李鵬 艾文利 沈婕 蘇暢

【摘要】 目的：觀察乳源木蓮果水煎液對(duì)家兔離體十二指腸平滑肌活動(dòng)的影響，并探討其作用機(jī)制。方法：采用家兔離體十二指腸平滑肌運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，以平均張力和收縮頻率為指標(biāo)，觀察不同濃度的乳源木蓮果水煎液對(duì)正常家兔離體十二指腸平滑肌的影響，同時(shí)觀察高濃度的乳源木蓮果水煎液對(duì)乙酰膽堿、阿托品誘導(dǎo)的興奮及抑制狀態(tài)的離體十二指腸平滑肌活動(dòng)的影響。結(jié)果：不同濃度的乳源木蓮果水煎液均能夠明顯促進(jìn)離體十二指腸平滑肌的收縮活動(dòng)，增強(qiáng)平均張力并加快蠕動(dòng)頻率（P<0.05），且作用強(qiáng)度呈劑量依賴(lài)性。高濃度的乳源木蓮果水煎液對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的十二指腸平滑肌收縮活動(dòng)有協(xié)同作用，使平滑肌平均張力進(jìn)一步增強(qiáng)（P<0.05），但對(duì)蠕動(dòng)頻率無(wú)顯著影響;對(duì)阿托品誘導(dǎo)的十二指腸平滑肌舒張活動(dòng)有拮抗作用，使平滑肌平均張力增強(qiáng)、蠕動(dòng)頻率加快（P<0.05）。結(jié)論：乳源木蓮果水煎液具有促進(jìn)離體十二指腸平滑肌收縮的作用，其作用機(jī)制可能與激動(dòng)膽堿能M受體有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 乳源木蓮果 家兔 離體十二指腸 乙酰膽堿 阿托品

[Abstract] Objective： To observe the effect of water decoction of manglietia ruyuanensis on the activity of isolated duodenal smooth muscle of rabbits and explore its mechanism. Method： The motility of isolated duodenal smooth muscle of rabbits was studied， the average tension and contraction were taken as indexes， the effects of different concentrations of water decoction of manglietia ruyuanensis on isolated duodenal smooth muscle of normal rabbits were observed. The effects of high concentration of water decoction of manglietia ruyuanensis on the activity of isolated duodenal smooth muscle induced by acetylcholine and Atropine were also observed. Result： Different concentrations of water decoction of manglietia ruyuanensis could significantly promote the contractile activity of isolated duodenal smooth muscle， enhance the average tension and accelerate the peristaltic frequency （P<0.05）， and the effect intensity was dose-dependent. The results showed that high concentration of water decoction of manglietia ruyuanensis had synergistic effect on the contraction activity of duodenal smooth muscle induced by acetylcholine （P<0.05）， but had no significant effect on the frequency of peristalsis; it had antagonistic effect on the relaxation activity of duodenal smooth muscle induced by Atropine， increased the average tension of smooth muscle and accelerated the frequency of peristalsis （P<0.05）. Conclusion： The water decoction of manglietia ruyuanensis can promote the contraction of duodenal smooth muscle in vitro， and the mechanism may be related to the activation of cholinergic M receptor.

[Key words] Manglietia ruyuanensis Rabbit Isolated duodenum Acetylcholine Atropine

乳源木蓮（Manglietia yuyuanensis Law）又名狹葉木蓮，為木蘭科木蘭屬常綠喬木，是園林綠化中的優(yōu)良樹(shù)種，主要分布在我國(guó)廣東粵北山區(qū)（乳源）等地區(qū)。乳源木蓮果為乳源木蓮秋后摘取曬干的已成熟而未開(kāi)裂的果實(shí)。《中華本草》中記載乳源木蓮果具有疏肝理氣，潤(rùn)腸止咳的作用，主治肝胃氣痛，脘脅作脹，便秘，老年干咳。目前尚未見(jiàn)其對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能影響及作用機(jī)制的相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究乳源木蓮果水煎液對(duì)家兔離體腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響，并初步探討其作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 臺(tái)氏生理鹽水溶液（NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，CaCl2 0.2 g，NaHCO3 1.0 g，NaH2PO4 0.05 g，MgCl2 0.1 g，葡萄糖1.0 g，蒸餾水加至1 000 mL）[1];氯化乙酰膽堿（上海思域化工科技有限公司，批號(hào)：MK8041216，5 g/瓶）;硫酸阿托品注射液（浙江仙琚制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20053311，1 mL︰0.5 mg）;HW-400E型恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）;BL-420F生物信號(hào)采集與分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 研究時(shí)間為2020年3-6月。健康新西蘭家兔8只，體重1.5～2.5 kg，雌雄各半。由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（粵）2018-0006。

