姜莉莉 付麗 薛雯 曲健祿 武海斌 范昆

關(guān)鍵詞蘋果輪紋病菌;三唑類殺菌劑;毒力;田間防效

我國是世界上最大的蘋果生產(chǎn)國，輪紋病是蘋果生產(chǎn)中的主要病害之一，其病原菌為貝氏葡萄座腔菌梨專化型Botryosphaeria dothidea，多發(fā)于蘋果枝干和果實(shí)，造成枝干潰瘍、樹勢衰弱、果實(shí)腐爛，嚴(yán)重影響蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展和果農(nóng)種植收入。隨著研究的不斷深入，已證實(shí)蘋果輪紋病與干腐病、歐美地區(qū)的蘋果白腐病為同一種病害。同時(shí)，蘋果輪紋病菌的寄主范圍較廣，除蘋果外還可侵染梨、桃、杏等其他果樹，對(duì)果業(yè)生產(chǎn)影響巨大。

目前，對(duì)蘋果輪紋病的農(nóng)業(yè)防治效果有限，抗性品種尚未廣泛應(yīng)用。生產(chǎn)上仍以化學(xué)藥劑防治為主，主要化學(xué)藥劑包括甲基硫菌靈、代森錳鋅等。三唑類殺菌劑是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一類高效殺菌劑，其通過抑制菌體麥角甾醇的生物合成而發(fā)揮藥效，具有內(nèi)吸性，且高效、低毒、持效期長、兼具預(yù)防和治療作用，可用于防治子囊菌、擔(dān)子菌及半知菌引起的多種病害。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，三唑類殺菌劑可抑制蘋果輪紋病菌的菌絲生長，使菌絲干癟、畸形、龜裂，菌絲細(xì)胞解體死亡。由于三唑類殺菌劑對(duì)植株生長有一定的抑制作用，其在作物上的應(yīng)用需進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。中國農(nóng)藥信息網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示，戊唑醇和氟硅唑已獲得登記，可用于蘋果輪紋病的防治;含苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、腈菌唑的復(fù)配制劑也已登記用于蘋果輪紋病的防治。目前，不同三唑類殺菌劑對(duì)蘋果輪紋病的作用效果的比較尚未見系統(tǒng)報(bào)道。

本研究在室內(nèi)條件下測定戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、氟硅唑、氟菌唑、葉菌唑、丙環(huán)唑、腈菌唑、己唑醇和氟環(huán)唑9種三唑類殺菌劑對(duì)蘋果輪紋病菌B.dothidea菌絲生長的毒力，在田間條件下評(píng)價(jià)4種未登記藥劑對(duì)蘋果樹的安全性，并在輪紋病發(fā)生嚴(yán)重的果園進(jìn)行兩年田間藥效試驗(yàn)，篩選防治蘋果輪紋病的高效三唑類殺菌劑。

1材料與方法

1.1供試菌株

對(duì)采集于山東省曲阜市吳村鎮(zhèn)蘋果園的輪紋病病果進(jìn)行病原菌分離，按照柯赫氏法則進(jìn)行回接鑒定，獲得蘋果輪紋病菌貝氏葡萄座腔菌梨?；虰otryosphaeria dothidea。

1.2供試藥劑

95%戊唑醇原藥和430g/L戊唑醇懸浮劑（SC），拜耳股份公司;95%苯醚甲環(huán)唑原藥，江西農(nóng)大銳特化工科技有限公司;10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（WG），先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司;氟菌唑97%原藥和30%可濕性粉劑（WP），日本曹達(dá)株式會(huì)社;95%氟硅唑原藥和96%腈菌唑原藥，山東濰坊潤豐化工股份有限公司;400g/L氟硅唑乳油（EC）和12.5%腈菌唑微乳劑（ME），深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司;95%葉菌唑原藥和50%葉菌唑水分散粒劑（WG），江蘇輝豐生物農(nóng)業(yè)股份有限公司;88%丙環(huán)唑原藥和250g/L丙環(huán)唑乳油（EC），瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司;95%己唑醇原藥和25%己唑醇懸浮劑（SC），97%氟環(huán)唑原藥和12.5%氟環(huán)唑懸浮劑（SC），山東省聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1室內(nèi)毒力測定

室內(nèi)毒力測定采用生長速率法。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將供試藥劑母液稀釋成系列梯度濃度。將各濃度藥液加入50℃左右的PDA培養(yǎng)基中，搖勻后傾倒至直徑9cm的滅菌培養(yǎng)皿中，制成含藥平板。在活化好的蘋果輪紋病菌菌落邊緣，以直徑7mm的打孔器打取菌餅，接種至平板上。以無菌水代替藥液為對(duì)照，每個(gè)平板為1個(gè)重復(fù)，每處理重復(fù)3次。25℃黑暗培養(yǎng)，待對(duì)照菌落長至培養(yǎng)皿2/3左右時(shí)，采用十字交叉法測量各處理菌落直徑，計(jì)算各處理的菌絲生長抑制率。以毒力最低的藥劑為標(biāo)準(zhǔn)藥劑，計(jì)算其他藥劑的相對(duì)毒力指數(shù)。

