李唯一　于凱悅　劉宇航　董愛(ài)榮　劉君旭

摘 要：為探究黏質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）降解咪唑乙煙酸有關(guān)的酶，用靛酚藍(lán)比色法、3.5-二硝基水楊酸（DNS）比色法、高錳酸鉀滴定法和鄰苯三酚比色法分別檢測(cè)黏質(zhì)沙雷氏菌培養(yǎng)液中脲酶、蔗糖酶、過(guò)氧化氫酶、多酚氧化酶和纖維素酶的酶活性，以不加咪唑乙煙酸的純培養(yǎng)液作為對(duì)照。結(jié)果表明：以咪唑乙煙酸為唯一碳源培養(yǎng)的黏質(zhì)沙雷氏菌，脲酶活性培養(yǎng)初期時(shí)最高，然后逐漸下降，最后趨于平衡;蔗糖酶活性隨培養(yǎng)時(shí)間緩慢上升;過(guò)氧化氫酶活性呈上升—下降—上升—下降的趨勢(shì);多酚氧化酶活性培養(yǎng)初期時(shí)活性最高，后一直呈下降趨勢(shì)，72 h后急劇下降至最低水平;纖維素酶活性先下降后上升，培養(yǎng)結(jié)束時(shí)恢復(fù)至初期水平。通過(guò)相關(guān)性分析得知，咪唑乙煙酸降解率與脲酶活性呈高度負(fù)相關(guān)關(guān)系，與蔗糖酶活性呈高度正相關(guān)關(guān)系。

關(guān)鍵詞：咪唑乙煙酸;黏質(zhì)沙雷氏菌;酶活性;降解率

中圖分類號(hào)：S154.2;S481;S565.1?? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? 文章編號(hào)：1006-8023（2021）02-0018-05

Effect of Imazethapyr on the Enzyme Activity of Serratia marcescens

LI Weiyi1， YU Kaiyue1， LIU Yuhang1， DONG Airong1*， LIU Junxu2

（1.School of Forestry， Northeast Forestry University， Harbin 150040， China;

2.Qingdao Institute of Termite Control， Qingdao 266012， China）

Abstract：In order to explore the enzymes related to the degradation of imazethapyr by Serratia marcescens， the enzyme activities of urease， sucrase， catalase， polyphenol oxidase and cellulase in the culture medium of Serratia marcescens were detected by indophenol blue colorimetry， 3.5-dinitrosalicylic acid （DNS） colorimetry， potassium permanganate titration and pyrogallol colorimetry， respectively. The pure culture medium without imazethapyr was used as control. The results showed that the urease activity of Serratia marcescens cultured with imazethapyr as the sole carbon source was the highest at the initial stage of culture， gradually decreased， and then tended to balance， and the sucrase activity increased slowly with the culture time. The activity of catalase showed a trend of increased-decreased-increased-decreased. The activity of polyphenol oxidase was the highest at the beginning of culture， and then decreased sharply to the lowest level after 72 hours. The cellulase activity decreased at first and then increased， and returned to the initial level at the end of culture. Through correlation analysis， it was found that the degradation rate of imazethapyr was highly negatively correlated with urease activity， highly correlated with sucrase activity.

Keywords：Imazethapyr; Serratia marcescens; enzyme activity; degradation rate

收稿日期：2020-09-30

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31670494）

第一作者簡(jiǎn)介：李唯一，碩士研究生。研究方向?yàn)樯植±韺W(xué)。E-mail： 921376776@qq.com

通信作者：董愛(ài)榮，博士，副教授。研究方向?yàn)樯植±韺W(xué)。E-mail： darlmy@163.com

引文格式：李唯一，于凱悅，劉宇航，等.咪唑乙煙酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌酶活性的影響[J].森林工程，2021，37（2）：18-23.

LI W Y， YU K Y， LIU Y H， et al. Effect of imazethapyr on the enzyme activity of Serratia Marcescens[J]. Forest Engineering，2021，37（2）：18-23.