1.3 受試藥物及其制備 乳源木蓮果采自廣東省韶關(guān)市天井山粵凰生態(tài)農(nóng)業(yè)科技園，經(jīng)韶關(guān)市藥品檢驗(yàn)所鑒定為木蘭科植物乳源木蓮的果實(shí);稱(chēng)取乳源木蓮果40 g，用1 000 mL蒸餾水浸泡0.5 h，加熱煮沸60 min，兩層紗布過(guò)濾，濾渣加水500 mL，煮沸30 min，過(guò)濾，合并兩次濾液，濃縮為100 mL，按生藥量0.4 g/mL備用，再用蒸餾水分別稀釋藥物濃度為0.2、0.1 g/mL。

1.4 方法

1.4.1 離體腸標(biāo)本的制備 8只家兔于實(shí)驗(yàn)前禁食24 h，猛擊其頭枕部致昏，迅速剖開(kāi)腹腔，在胃幽門(mén)和十二指腸交界處為起點(diǎn)剪取一段約16 cm的十二指腸，立即放入盛有低溫臺(tái)氏液的小燒杯中，用鑷子夾住標(biāo)本一端在小燒杯中輕輕蕩動(dòng)進(jìn)行清洗備用。將離體腸除去腸系膜和脂肪后剪取成約1.5 cm的小段并置于盛有恒溫（37.0±0.5）℃臺(tái)氏液的恒溫平滑肌浴槽內(nèi)[2]。每只家兔取10段腸管作為受試樣本進(jìn)行離體實(shí)驗(yàn)，放置于臺(tái)氏液中備用。將壓力換能器與BL-420F型生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)連接。用細(xì)線將標(biāo)本一端系于通氣管鉤上，另一端垂直連接張力換能器。將通氣鉤連同標(biāo)本輕輕放入（37.0±0.5）℃的恒溫臺(tái)氏液中，并向其中緩慢通氧，速度為1～2 s出現(xiàn)1個(gè)氣泡，調(diào)節(jié)收縮基線，以前負(fù)荷1 g，平衡10 min，等待曲線描記穩(wěn)定開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 乳源木蓮果水煎液對(duì)正常家兔離體十二指腸平滑肌活動(dòng)的影響 從每只家兔取出的腸管中隨機(jī)取4段分入正常對(duì)照組、乳源木蓮果低濃度組、乳源木蓮果中濃度組和乳源木蓮果高濃度組中（每組受試腸管為8段）。待離體十二指腸平滑肌自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后，在平滑肌槽中分別加入不同濃度的乳源木蓮果水煎液0.5 mL，最終乳源木蓮果低、中、高濃度組換算成50 mL平滑肌浴槽內(nèi)藥物終濃度分別為1、2、4 g/L，正常對(duì)照組給予等容積臺(tái)氏液。各組觀察收縮曲線2 min，并記錄腸平滑肌收縮的平均張力和頻率，在每次給完藥后，用清潔的臺(tái)氏液沖洗標(biāo)本2～3次，等待標(biāo)本恢復(fù)收縮并平穩(wěn)10 min后再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

1.4.3 乳源木蓮果水煎液對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的十二指腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響 從每只家兔取出的腸管中隨機(jī)取3段分入正常對(duì)照組、乙酰膽堿組和乙酰膽堿+高濃度乳源木蓮果水煎液組中（每組受試腸管為8段）。其中乙酰膽堿組待離體十二指腸平滑肌自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后，在平滑肌槽中加入氯化乙酰膽堿0.2 mL（換算成50 mL平滑肌浴槽內(nèi)終濃度為2 g/L）;乙酰膽堿+高濃度乳源木蓮果水煎液組中同時(shí)加入氯化乙酰膽堿0.2 mL（換算成50 mL平滑肌浴槽內(nèi)終濃度為2 g/L）和高濃度乳源木蓮果水煎液0.5 mL（換算成50 mL平滑肌浴槽內(nèi)終濃度為4 g/L）;正常對(duì)照組給予等容積臺(tái)氏液。觀察指標(biāo)同1.4.2。