菌絲生長抑制率=（對(duì)照組菌落直徑-處理組菌落直徑）/對(duì)照組菌落增長直徑×100%。

相對(duì)毒力指數(shù)=標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/供試藥劑EC50。

1.3.2安全性試驗(yàn)

在山東省果樹研究所五果園，選取‘紅富士‘嘎啦和‘金帥3個(gè)品種5年生幼樹，按照藥劑推薦劑量的最高濃度的1、2倍和4倍進(jìn)行全樹均勻噴霧。每2株樹為1小區(qū)，重復(fù)4次，隨機(jī)區(qū)組排列，以清水處理為對(duì)照。施藥時(shí)間分別為2018年6月1日、6月8日和6月15日。分另0于6月4日、6月8日、6月15日、6月25日觀察藥劑對(duì)蘋果葉片和果實(shí)的安全性;并于6月25日進(jìn)行一年生新梢長度調(diào)查，每小區(qū)隨機(jī)選取15個(gè)枝條，測量基部到頂梢的長度。通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，判斷藥劑對(duì)果樹生長有無刺激或抑制作用，以評(píng)價(jià)其安全性。

1.3.3田間防效試驗(yàn)

田間試驗(yàn)選址于山東省曲阜市吳村鎮(zhèn)‘金帥蘋果園，樹齡20年，常規(guī)不套袋管理。2018年4月12日和2019年4月19日分別進(jìn)行當(dāng)年第1次施藥，其后每10～15d施藥1次，共噴施8次。根據(jù)各藥劑在中國農(nóng)藥信息網(wǎng)上的標(biāo)簽信息確定施用劑量，施藥液量以葉片、果面均勻著藥、并稍有藥液下滴為度，每株樹所需藥液量約為2.5～3L。每2株樹為1個(gè)小區(qū)，每個(gè)處理重復(fù)4次，隨機(jī)區(qū)組排列。

分別于2018年9月9日和2019年9月15日（果實(shí)近成熟期）統(tǒng)計(jì)各小區(qū)樹上及樹下掉落的果實(shí)總數(shù)和輪紋病果數(shù)，計(jì)算病果率。

病果率=（樹上輪紋病果數(shù)+樹下輪紋病果數(shù)）/（樹上總果數(shù)+樹下總果數(shù)）×100%。

果實(shí)采收期，在每株果樹的東、南、西、北及頂部設(shè)5個(gè)取樣點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)隨機(jī)摘取5個(gè)果實(shí)，每個(gè)小區(qū)共采集50個(gè)果實(shí)放置于塑料保鮮袋中，室溫存放30d后，調(diào)查病果數(shù)，計(jì)算病果率和各藥劑的防治效果。

防治效果=（對(duì)照組病果率-處理組病果率）/對(duì)照組病果率×100%。

1.4數(shù)據(jù)分析

采用SPSS18.0計(jì)算EC50、EC95及95%置信限。采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行處理問數(shù)據(jù)的差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1 9種三唑類殺菌劑對(duì)蘋果輪紋病菌的毒力

由表1可以看出，氟菌唑和葉菌唑?qū)μO果輪紋病菌的毒力最低，EC50分別為1.751μg/mL和1.521μg/mL，EC95分別為57.805μg/mL和224.169μg/mL。苯醚甲環(huán)唑和氟硅唑的毒力最高，EC5。分別為0.107μg/mL和0.140μg/mL，分別為氟菌唑的16.364倍和12.507倍;EC95分別為4.479μg/mL和4.083μg/mL，分別為葉菌唑的50.049倍和54.903倍。氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、己唑醇、戊唑醇和腈菌唑的EC50分別為0.220、0.238、0.452、0.578μg/mL和1.274μg/mL，毒力分別為氟菌唑的7.959、7.357、3.874、3.029倍和1.374倍;EC95分別為11.284、7.066、17.173、35.571μg/mL和42.834μg/mL，毒力分別為葉菌唑的19.866、31.725、13.054、6.302倍和5.233倍。

2.2 4種三唑類殺菌對(duì)蘋果樹的安全性評(píng)價(jià)

對(duì)4種未登記用于蘋果輪紋病防治的三唑類殺菌劑進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，末次用藥10d后，30%氟菌唑WP、50%葉菌唑WG、25%己唑醇SC和12.5%氟環(huán)唑SC的1、2倍和4倍劑量處理的‘富士‘嘎啦和‘金帥3個(gè)品種蘋果枝條長度與清水對(duì)照無顯著差異，表明其對(duì)蘋果枝條伸長無刺激或抑制作用（表2）。同時(shí)，各劑量藥劑處理對(duì)蘋果葉色、形態(tài)等無不良影響，表明其在推薦劑量下對(duì)蘋果安全，可以用于蘋果輪紋病的防治。

