丁李春

廢棄葡萄枝蔓栽培靈芝的適宜菌株篩選

丁李春

（福建省寧德市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，福建 福安 355003）

為篩選適合以葡萄枝屑替代部分木屑為原料進(jìn)行栽培的優(yōu)良靈芝菌株，采用果園廢棄的葡萄枝屑為主料，對8個靈芝菌株進(jìn)行栽培試驗，考察產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率等指標(biāo)，并檢測其子實體和孢子的靈芝多糖及三萜含量，進(jìn)行綜合評分。結(jié)果：子實體和孢子產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率、子實體和孢子的三萜含量均以GH8為好，其綜合評分為83.24，也最高；子實體多糖則以圓8較高。8個菌株的多糖和三萜酸含量均超出國家藥典標(biāo)準(zhǔn)。因此GH8可作為葡萄枝屑栽培靈芝的適宜菌株。

靈芝；廢棄葡萄枝蔓；替代木屑；優(yōu)良菌株

靈芝（）隸屬擔(dān)子菌綱、多孔菌科、靈芝屬[1]，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明靈芝含有多種藥理活性物質(zhì)，是我國傳統(tǒng)名貴中藥，也是目前開發(fā)較好的藥用真菌[2, 3]。段木栽培作為我國靈芝傳統(tǒng)栽培方法[4]，存在菌林矛盾問題，制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展。農(nóng)業(yè)循環(huán)經(jīng)濟理念要求在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中減少資源與物質(zhì)投入，降低廢棄物排放，將廢物轉(zhuǎn)化為資源，以實現(xiàn)經(jīng)濟效益和生態(tài)效益的“雙贏”[5]。目前，桃樹屑、棉籽殼、桑枝、菌草都已用于靈芝代料栽培[6]，拓寬了靈芝栽培原料來源。

福建省福安市是我國葡萄主產(chǎn)區(qū)之一，每年葡萄園生產(chǎn)中都會產(chǎn)生大量的固體廢棄物，包括夏季與冬季修剪的葡萄新梢（枝條）、葉片，以及秋冬季節(jié)的落葉。其中枝條約占30%，其自身物理性狀和基本組成成分均適合食用菌的分解利用[7, 8]。為了更好地利用這些廢棄的葡萄枝蔓，本試驗在進(jìn)行母種和原種適應(yīng)性培養(yǎng)基礎(chǔ)上，對8個靈芝菌株進(jìn)行出菇試驗，并檢測靈芝多糖及三萜含量，以篩選出適應(yīng)于葡萄枝屑培養(yǎng)料配方栽培的優(yōu)良菌株，為葡萄枝蔓代料栽培靈芝提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

靈芝菌株日赤、圓8、GH8和武芝，由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)研究所提供；菌株盆芝、美芝和韓芝H引自江都天達(dá)食用菌研究所；對照菌株紅芝為閩東地區(qū)主栽品種，由寧德市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所食用菌室保藏。

1.2 培養(yǎng)基配方

母種培養(yǎng)基配方為葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀1.5 g、瓊脂18 g、10%葡萄枝浸出液1 L。原種和栽培種的培養(yǎng)料配方：葡萄枝屑63%、木屑27%、麩皮8%、紅糖1%、石膏1%，料水比為1∶1.5。

1.3 試驗方法

（1）10%葡萄枝浸出液的制備。稱取100 g 葡萄枝屑加水1 L，加熱至100 ℃，繼續(xù)煮30 min，取其濾液并用水定容至1 L，標(biāo)記為 10%葡萄枝浸出液。

（2）母種制備。按前述母種培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱取各種原料，采用試管分裝，在0.11 MPa下滅菌20 min后，擺成斜面，冷卻到室溫，分別接入8個試驗菌株，每個菌株接10管。接種后置于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。

（3）原種制備。按前述原種培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱取各種原料，攪拌均勻后，用容積為750 mL玻璃瓶裝料。每個菌株裝10瓶，每瓶裝干料0.2 kg，在126 ℃下滅菌2 h，冷卻后分別接入經(jīng)1.3（2）節(jié)培養(yǎng)的各菌株母種，置于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。