0 引言

咪唑乙煙酸是一種咪唑啉酮類除草劑，與其他常用除草劑相比，具有殺草譜廣、除草效果好、成本低、苗前苗后都可用、活性高和用量低等優(yōu)點(diǎn)，在我國(guó)被廣泛使用[1]。例如，咪唑乙煙酸能有效提高苜蓿產(chǎn)量、降低雜草種類[2-3]。目前黑龍江省主要使用于單季大豆田[4]。農(nóng)藥的大量使用會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成破壞，并且農(nóng)藥的殘留也將危害人畜的健康[5]。

微生物是農(nóng)藥轉(zhuǎn)化降解的重要因素之一。研究表明，微生物主要是通過(guò)酶促反應(yīng)對(duì)農(nóng)藥起作用[6]。黏質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）是一種在自然界中廣泛存在的兼性厭氧菌，是水和土壤的常居菌群，同時(shí)也是一種應(yīng)用前景非常廣闊的微生物[7]。例如，黏質(zhì)沙雷氏菌能分泌高活性的幾丁質(zhì)酶，具有殺菌殺蟲(chóng)作用，可用于防治植物病蟲(chóng)害[8]。黏質(zhì)沙雷氏菌對(duì)亞洲柑橘木虱（Diaphorina citri）若蟲(chóng)有較高的殺蟲(chóng)活性，其發(fā)酵的上清液也可導(dǎo)致亞洲柑橘木虱若蟲(chóng)死亡[9]。黏質(zhì)沙雷氏菌產(chǎn)生的脂肪酶可廣泛應(yīng)用于食品、制藥以及生物能源等領(lǐng)域[10]。從黏質(zhì)沙雷氏菌細(xì)胞壁提取的靈桿菌脂多糖可以抗腫瘤[11]。黏質(zhì)沙雷氏菌作為一種生防菌，對(duì)連作土壤具有修復(fù)作用[12]。此外，黏質(zhì)沙雷氏菌還可以降解油脂[13]。

自然條件下，咪唑乙煙酸的降解不是以單一的方式進(jìn)行，它可以在多種不同酶作用下以不同的方式進(jìn)行[14]。酶具有專一性，而能降解同一類底物的酶通常具有相似的性質(zhì)。脲酶是一種催化尿素水解成氨和二氧化碳的酶。蔗糖酶不僅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖和果糖。過(guò)氧化氫酶能催化過(guò)氧化氫分解成氧和水。多酚氧化酶是一類含銅的氧化還原酶，能催化鄰苯二酚氧化成鄰苯二醌，也能作用于單酚單加氧酶的底物。纖維素酶能在分解纖維素時(shí)起生物催化作用，是可以將纖維素分解成寡糖或單糖的蛋白質(zhì)。本文通過(guò)測(cè)定咪唑乙煙酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌生化酶活性的影響，探尋與降解咪唑乙煙酸相關(guān)酶系，為咪唑乙煙酸及其他咪唑啉酮類除草劑的生物酶降解提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黏質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）為課題組前期馴化得到的高效降解菌株。菌株富集培養(yǎng)采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。其他實(shí)驗(yàn)采用無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基。

1.2 試驗(yàn)方法

將黏質(zhì)沙雷氏菌接種于盛有100 mL的富集培養(yǎng)基的錐形瓶中，置于28 ℃、160 r/min的搖床上培養(yǎng)2 d。取10 mL培養(yǎng)液加入盛有90 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100 mg/kg的咪唑乙煙酸的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，其中咪唑乙煙酸為唯一碳源，對(duì)照組為加10 mL的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基，均置于25 ℃、160 r/min的搖床上培養(yǎng)4 d，從中取12、24、48、72、96 h的菌液，12 000 r/min離心10 min，取上清液即為粗酶液，測(cè)定各培養(yǎng)時(shí)間的酶活性和降解率。

1.3 酶活性測(cè)定

脲酶活性測(cè)定采用靛酚藍(lán)比色法[15]。蔗糖酶活性測(cè)定采用3，5-二硝基水楊酸（DNS）比色法[16]。過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定采用高錳酸鉀滴定法[17]。多酚氧化酶活性測(cè)定采用鄰苯三酚比色法[18]。纖維素酶活性測(cè)定采用3，5-二硝基水楊酸（DNS）比色法[19]。