2.3 9種三唑類殺菌劑對(duì)蘋果輪紋病的田間防效

由表3可以看出，在試驗(yàn)劑量下，9種三唑類殺菌劑對(duì)蘋果輪紋病菌均表現(xiàn)出一定的田間防效，但藥劑之間及年份之間均存在差異。在2018年，400g/L氟硅唑EC（57.1mg/kg）、250g/L丙環(huán)唑EC（166.7mg/kg）和10%苯醚甲環(huán)唑WG（66.7mg/kg）對(duì)蘋果輪紋病的防效位列前三，果實(shí)采收前分別為84.75%、83.66%和82.05%，采后30d防效分別為73.33%、73.33%和68.33%。50%葉菌唑WG雖室內(nèi)毒力較低，但按166.7mg/kg濃度噴施也有較高的防效，采前和采后30d防效分別為80.46%和66.67%。此外，430g/L戊唑醇SC（143.3 mg/kg）、12.5%氟環(huán)唑SC（83.3mg/kg）、12.5%腈菌唑ME（62.5mg/kg）、30%氟菌唑WP（100.0mg/kg）和25%己唑醇SC（62.5 mg/kg）的采前防效分別為78.76%、78.32%、75.67%、74.03%和73.47%，采后30d防效也均高于60.00%。在2019年，丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑和氟硅唑?qū)μO果輪紋病的防效位列前三，采收前分別為87.66%、87.4%和82.25%，采后30d分別為70.49%、73.77%和75.41%。此外，腈菌唑、戊唑醇、葉菌唑和氟環(huán)唑的采前防效均高于70.00%，采后30d防效均高于65.00%。綜合分析兩年的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，氟硅唑、丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)μO果輪紋病的防效較高。

3結(jié)論與討論

目前，三唑類殺菌劑是品種較多、應(yīng)用較廣的一類殺菌劑，但不同藥劑品種對(duì)不同靶標(biāo)病原菌的作用效果又存在差異。Fan等報(bào)道，戊唑醇對(duì)蘋果白腐病防效較高。溫浩等報(bào)道，氟環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇對(duì)草莓病原菌新擬盤多孢Neopestalotiopsis clavispora的室內(nèi)EC50分別為0.399、0.468μg/mL和0.331μg/mL。胡起興等報(bào)道，苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇對(duì)瓜葉菊菌核病菌Sclerotinia sp.的EC50分別為0.197 3μg/mL和0.4365μg/mL。蘇振國等報(bào)道，苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、氟環(huán)唑和戊唑醇對(duì)桑褐斑病病原菌殼豐孢Phloespora maculans（Bereng.）Allesch具有較高的抑制活性，對(duì)菌絲生長的ECso分別為0.0066、0.0205、0.0289μg/mL和0.2580μg/mL。曹海潮等報(bào)道，丙環(huán)唑、戊唑醇和氟硅唑?qū)Ψ杨i腐根腐病菌。本研究發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑和氟硅唑?qū)μO果輪紋病菌的室內(nèi)毒力最高，EC50分別為0.107μg/mL和0.140μg/mL;氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、己唑醇、戊唑醇和腈菌唑的EC50分別為0.220、0.238、0.452、0.578μg/mL和1.274μg/mL，氟菌唑和葉菌唑的毒力較低，EC50分別為1.751μg/mL和1.521μg/mL。

田間藥效試驗(yàn)方面，張彬彬等報(bào)道，30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑和12.5%氟環(huán)唑懸浮劑對(duì)煙草赤星病的田間防效分別為73.99%和70.57%。宋益民等報(bào)道，10%己唑醇懸浮劑、20%苯醚甲環(huán)唑微乳劑、250g/L丙環(huán)唑乳油和12.5%氟硅唑乳油對(duì)水稻紋枯病的田間防效分別為85.14%、94.84%、93.38%和93.01%;12.5%氟環(huán)唑懸浮劑、430g/L戊唑醇懸浮劑和10.0%己唑醇懸浮劑對(duì)水稻穗頸瘟的防效分別為84.34%、78.61%和82.86%，12.5%氟環(huán)唑懸浮劑、430g/L戊唑醇懸浮劑、10.0%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和250g/L丙環(huán)唑乳油對(duì)稻曲病的防效分別為83.56%、88.32%、85.43%和86.67%。本研究通過兩年田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，氟硅唑（57.1mg/kg）、丙環(huán)唑（166.7mg/kg）和苯醚甲環(huán)唑（66.7mg/kg）對(duì)蘋果輪紋病的防效最高，2018年的果實(shí)采收前防效分別為84.75%、83.66%和82.05%，采后30d防效分別為73.33%、73.33%和68.33%，2019年的果實(shí)采收前防效分別為82.25%、87.66%和87.41%，采后30d防效分別為75.41%、70.49%和73.77%。這可能是由于氟硅唑的滲透性較強(qiáng)，丙環(huán)唑?qū)赀^氧化氫酶有較強(qiáng)的結(jié)合能力，苯醚甲環(huán)唑能夠破壞真菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，造成細(xì)胞膜內(nèi)外滲透壓失衡、原生質(zhì)滲漏。同時(shí)，安全性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各藥劑對(duì)蘋果樹生長發(fā)育無不良影響。因此，供試9種三唑類殺菌劑均可用于蘋果輪紋病的防治，其中氟硅唑、丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑的防治效果最佳。