楊平飛， 楊麗麗， 孔 嬌， 劉 海， 羅 鳴， 張金霞， 宋智琴， 吳明開*

(1.遵義師范學(xué)院 赤水河流域環(huán)境保護(hù)與山地農(nóng)業(yè)發(fā)展協(xié)同創(chuàng)新中心， 貴州 遵義 563006； 2.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 現(xiàn)代中藥材研究所， 貴州 貴陽 550006)

0 引言

【研究意義】白及(Bletillastriata)，又名白芨，為多年生蘭科白及屬草本植物，是我國(guó)常用的一味中藥材；具有收斂止血，消腫生肌等功效，廣泛用于醫(yī)藥行業(yè)，還被應(yīng)用于美容化工行業(yè)[1]。我國(guó)白及野生品主產(chǎn)于西南地區(qū)貴州、云南、廣西、四川等省區(qū)，目前以貴州栽培規(guī)模較大。作為全國(guó)中藥材主產(chǎn)地之一的貴州，具有特殊喀斯特地貌，全年各地降雨不均一，土壤保水性較差，嚴(yán)重影響中藥材生長(zhǎng)，成為制約中藥材產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一。隨著白及市場(chǎng)需求的逐年增加，白及規(guī)?；N植勢(shì)在必行。而面對(duì)缺少的生長(zhǎng)條件，亟需選擇抗旱性較好的白及品種進(jìn)行規(guī)?；N植，以滿足市場(chǎng)所需。【前人研究進(jìn)展】當(dāng)前，對(duì)白及的研究主要集中在組培快繁、大田栽培、化學(xué)成分、藥理等方面[2-8]。但對(duì)其栽培生理方面的研究相對(duì)較少，生理生態(tài)研究的不足，以致隨著白及栽培面積的擴(kuò)大，栽培技術(shù)相關(guān)問題日漸凸顯。隨著全球氣候變暖，干旱極端氣候事件的發(fā)生有加重增多的趨勢(shì)[9]。旱災(zāi)是中國(guó)最為嚴(yán)重農(nóng)業(yè)氣象災(zāi)害之一，造成的損失達(dá)62%[10]。吳明開等[11]對(duì)白及光合生理生態(tài)特性的研究表明，白及抗旱能力不強(qiáng)，建議白及在人工栽培時(shí)應(yīng)適當(dāng)遮陰，保持土壤與空氣濕度。過度干旱會(huì)導(dǎo)致植物細(xì)胞損傷、生理代謝受阻、光合作用減弱[12-13]，白及對(duì)干旱的適應(yīng)性直接影響到白及的人工栽培質(zhì)量?！狙芯壳腥朦c(diǎn)】銅仁、正安、安龍白及是當(dāng)前貴州小規(guī)模主栽的白及品種，由于各地栽培品種混亂，加之各區(qū)域降雨不均，土壤保水差，大田種植白及長(zhǎng)勢(shì)和質(zhì)量參差不齊，嚴(yán)重制約白及產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。【擬解決的關(guān)鍵問題】對(duì)不同種源白及在干旱脅迫下的光合生理特性進(jìn)行研究，明確其光合系統(tǒng)對(duì)干旱脅迫的響應(yīng)規(guī)律，以期為白及抗旱性機(jī)理研究、育種和白及種源選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

白及種苗：分別由銅仁、正安、安龍白及種子組培育苗而得，試驗(yàn)種苗為合格苗以上。

試劑：Hoagland's營(yíng)養(yǎng)液(南京信帆生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))、PEG6000(西隴科學(xué)股份有限公司生產(chǎn))、95%乙醇(上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn))。

儀器：BSA2202S-CW電子天平(DHG-9426A)(上海佑科儀器儀表有限公司生產(chǎn))、721-A型紫外分光光度計(jì)〔翱藝儀器(上海)有限公司生產(chǎn)〕、LI-6400XT光合儀(北京力高泰科技有限公司生產(chǎn))、研缽〔四川蜀玻(集團(tuán))有限責(zé)任公司生產(chǎn)〕、容量瓶〔四川蜀玻(集團(tuán))有限責(zé)任公司生產(chǎn)〕、試管〔四川蜀玻(集團(tuán))有限責(zé)任公司生產(chǎn)〕。

1.2 方法

選取長(zhǎng)勢(shì)均一白及種苗，置于Hoagland’s營(yíng)養(yǎng)液中培養(yǎng)，用珍珠巖固定，于人工氣候室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。定期補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)液，培養(yǎng)白及幼苗1個(gè)月。用Hoagland's營(yíng)養(yǎng)液添加PEG6000配成PEG濃度分別為0 g/L、5 g/L、20 g/L、50 g/L的營(yíng)養(yǎng)液模擬4種干旱脅迫水平，對(duì)不同種源白及進(jìn)行處理，每隔2 d換1次營(yíng)養(yǎng)液。第15天測(cè)量葉綠素、光合等指標(biāo)。