1.4 降解率的測(cè)定

參照靳穎華[20]的方法，采用液相色譜法測(cè)定咪唑乙煙酸降解率。采用Waters2695液相色譜儀與Waters2996紫外檢測(cè)器（上海力明生物科技有限公司），流動(dòng)相：VA液為0.05%冰乙酸乙腈，VB液為0.4%冰乙酸水溶液，VA與VB體積比為40∶60;分離分析柱為Agilent ZORBAX Extend-C18柱（250 mm，4.6 mm，5μm）;進(jìn)樣條件：柱溫室溫，進(jìn)樣量10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。

咪唑乙煙酸降解率= [（CK殘留質(zhì)量分?jǐn)?shù)-加培養(yǎng)液殘留質(zhì)量分?jǐn)?shù)）/CK殘留質(zhì)量分?jǐn)?shù)]×100%。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)整理計(jì)算和作圖采用Excel 2010，相關(guān)性分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)分析軟件（IBM公司）。

2 結(jié)果與分析

2.1 咪唑乙煙酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌脲酶活性影響

對(duì)照組（CK）為黏質(zhì)沙雷氏菌的純培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組（N）為加入咪唑乙煙酸的黏質(zhì)沙雷氏菌培養(yǎng)液。培養(yǎng)初期，實(shí)驗(yàn)組（N）脲酶活性遠(yuǎn)低于對(duì)照組（CK），說(shuō)明咪唑乙煙酸抑制了黏質(zhì)沙雷氏菌分泌脲酶。24 h時(shí)，兩組脲酶活性均降低，對(duì)照組（CK）脲酶活性最低值達(dá)0.423 μg/（min·mL），之后兩組脲酶活性都逐漸趨于水平，差異性不大（圖1）。

2.2 咪唑乙煙酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌蔗糖酶活性影響

對(duì)照組（CK）為黏質(zhì)沙雷氏菌的純培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組（N）為加入咪唑乙煙酸的黏質(zhì)沙雷氏菌培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)組（N）蔗糖酶活性呈緩慢上升的趨勢(shì)，而對(duì)照組（CK）蔗糖酶活性是先降低后升高。培養(yǎng)12 h時(shí)，兩組蔗糖酶活性基本相同。之后加入咪唑乙煙酸的實(shí)驗(yàn)組（N）蔗糖酶活性開(kāi)始緩慢上升，直到培養(yǎng)結(jié)束。對(duì)照組（CK）蔗糖酶活性在培養(yǎng)24 h時(shí)有所下降，達(dá)到最低值807.23 μg/（min·g），之后逐漸上升并趨于平穩(wěn)（圖2）。

2.3 咪唑乙煙酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌過(guò)氧化氫酶活性影響

對(duì)照組（CK）為黏質(zhì)沙雷氏菌的純培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組（N）為加入咪唑乙煙酸的黏質(zhì)沙雷氏菌培養(yǎng)液。加入咪唑乙煙酸的實(shí)驗(yàn)組（N）和未加咪唑乙煙酸的對(duì)照組（CK）過(guò)氧化氫酶活性的變化趨勢(shì)大致相同，呈上升—下降—上升—下降的趨勢(shì)。培養(yǎng)12 h時(shí)，兩組過(guò)氧化氫酶活性最低。培養(yǎng)24 h時(shí)，兩組過(guò)氧化氫酶活性均升高，而對(duì)照組（CK）的過(guò)氧化氫酶活性高于實(shí)驗(yàn)組（N）。這可能是因?yàn)轲べ|(zhì)沙雷氏菌的數(shù)量增加，活性增強(qiáng)，促進(jìn)了過(guò)氧化氫酶的分泌。培養(yǎng)48 h時(shí)，實(shí)驗(yàn)組（N）過(guò)氧化氫酶活性有所下降，對(duì)照組（CK）過(guò)氧化氫酶活性顯著降低。培養(yǎng)72 h時(shí)，兩組過(guò)氧化氫酶活性又開(kāi)始上升，均恢復(fù)至24 h時(shí)的水平。之后又開(kāi)始下降，直到培養(yǎng)結(jié)束（圖3）。