1.4.4 乳源木蓮果水煎液對(duì)阿托品誘導(dǎo)平滑肌舒張活動(dòng)的影響 從每只家兔取出的腸管中隨機(jī)取3段分入正常對(duì)照組、阿托品組和阿托品+高濃度乳源木蓮果水煎液組中（每組受試腸管為8段）。其中阿托品組待離體十二指腸平滑肌自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后，在平滑肌槽中加入阿托品0.2 mL（換算成50 mL平滑肌浴槽內(nèi)終濃度為1 g/L）;阿托品+高濃度乳源木蓮果水煎液組中同時(shí)加入阿托品0.2 mL（換算成50 mL平滑肌浴槽內(nèi)終濃度分別為1 g/L）和高濃度乳源木蓮果水煎液0.5 mL（換算成50 mL平滑肌浴槽內(nèi)終濃度為4 g/L）;正常對(duì)照組給予等容積臺(tái)氏液。觀察指標(biāo)同1.4.2。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析;計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳源木蓮果水煎液對(duì)正常家兔離體小腸平滑肌活動(dòng)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常離體腸平滑肌在恒溫臺(tái)氏液中呈現(xiàn)規(guī)律而穩(wěn)定的節(jié)律性收縮。正常對(duì)照組給藥前后平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;加入不同濃度的乳源木蓮果水煎液后離體腸平滑肌運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)，其中低、中、高劑量組給藥后與給藥前比較，平均張力均顯著增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;而中、高劑量組給藥后與給藥前比較，蠕動(dòng)頻率均顯著加快，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在組間比較中，給藥前各組平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;乳源木蓮果水煎液低、中、高劑量組給藥后平均張力及蠕動(dòng)頻率均較正常對(duì)照組給藥后增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且作用強(qiáng)度呈劑量依賴(lài)性。見(jiàn)表1。

2.2 乳源木蓮果水煎液對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)平滑肌收縮活動(dòng)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常離體腸平滑肌在恒溫臺(tái)氏液中呈現(xiàn)規(guī)律而穩(wěn)定的收縮。正常對(duì)照組給藥前后平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;加入乙酰膽堿后離體腸平滑肌張力增強(qiáng)，收縮力增強(qiáng)，蠕動(dòng)頻率加快。乙酰膽堿組給藥前后平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;同時(shí)加入乙酰膽堿和高濃度的乳源木蓮果水煎液后，離體腸平滑肌張力顯著增強(qiáng)，蠕動(dòng)頻率明顯加快，給藥前后平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在組間比較中，給藥前各組平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;給藥后，乙酰膽堿組、乙酰膽堿+高濃度乳源木蓮果水煎液組平均張力及蠕動(dòng)頻率均較正常對(duì)照組增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;給藥后，乙酰膽堿+乳源木蓮果水煎液高劑量組的平均張力較乙酰膽堿組增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而蠕動(dòng)頻率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 乳源木蓮果水煎液對(duì)阿托品誘導(dǎo)平滑肌舒張活動(dòng)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常離體腸平滑肌在恒溫臺(tái)氏液中呈現(xiàn)規(guī)律而穩(wěn)定的收縮，正常對(duì)照組給藥前后平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;加入阿托品后離體腸平滑肌張力降低，收縮力減弱，蠕動(dòng)頻率減慢，平均張力及蠕動(dòng)頻率給藥前后比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;同時(shí)加入阿托品和高濃度的乳源木蓮果水煎液后，離體腸平滑肌張力降低，給藥前后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而蠕動(dòng)頻率與給藥前比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在組間比較中，給藥前各組平均張力及蠕動(dòng)頻率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。給藥后，阿托品組的平均張力及蠕動(dòng)頻率均較正常對(duì)照組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;給藥后，阿托品+高濃度乳源木蓮果水煎液組的平均張力及蠕動(dòng)頻率均較阿托品組增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