1.2.1 葉綠素含量測(cè)定 稱取新鮮白及葉片0.1 g，放入研缽中，加入液氮和3 mL95%乙醇，研磨均勻并定容至15 mL，黑暗浸提至葉片組織全部變白，運(yùn)用721-A型紫外分光光度計(jì)測(cè)定在665 nm和649 nm波長(zhǎng)的吸光值[14]。葉綠素含量=葉綠素濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)/鮮重(葉綠素濃度=葉綠素a+葉綠素b，葉綠素a=13.95A665-6.88A649，葉綠素b=24.96A649-7.32A665)。

1.2.2 光合指標(biāo)的測(cè)定 運(yùn)用LI-6400XT光合儀進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定部位：白及頂端第一片完全展開葉，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。測(cè)定時(shí)間：晴天早上9：00-11：00點(diǎn)進(jìn)行，測(cè)定指標(biāo)包括凈光合速率(Pn)、氣孔導(dǎo)度(Gs)、胞間CO2濃度(Ci)、蒸騰速率(Tr)。瞬時(shí)水分利用率(WUE)=Pn/Tr。

1.3 數(shù)據(jù)分析

運(yùn)用Excel 2003和SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同PEG濃度處理不同種源白及的葉綠素含量

葉綠素是光合作用中的主要色素，在環(huán)境的變化過程中保證光合系統(tǒng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn)[9]。從表1可知，銅仁白及、安龍白及以及正安白及葉綠素在不同PEG濃度處理下葉綠素含量差異明顯。銅仁白及在空白處理時(shí)葉綠素含量最高,為2.07SPAD，在PEG濃度為50 g/L時(shí)葉綠素含量最低，為0.71SPAD；安龍白及在空白處理時(shí)葉綠素含量最高，為2.33SPAD，在PEG濃度為50 g/L時(shí)葉綠素含量最低，為0.91SPAD；正安白及在PEG濃度空白處理時(shí)葉綠素含量最高，為2.27SPAD，在PEG濃度為50 g/L時(shí)葉綠素含量最低，為0.62SPAD。各種源白及葉綠素隨著PEG濃度的增加呈下降趨勢(shì)，且低于對(duì)照，干旱對(duì)白及光合作用具有較大影響。在空白處理及各PEG濃度處理中，以安龍白及葉綠素含量較高，銅仁白及葉綠素含量較低；隨著PEG濃度的增大，正安白及葉綠素的下降幅度最大，達(dá)64.15%，安龍白及葉綠素的下降幅度最小，為50.16%。

表1 不同PEG濃度處理不同種源白及的葉綠素含量

2.2 不同PEG濃度處理不同種源白及的光合指標(biāo)變化

2.2.1 凈光合速率 凈光合速率反映光合作用的強(qiáng)弱。從表2可知，在未用PEG處理時(shí)，銅仁、安龍和正安白及的凈光合速率分別為7.37 μmol/(m2·s)、6.98 μmol/(m2·s)和4.79 μmol/(m2·s)；在PEG濃度為50 g/L時(shí)，銅仁、安龍和正安白及的凈光合速率分別為1.01 μmol/(m2·s)、1.37 μmol/(m2·s)和0.83 μmol/(m2·s)。各種源白及凈光合速率隨著PEG濃度的上升呈下降趨勢(shì)。銅仁白及凈光合速率下降幅度最大，達(dá)79.48%，安龍白及凈光合速率下降幅度最小，為73.34%。

表2 不同濃度PEG處理不同種源白及的凈光合速率

2.2.2 蒸騰速率 蒸騰速率反映植物地上部分失水快慢，在受到干旱脅迫時(shí)會(huì)發(fā)生不同程度的減弱。從表3可知，在未用PEG處理時(shí)，各種源白及蒸騰速率最高，銅仁、安龍和正安白及的蒸騰速率分別為3.07 mmol/(m2·s)、3.03 mmol/(m2·s)和3.04 mmol/(m2·s)，其中，銅仁白及蒸騰速率最高，安龍白及蒸騰速率最低；在PEG濃度為50 g/L時(shí)，各種源白及蒸騰速率最低，銅仁、安龍和正安白及的蒸騰速率分別為0.43 mmol/(m2·s)、0.62 mmol/(m2·s)，和0.32 mmol/(m2·s)。各種源白及蒸騰速率隨著PEG濃度的上升呈下降趨勢(shì)。正安白及蒸騰速率下降幅度最大，達(dá)85.52%，安龍白及蒸騰速率下降幅度最小，為78.30%。