2.4 咪唑乙煙酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌多酚氧化酶活性影響

對(duì)照組（CK）為黏質(zhì)沙雷氏菌的純培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組（N）為加入咪唑乙煙酸的黏質(zhì)沙雷氏菌培養(yǎng)液。在培養(yǎng)期間，兩組多酚氧化酶活性的變化趨勢(shì)大致相同。培養(yǎng)12 h時(shí)，兩組多酚氧化酶活性相差不多。培養(yǎng)24 h時(shí)，兩組多酚氧化酶活性均開(kāi)始下降，可能是因?yàn)檫溥蛞覠熕嵋种屏损べ|(zhì)沙雷氏菌分泌多酚氧化酶，但實(shí)驗(yàn)組（N）比對(duì)照組（CK）高3.6 U/mL。之后48 h和72 h時(shí)的多酚氧化酶活性變化不大，72 h之后兩組多酚氧化酶活性均急速下降，直到培養(yǎng)結(jié)束（圖4）。

2.5 咪唑乙煙酸對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌纖維素酶活性影響

對(duì)照組（CK）為黏質(zhì)沙雷氏菌的純培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組（N）為加入咪唑乙煙酸的黏質(zhì)沙雷氏菌培養(yǎng)液。在培養(yǎng)初期，兩組纖維素酶活性的變化趨勢(shì)相同，纖維素酶活性均有所升高。從24 h開(kāi)始，加入咪唑乙煙酸的實(shí)驗(yàn)組（N）與不加咪唑乙煙酸的對(duì)照組（CK）的變化趨勢(shì)在各個(gè)時(shí)期均相反。培養(yǎng)48 h時(shí)，對(duì)照組（CK）纖維素酶活性達(dá)到最高值47.91 μg/（min·mL），而實(shí)驗(yàn)組（N）纖維素酶活性顯著降低，達(dá)到最低值8.74 μg/（min·mL）。培養(yǎng)72 h時(shí)，對(duì)照組（CK）纖維素酶活性為最低值36.73 μg/（min·mL），而實(shí)驗(yàn)組（N）則顯著升高（圖5）。

黏質(zhì)沙雷氏菌各酶活性各時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組顯著性差異分析情況見(jiàn)表1。

2.6 黏質(zhì)沙雷氏菌對(duì)咪唑乙煙酸的降解率

黏質(zhì)沙雷氏菌對(duì)咪唑乙煙酸的降解率趨勢(shì)如圖6所示，在96 h內(nèi)，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，咪唑乙煙酸的降解率逐漸增加，48 h后達(dá)到86.45%，之后緩慢增長(zhǎng)，直至92.33%。

2.7 黏質(zhì)沙雷氏菌液中各酶活性與降解率相關(guān)性分析

通過(guò)SPSS 軟件對(duì)不同培養(yǎng)時(shí)期的黏質(zhì)沙雷氏菌的各種酶活性數(shù)據(jù)與對(duì)應(yīng)時(shí)期的咪唑乙煙酸降解率進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表2。以咪唑乙煙酸為唯一碳源培養(yǎng)黏質(zhì)沙雷氏菌，咪唑乙煙酸的降解率與脲酶活性呈高度負(fù)相關(guān);與蔗糖酶活性呈高度正相關(guān)，與過(guò)氧化氫酶、多酚氧化酶和纖維素酶活性相關(guān)性不顯著。

3 結(jié)論與討論

利用本身對(duì)農(nóng)藥有降解作用的酶系基因，微生物會(huì)將農(nóng)藥直接作為唯一碳源和能源，分解成諸多分子量小的化合物[21]。以咪唑乙煙酸為唯一碳源培養(yǎng)黏質(zhì)沙雷氏菌，所選擇的5種酶活性均有變化，說(shuō)明咪唑乙煙酸的降解跟這5種酶均有一定的關(guān)系。脲酶活性在培養(yǎng)初期最高，24 h急劇下降，然后趨于平衡;蔗糖酶活性呈緩慢上升;過(guò)氧化氫酶活性呈上升—下降—上升—下降的趨勢(shì);多酚氧化酶活性培養(yǎng)初期時(shí)活性最高，后一直呈下降趨勢(shì)，直至下降至最低水平;纖維素酶活性先下降后上升，培養(yǎng)結(jié)束時(shí)恢復(fù)至初期水平，變化趨勢(shì)與對(duì)照組相反。