（4）栽培試驗。按前述栽培種培養(yǎng)料配方稱取各組分，攪拌均勻，用17×35×0.005（cm）的聚丙烯袋裝料，每袋裝料干重350 g，在126 ℃下滅菌2 h。待料溫降至28 ℃以下時接入1.3（3）節(jié)培養(yǎng)的原種，置于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。每處理重復(fù)3次，每重復(fù)30袋。待菌絲滿袋后，培養(yǎng)料表面有黃色或白色小突起時，按常規(guī)方法進(jìn)行出芝管理[9]。至靈芝邊緣變?yōu)辄S色或棕褐色，有少量孢子彈出時，開始收集孢子。將收集的孢子和采收的子實體烘干至恒重，統(tǒng)計兩潮靈芝產(chǎn)量和一潮孢子產(chǎn)量，并記錄子實體形態(tài)特征。

（5）營養(yǎng)成分檢測。所有樣品均委托福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生態(tài)研究所檢測。靈芝多糖含量檢測采用蒽酮-硫酸法，三萜含量檢測采用香草醛-高氯酸比色法。

（6）優(yōu)良菌株的綜合分析。根據(jù)靈芝子實體和孢子的多糖含量、總?cè)扑岷考吧镛D(zhuǎn)化率，進(jìn)行綜合分析評價，篩選出優(yōu)良菌株[10]。

綜合評分=（多糖含量+總?cè)扑岷浚粒ㄗ訉嶓w生物轉(zhuǎn)化率+孢子生物轉(zhuǎn)化率）。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS15.0系統(tǒng)進(jìn)行整理和統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄枝蔓栽培的靈芝子實體形態(tài)與產(chǎn)量

由表1可知，菌株GH8的子實體菌蓋紅褐色、厚，呈半圓形，菌柄無分枝；平均單袋產(chǎn)量較高，干重為30.3 g，比對照提高31.7%，與其他菌株比較，差異達(dá)極顯著水準(zhǔn)；子實體生物轉(zhuǎn)化率為8.7%。韓芝H的子實體菌蓋紅褐色、較厚，呈腎形，菌柄無分枝；平均單袋產(chǎn)量較低，干重僅21.0 g，顯著低于其他7個菌株。

靈芝孢子的平均單袋產(chǎn)量以GH8較高，為6.48 g，與盆芝、武芝、日赤3個菌株比較，差異達(dá)顯著水準(zhǔn)，與其他菌株差異不顯著；以日赤較低，為4.38 g，與盆芝、武芝的差異不顯著，與其他菌株比較，差異達(dá)極顯著水準(zhǔn)（表1）。孢子生物轉(zhuǎn)化率，以GH8較高，為1.85%；日赤較低，為1.25%。

表1 葡萄枝蔓栽培的不同靈芝菌株子實體形態(tài)及產(chǎn)量比較

注：同列數(shù)據(jù)后小寫字母不同表示差異顯著（＜0.05），大寫字母不同表示差異極顯著（＜0.01）。表2～4同。

2.2 葡萄枝蔓栽培的靈芝子實體和孢子多糖含量

2015《中國藥典》規(guī)定，靈芝多糖以無水葡萄糖計，不得少于0.9%。本試驗各樣品的含量均達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)，而各靈芝菌株的子實體多糖含量均低于其孢子的含量。其中，圓8子實體多糖含量較高，為1.79%，極顯著高于對照，而與武芝、日赤的差異則不顯著；美芝子實體多糖含量較少，僅為1.38%，除與對照和韓芝H的差異不顯著外，與其他5個菌株均有極顯著差異。GH8菌株的子實體多糖含量居中，為1.58%，與對照差異不顯著，與高含量的圓8和低含量的美芝比較，有極顯著差異；但其孢子多糖含量較高，為2.13%，與除圓8外的其他6個菌株差異均達(dá)顯著水準(zhǔn)（表2）。

表2 靈芝子實體和孢子的多糖含量

2.3 葡萄枝蔓栽培的靈芝子實體和孢子三萜含量

2015《中國藥典》規(guī)定，三萜及甾醇以齊墩果酸（C30H48O3）計，不得少于0.50%。本試驗各樣品的含量全部符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，而不同靈芝菌株的子實體三萜含量均低于其孢子的含量。其中，GH8的子實體三萜含量較高，為1.37%，與對照和韓芝H的差異不顯著，與其他5個菌株均有極顯著差異；日赤的三萜含量較少，僅為0.52%，與其他菌株比較，差異達(dá)極顯著水準(zhǔn)（表3）。