胃腸道運(yùn)動(dòng)功能是消化道生理功能的重要組成部分，臨床上胃腸運(yùn)動(dòng)功能障礙性疾病如胃食管反流、功能性消化不良、胃輕癱、假性腸梗阻、腸易激綜合征及慢性便秘等發(fā)病率較高，其主要病理生理基礎(chǔ)為胃液分泌減少、胃排空延遲及腸蠕動(dòng)減緩[3]。目前臨床最常用的促胃腸動(dòng)力藥如嗎丁啉、西沙必利等都存在不同程度的不良反應(yīng)[4-5]。中醫(yī)認(rèn)為脾胃虛弱、氣機(jī)升降失調(diào)是胃腸動(dòng)力障礙性疾病發(fā)生的主要病機(jī)，通過(guò)運(yùn)用中藥能夠有效改善胃腸運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)胃腸動(dòng)力，且不良反應(yīng)小[6]。我國(guó)中草藥資源豐富，近年來(lái)針對(duì)中藥的胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)作用研究成為熱點(diǎn)，并提出“胃腸動(dòng)力中藥”這一概念。胃腸動(dòng)力中藥是指具有增強(qiáng)蠕動(dòng)、促進(jìn)排空、降逆止嘔、消痞除滿、疏肝利膽、健脾和胃及攻積導(dǎo)滯等作用的一類(lèi)中藥[7]。大量研究表明許多理氣類(lèi)中藥通過(guò)不同機(jī)制對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)有顯著調(diào)節(jié)作用[8-13]。乳源木蓮果具有疏肝理氣的作用，粵北地區(qū)民間常用其治療腹脹、便秘等。本研究以中醫(yī)的脾胃理論及氣機(jī)升降學(xué)說(shuō)作為促胃腸動(dòng)力中藥篩選的切入點(diǎn)，通過(guò)現(xiàn)代藥理學(xué)方法來(lái)研究乳源木蓮果對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響及其作用機(jī)制，以期為開(kāi)發(fā)新的強(qiáng)效促胃腸動(dòng)力藥物提供科學(xué)依據(jù)。

在完整機(jī)體內(nèi)，胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)由交感神經(jīng)系統(tǒng)、副交感神經(jīng)系統(tǒng)、腸神經(jīng)系統(tǒng)及多種體液因素共同調(diào)控。胃腸動(dòng)力障礙性疾病與植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂、免疫因素、胃腸激素、內(nèi)臟高敏感狀態(tài)、胃腸道炎癥等多種因素有關(guān)[14]。研究胃腸道運(yùn)動(dòng)藥物的實(shí)驗(yàn)方法主要有離體標(biāo)本運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)法和在體器官運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)法，小腸離體后雖然失去了外來(lái)神經(jīng)支配，但其壁內(nèi)神經(jīng)叢還存在，如果將小腸放置于適宜的環(huán)境條件下，小腸依然可以自主收縮活動(dòng)，本研究所選用的離體腸管實(shí)驗(yàn)法由于操作方法簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)條件容易控制，為常規(guī)的藥物初篩方法[15-16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示乳源木蓮果水煎液可增強(qiáng)腸道平滑肌收縮張力，加快腸蠕動(dòng)頻率，從而提示在脫離神經(jīng)和體液的調(diào)節(jié)因素后，乳源木蓮果對(duì)離體腸平滑肌自發(fā)活動(dòng)具有興奮作用。

乙酰膽堿作為膽堿能神經(jīng)釋放的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，通過(guò)激動(dòng)M受體促使細(xì)胞中的第二信使三磷酸肌醇和二酰甘油濃度增加，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子的釋放，使得平滑肌張力上升，其引起的小腸平滑肌收縮和細(xì)胞中的鈣離子濃度增多有關(guān)[17-18]。阿托品為M受體阻斷劑，通過(guò)拮抗乙酰膽堿與M受體結(jié)合，從而抑制平滑肌的收縮活動(dòng)[19-20]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高濃度的乳源木蓮果水煎液與乙酰膽堿可產(chǎn)生協(xié)同作用，同時(shí)顯著拮抗阿托品對(duì)平滑肌的抑制作用，從而提示乳源木蓮果可能是通過(guò)激動(dòng)腸道平滑肌的M受體而發(fā)揮擬膽堿作用。是否還有其他作用機(jī)制，有待于進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2020-07-14） （本文編輯：姬思雨）