目前研究發(fā)現(xiàn)，能夠降解咪唑啉酮類除草劑的微生物主要為土壤中的細(xì)菌，包括酸單胞桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、芽孢桿菌屬、海球菌屬、節(jié)細(xì)菌屬、丙酸桿菌屬和無(wú)色桿菌等，還有黑曲霉和放線菌[22]。本文通過(guò)對(duì)黏質(zhì)沙雷氏菌各酶活性與降解率之間的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)咪唑乙煙酸的降解率與脲酶活性呈高度負(fù)相關(guān)，與蔗糖酶活性呈高度正相關(guān)，與過(guò)氧化氫酶、多酚氧化酶和纖維素酶活性相關(guān)性不顯著，這與李德斌[23]的研究結(jié)果一致。同時(shí)進(jìn)一步說(shuō)明了脲酶和蔗糖酶在咪唑乙煙酸的降解中起到了較大的作用，為后續(xù)黏質(zhì)沙雷氏菌降解農(nóng)藥除草劑提供了理論基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】

[1]吳昊.咪唑乙煙酸對(duì)土壤微生物群落的影響及其降解的手性差異研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2019.

WU H. The effects of imazethapyr on soil microbial community structure， and the chiral differences of degradation in soils[D]. Hangzhou： Zhejiang University， 2019.

[2]劉剛.咪唑乙煙酸和高效氟吡甲禾靈為黃河三角洲地區(qū)紫花苜蓿田較為理想的除草劑品種[J].農(nóng)藥市場(chǎng)信息，2017， 32（19）：51.

LIU G. Imazethapyr and high-efficiency floropyrin are ideal herbicides in alfalfa fields in the Yellow River Delta [J]. Pesticide Market Information， 2017， 32 （19）： 51.

[3]林長(zhǎng)福，高爽，楊玉廷，等.紫花苜蓿田除草劑的選擇與應(yīng)用[J].現(xiàn)代農(nóng)藥，2005，4（5）：31-33.

LIN C F， GAO S， YANG Y T， et al. Selection and use of herbicides for alfalfa[J]. Modern Agrochemicals， 2005， 4（5）： 31-33.

[4]ZHANG W Q， LINSCOMBE S D， WEBSTER E， et al. Risk assessment of the transfer of imazethapyr herbicide tolerance from Clearfield rice to red rice （Oryza sativa）[J]. Euphytica， 2006， 152（1）： 75-86.

[5]CASIDA J E. Hayes' handbook of pesticide toxicology[M]. USA： Academic Press， 2010.

[6]趙炎，陳晨，韓亮，等.微生物降解磺隆類除草劑的研究進(jìn)展[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，56（23）：4443-4446.

ZHAO Y， CHEN C， HAN L， et al. The research progress of microbial degradation of sulfonylurea herbicide[J]. Hubei Agricultural Sciences， 2017， 56（23）： 4443-4446.

[7]王貝貝.粘質(zhì)沙雷氏菌膜結(jié)合葡萄糖酸脫氫酶的純化、鑒定與表征[D].鎮(zhèn)江：江蘇大學(xué)，2019.

WANG B B. Membrane-bound gluconate dehydrogenase from Serratia marcescens： purification， identification and characterization[D]. Zhenjiang： Jiangsu University， 2019.

[8]陳曉通，袁淑博，張鉦，等.一株高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的粘質(zhì)沙雷氏菌篩選、鑒定及應(yīng)用[J].綠色科技，2018，9（12）：164-167.

CHEN X T， YUAN S B， ZHANG Z， et al. Screening， identification and application of a strain of Serratia marcescens with high chitinase production [J]. Journal of Green Science and Technology， 2018， 9（12）： 164-167.

[9]鄺凡.一株粘質(zhì)沙雷氏菌（KH-001）對(duì)亞洲柑橘木虱若蟲(chóng)殺蟲(chóng)作用研究[D].贛州：贛南師范大學(xué)，2019.

KUANG F. Insecticidal effects of Asian Citrus psyllid nymph （Diaphorina citri kuwayama） on Serratia marcescens KH-001[D]. Ganzhou： Gannan Normal University， 2019.

[10]林康.粘質(zhì)沙雷氏菌脂肪酶的應(yīng)用、固定化及突變體研究[D].上海：華東理工大學(xué)，2012.

LIN K. Application， immobilization and mutagenesis of recombinant Serratia marcescens lipase[D]. Shanghai： East China University of Science and Technology， 2012.