表3 不同濃度PEG處理不同種源白及的蒸騰速率

2.2.3 瞬時(shí)水分利用率 瞬時(shí)水分利用率是凈光合速率與蒸騰速率的比值， 由于各時(shí)期蒸騰速率下降幅度大于凈光合速率下降幅度，所以提高了瞬時(shí)水分利用率。從表4可知，在未用PEG處理時(shí)，銅仁、安龍以及正安白及瞬時(shí)水分利用率分別為2.40%、2.31%和1.68%，其中銅仁白及瞬時(shí)水分利用率最高，正安白及瞬時(shí)水分利用率最低；在PEG濃度為50 g/L時(shí)，銅仁、安龍以及正安白及瞬時(shí)水分利用率分別為2.48%、2.19%和2.58%。各種源白及瞬時(shí)水分利用率隨著PEG濃度的上升呈現(xiàn)先降后升的變化，說明凈光合速率下降幅度較蒸騰速率下降幅度先變小后增大。

表4 不同濃度PEG處理不同種源白及的瞬時(shí)水分利用率

2.2.4 氣孔導(dǎo)度 氣孔導(dǎo)度的大小反映水分蒸發(fā)的速度，在干旱脅迫的情況下，白及會(huì)調(diào)節(jié)氣孔的開張，保持體內(nèi)水環(huán)境的平衡。從表5可知，在未用PEG處理時(shí)，銅仁、安龍和正安白及的氣孔導(dǎo)度分別為0.055 5 μmol/(m2·s)、0.055 8 μmol/(m2·s)和0.042 1 μmol/(m2·s)，其中安龍白及氣孔導(dǎo)度最高，正安白及氣孔導(dǎo)度最低；在PEG濃度為50 g/L時(shí)，銅仁、安龍和正安白及的氣孔導(dǎo)度分別為0.015 5 μmol/(m2·s)、0.023 1 μmol/(m2·s)和0.012 4 μmol/(m2·s)，各種源白及氣孔導(dǎo)度隨著PEG濃度的上升呈下降趨勢(shì)。PEG濃度從5 g/L上升至50 g/L，各種源白及氣孔導(dǎo)度下降不顯著，銅仁白及氣孔導(dǎo)度下降幅度最大，達(dá)70.36%，安龍白及氣孔導(dǎo)度下降幅度最小，為54.97%。

表5 不同濃度PEG處理不同種源白及的氣孔導(dǎo)度

2.2.5 胞間CO2濃度 干旱脅迫下，氣孔導(dǎo)度通過減小開度來維持體內(nèi)水環(huán)境的平衡，胞間CO2濃度隨之減小。從表6可知，在未用PEG處理時(shí)，銅仁、安龍和正安白及的胞間CO2濃度分別為283.55 μmol/mol、281.27 μmol/mol和281.26 μmol/mol，其中銅仁白及胞間CO2濃度最高，正安白及胞間CO2濃度最低。各種源白及胞間CO2濃度隨著PEG濃度的上升呈下降趨勢(shì)。正安白及胞間CO2濃度下降幅度最大，達(dá)56.05%，安龍白及胞間CO2濃度下降幅度最小，為39.50%。

表6 不同濃度PEG處理不同種源白及的胞間CO2濃度

3 討論

研究中，銅仁白及、安龍白及和正安白及的葉綠素、凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度、蒸騰速率等光合指標(biāo)均隨著PEG濃度的增大而呈下降趨勢(shì)，其中安龍白及的光合指標(biāo)下降幅度最??；3個(gè)種源白及瞬時(shí)水分利用率均隨PEG濃度上升至20 g/L時(shí)呈下降趨勢(shì)，隨后隨PEG濃度上升至50 g/L時(shí)呈上升趨勢(shì)。

當(dāng)植物受水分脅迫時(shí)，會(huì)導(dǎo)致葉片氣孔關(guān)閉，引起氣孔導(dǎo)度降低，使光合同化底物CO2減少。在干旱脅迫下，植物碳同化能力降低，吸收的光能無法有效利用，對(duì)光合機(jī)構(gòu)造成損害，進(jìn)一步對(duì)光合作用產(chǎn)生非氣孔限制[15-16]。研究結(jié)果證實(shí)，干旱脅迫可使植物的光合能力下降[17-18]。葉綠素含量隨著PEG濃度的增大而呈下降趨勢(shì)與吳明開等[11]研究一致。氣孔導(dǎo)度、凈光合速率等光合指標(biāo)隨著PEG濃度的增大而呈下降趨勢(shì)，與權(quán)雪等[19]研究一致，干旱處理使白及的氣孔導(dǎo)度和光合速率明顯下降。

4 結(jié)論

安龍白及抗干旱脅迫較好，在大田栽培時(shí)可優(yōu)先選擇安龍白及。在白及的栽培過程中，若遇到高溫干旱，要及時(shí)做好遮陰、水分供應(yīng)，對(duì)于緩解干旱脅迫對(duì)白及的影響具有重要作用。