GH8的孢子三萜含量也較高，為2.81%，比其子實體高出105%，與其他各菌株比差異顯著；日赤的孢子三萜含量較低，為1.68%，比其子實體高出223%。8個供試菌株的三萜含量，以日赤的子實體與孢子差異最大。

表3 靈芝子實體和孢子三萜含量

2.4 不同菌株的綜合分析評價

以靈芝子實體和孢子的三萜含量、多糖含量及生物轉(zhuǎn)化率3個指標(biāo)進(jìn)行綜合分析的結(jié)果（表4），GH8綜合評分最高，為83.24，與其他7個菌株比較，差異極顯著，比對照高41.3%；日赤綜合評分最低，為43.99，與其他7個菌株的差異顯著，比對照低25%。各菌株綜合評分從高到低依次為：GH8＞圓8＞紅芝（CK）＞美芝＞武芝＞盆芝＞韓芝H＞日赤。

表4 不同靈芝菌株綜合評分結(jié)果

3 小結(jié)與討論

本試驗結(jié)果表明，一個好的靈芝品種不能只看單一性狀而要綜合測評各項指標(biāo)。從表1～4看，除子實體多糖含量外，其他各項檢測指標(biāo)均以GH8菌株表現(xiàn)較好。其子實體和孢子產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率、子實體和孢子的三萜含量，以及孢子多糖含量，在8個供試菌株中均居首位，綜合評分為83.24，也最高，與其他7個菌株比較，差異達(dá)極顯著。且GH8子實體和孢子中的活性成分多糖和三萜酸的含量均超出國家藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)多次試驗和檢測各項指標(biāo)均保持較高的穩(wěn)定性，可作為葡萄枝屑栽培靈芝的優(yōu)良菌株作進(jìn)一步試驗示范。葡萄枝屑富含白藜蘆醇[11]，用葡萄枝屑栽培的靈芝是否也含有該活性成分有待進(jìn)一步研究。

不同靈芝菌株對葡萄枝浸出液的耐受力不同，須經(jīng)過不斷培養(yǎng)以提高其適應(yīng)性，以便在栽培過程中增加葡萄枝屑添加量，減少木屑用量，為靈芝栽培開辟新的原料來源。

[1] 黃年來, 林志彬, 陳國良, 等. 中國食藥用菌學(xué)(下篇)[M]. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社, 2010．

[2] 肖自添, 閻軼, 何煥清, 等. 28 個靈芝菌株品比研究[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009(9): 58-60, 67.

[3] 林志彬. 靈芝的現(xiàn)代研究[M]. 北京: 北京醫(yī)科大學(xué)、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社, 1996: 145-146.

[4] 陳秀柄. 短原木熟料栽培靈芝新工藝的研究[J]. 江蘇食用菌, 1995, 16(2): 2-3.

[5] 魏傳超, 陳娟娟. 當(dāng)前我國農(nóng)業(yè)與循環(huán)經(jīng)濟發(fā)展障礙性因素分析[J]. 資源環(huán)境與發(fā)展, 2007(2): 16.

[6] 楊麗秋, 范錦琳, 劉欣怡, 等. 菌草對靈芝生長狀況及營養(yǎng)成分的影響[J]. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2017, 32(5): 508-511.

[7] 李春陽, 許時嬰, 王璋. 從葡萄廢棄物中提取分離多酚類生物活性物質(zhì)[J]. 食品科技, 2004(6): 88-90.

[8] 陳麗新, 黃年忠, 韋仕巖. 葡萄枝營養(yǎng)成分分析及栽培秀珍菇試驗[J]. 中國食用菌, 2010, 29(6): 29.

[9] 虞和澍. 靈芝栽培技術(shù)[J]. 成都大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 1994, 13(1): 62-63.

[10] 張曉云, 楊春清. 靈芝的化學(xué)成分和藥理作用[J]. 國外醫(yī)藥, 2006, 21(4): 152-155.

[11] 郭景南, 劉崇懷, 潘興, 等. 葡萄屬植物白藜蘆醇研究進(jìn)展[J]. 果樹學(xué)報, 2002, 19(3): 199-203.

福建省科技廳項目（編號2018N0080）

丁李春（1972—），男，高級農(nóng)藝師，主要從事食（藥）用菌研究與推廣工作。E-mail：dlc660188@126.com。

S646

B

2095-0934（2021）02-148-04