǎng)基，藥敏紙片(青霉素G、阿莫西林、氨芐西林、頭孢噻吩、頭孢噻肟、林可霉素、鏈霉素、慶大霉素、新霉素、土霉素、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、紅霉素、替米考星、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、多粘菌素E、復(fù)方新諾明)，購自杭州微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 臨床癥狀及病理觀察

對(duì)送檢的4頭仔豬進(jìn)行表觀檢查及臨床診斷后，處死，剖檢，觀察并記錄病理變化。

1.2.2 熒光定量PCR檢測

按照病毒DNA/RNA提取試劑盒說明書提取核酸。按照實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒說明書操作，每管加入21.5ul PCR-Mix，待檢樣本、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各2.5 ul加入對(duì)應(yīng)反應(yīng)管中，蓋好管蓋。

1.2.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定

將病料無菌接種于血瓊脂培養(yǎng)基，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。革蘭氏染色、鏡檢，觀察細(xì)菌的形態(tài)及染色特點(diǎn)。

1.2.4 藥敏試驗(yàn)

用無菌生理鹽水制備濃度為1×108cfu/ml～5×108cfu/ml的菌懸液，均勻涂布于培養(yǎng)基，將藥敏紙片貼于平板表面，37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，量取抑菌圈直徑，根據(jù)各種藥物的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行敏感性評(píng)判。藥敏紙片的規(guī)格及判定標(biāo)準(zhǔn)見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 送檢病豬的臨床癥狀及病理觀察

發(fā)病仔豬皮膚顏色蒼白，被毛蓬亂，精神萎靡，呼吸急促，身體消瘦，腹股溝淋巴結(jié)明顯腫大。剖檢可見肺部腫脹，一頭仔豬肺臟周邊有纖維素性滲出物；脾臟腫大，一端出現(xiàn)明顯梗死；全身淋巴結(jié)，尤其是腹股溝淋巴結(jié)充血腫大。

2.2 熒光定量PCR檢測結(jié)果

用熒光定量PCR相關(guān)試劑盒對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒II型進(jìn)行檢測，結(jié)果見表2。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，該豬場送檢的4頭仔豬PRRSV均為陽性，3號(hào)樣品PCV-2為弱陽性，其余3頭仔豬PCV-2為陰性。檢測相關(guān)圖片見圖1、圖2。

圖1 豬藍(lán)耳病毒(PRRSV)檢測結(jié)果

圖2 豬圓環(huán)病毒II型(PCV-II)檢測結(jié)果

表1 藥敏紙片規(guī)格及判定標(biāo)準(zhǔn)

表2 4份樣品病原QPCR檢測結(jié)果

2.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定

剖檢發(fā)現(xiàn)一頭仔豬肺臟充血腫大，邊緣有大片纖維素性滲出物，疑似存在細(xì)菌感染。取病變部位組織無菌接種于培養(yǎng)基，經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢，疑似鏈球菌感染。見圖3。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

為查明細(xì)菌的耐藥情況，減少治療失誤，降低該豬場的經(jīng)濟(jì)損失，對(duì)分離菌株進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)。結(jié)果見表3。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果中抑菌圈直徑及判定標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)分離菌株對(duì)頭孢噻吩、頭孢噻肟、林可霉素敏感，對(duì)青霉素G、阿莫西林、氨芐西林、鏈霉素、慶大霉素、新霉素、土霉素、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、紅霉素、替米考星、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、多粘菌素E、復(fù)方新諾明均耐藥?？蛇x用頭孢噻吩、頭孢噻肟或林可霉素進(jìn)行治療。

圖3 革蘭氏染色結(jié)果

表3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

經(jīng)對(duì)4頭仔豬病料檢測，PRRSV陽性對(duì)照Ct值為27.7，樣品Ct值分別為27.57、28.57、29.92、28.47；PCV-II陽性對(duì)照Ct值為22.57，樣品中僅三號(hào)樣品存在Ct值，為27.45，其余樣品均未檢測出圓環(huán)病毒II型。根據(jù)送檢仔豬的發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，確診該豬場存在豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒II型及細(xì)菌混合感染。

近年來，豬繁殖與呼吸綜合征與豬圓環(huán)病毒II型混合感染的疫情時(shí)有報(bào)道，一旦發(fā)生混合感染，疫情在短時(shí)間內(nèi)即可大面積擴(kuò)散和蔓延[2]。由于混合感染死亡率極高，一旦發(fā)生擴(kuò)散蔓延勢必造成重大損失，必須及時(shí)采取有效的防控措施。建議該豬場對(duì)病豬及疑似感染豬只進(jìn)行隔離，防止疫情擴(kuò)散。鑒于該豬場一直缺乏合理的免疫程序，要求該豬場立即進(jìn)行免疫接種；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高豬群的免疫力；對(duì)圈舍、場地、用具、飲水等進(jìn)行定期消毒，保證環(huán)境衛(wèi)生。豬場在引種時(shí)，一定要做到全進(jìn)全出，規(guī)范引種，嚴(yán)格執(zhí)行檢疫隔離制度。

剖檢發(fā)現(xiàn)1頭仔豬肺部有化膿感染，經(jīng)革蘭氏染色鏡檢疑似鏈球菌感染。通過藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)分離菌株僅對(duì)少數(shù)藥物敏感，對(duì)多種藥物具有很強(qiáng)的耐藥性，這可能與該場長期濫用抗菌藥物有關(guān)。近年來，多重耐藥菌越來越常見，對(duì)其主要的防治手段是通過藥物敏感性實(shí)驗(yàn)篩選出敏感藥物進(jìn)行治療。因此，建議豬場在用藥過程中，先進(jìn)行藥物敏感性檢測，選用高敏藥物，減少用藥失誤。還要避免同種藥物的長期使用，防止耐藥性的產(chǎn)生[3]。有研究表明，中藥多為復(fù)方組分群，在治療中通常表現(xiàn)為整體量效關(guān)系，作用于多個(gè)靶點(diǎn)，不易產(chǎn)生耐藥性[4]，故亦可在治療中添加相應(yīng)的抗菌中藥成分。