[11]張帥，盧磊，王靖瑤，等.粘質(zhì)沙雷氏菌在免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤方面的應(yīng)用[J].黑龍江醫(yī)藥，2015，28（4）：718-720.

ZHANG S， LU L， WANG J Y， et al. Application of Serratia marcescens in immunomodulatory and anti-tumor[J]. Heilongjiang Medicine Journal， 2015， 28（4）： 718-720.

[12]馬海燕.粘質(zhì)沙雷氏菌對(duì)花生連作土壤的修復(fù)及其高產(chǎn)靈菌紅素的研究[D]. 南京：南京師范大學(xué)，2015.

MA H Y. Study on remediation of continuous cropping soil of peanut by Serratia marcescens and its high production of lycopene [D]. Nanjing ：Nanjing Normal University， 2015.

[13]孟卓妮.油脂降解菌的篩選及生物法降解油脂的初步研究[D].貴陽(yáng)：貴州大學(xué)，2019.

MENG Z N. Screening of oil-degradation strains and preliminary study on biodegradation of oil wastewater[D]. Guiyang： Guizhou University， 2019.

[14]李巖，蔣繼志，劉翠芳.微生物降解農(nóng)藥研究的新進(jìn)展[J].生物學(xué)雜志，2007，24（2）：59-62

LI Y， JIANG J Z， LIU C F. New progress in microbial degradation of pesticides[J]. Journal of Biology， 2007， 24（2）： 59-62.

[15]關(guān)松蔭.土壤酶與土壤肥力[J].土壤通報(bào)，1980，11（6）：40-41.

GUAN S Y. Soil enzyme and soil fertility[J]. Soil Bulletin， 1980， 11（6）： 40-41.

[16]關(guān)松蔭.土壤酶及其研究法[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1986.

GUAN S Y. Soil enzyme and its research method[M]. Beijing： Agricultural Press， 1986.

[17]周禮愷.土壤酶學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，1987.

ZHOU L K. Soil enzymology[M]. Beijing： Science Press， 1987.

[18]劉莉莉，林匡飛，蘇愛(ài)華，等.四溴雙酚A對(duì)土壤酶活性的影響[J].環(huán)境污染與防治，2008，30（6）：13-16.

LIU L L， LIN K F， SU A H， et al. Effects of tetrabromobisphenol A on soil enzyme activities[J]. Environmental Pollution and Control， 2008， 30（6）： 13-16.

[19]張愛(ài)梅，殷一然，齊汝楠.產(chǎn)纖維素酶沙棘根瘤內(nèi)生放線菌的篩選、鑒定及其酶活性測(cè)定[J].西北師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2019，55（5）：71-76.

ZHANG A M， YIN Y R， QI R N. Screening， identification and enzyme activity of endophytic actinomycetes producing cellulase from root nodules of Hippophae rhamnoides[J]. Journal of Northwest Normal University （Natural Science）， 2019， 55（5）： 71-76.

[20]靳穎華.液相色譜法測(cè)定燕窩中唾液酸含量研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2011，13（6）：1071-1072.

JIN Y H. Determination of sialic acid in birds nest by liquid chromatography[J]. China Journal of Medicine， 2011， 13（6）： 1071-1072.

[21]郭曉青，王秀娟，孫愛(ài)麗，等.環(huán)境中擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥微生物降解技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)生物工程雜志，2017，37（5）：126-132.

GUO X Q， WANG X J， SUN A L， et al. Advances in microbial degradation of pyrethroid pesticides in the environment [J]. Chinese Journal of Biological Engineering， 2017， 37（5）： 126-132.

[22]盧美名，尹雯悅，劉傳龍，等.除草劑微生物降解的研究進(jìn)展[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，58（3）：5-8.

LU M M， YIN W Y， LIU C L， et al. Research progress on microbial degradation of herbicides[J]. Hubei Agricultural Sciences， 2019， 58（3）： 5-8.

[23]李德斌.氯嘧磺隆降解及其對(duì)土壤微生態(tài)影響的研究[D].哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)，2012.

LI D B. Study on the degradation of chlorosulfuron and its effect on soil microecology[D]. Harbin： Northeast Forestry University， 2012.