李敏，周瀟瀟，黃云川，林鑫，李桂黎，李原野，李俐睿

（四川省成都市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川成都 610041）

為了解豬巴氏桿菌病在當(dāng)前成都地區(qū)豬群中的感染和流行情況，2020 年2～12 月，筆者從成都市三個(gè)無(wú)害化處理廠采集了1 037份病死豬的淋巴結(jié)、脾臟和肝臟混合樣品，用熒光定量RT-PCR 方法檢測(cè)豬巴氏桿菌病病原，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品來(lái)源 在成都市三個(gè)無(wú)害化處理廠，采集來(lái)源于成都市18 個(gè)區(qū)（市）縣的病死豬樣品（淋巴結(jié)、脾臟和肝臟混合樣），每月采集1 次，全年共采集混合樣品1 037頭份。

1.1.2 主要試劑 磁珠法病毒DNA/RNA 提取試劑盒、豬巴氏桿菌病單重?zé)晒釸T-PCR 檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自北京世紀(jì)元亨生物技術(shù)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理 向無(wú)菌的2 mL Lysing Matrix組織研磨管中加入1 mL PBS液，再加入適量組織混合樣品，置于FastPrep-24?5G 研磨儀中研磨30 s，取出置離心機(jī)中以8 000 r/min離心1 min，取上清備用。

1.2.2 DNA抽提 采用磁珠法病毒DNA/RNA提取法使用KingFisher DUO 自動(dòng)化提取儀對(duì)病毒DNA 進(jìn)行提取，執(zhí)行Tian_KingFisher_Duo.bdz 程序進(jìn)行DNA 抽提。程序執(zhí)行完畢，取出DNA，用封口膜封好并保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 熒光定量RT-PCR 反應(yīng) 將試劑盒中的PCR 反應(yīng)液和陰、陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行瞬時(shí)離心，備用。向PCR 反應(yīng)管內(nèi)依次加入豬巴氏桿菌PCR反應(yīng)液20 μL、DNA 模板5 μL，配制成25 μL 反應(yīng)體系，并設(shè)立陰、陽(yáng)性對(duì)照。反應(yīng)條件如下：37 ℃2 min，95 ℃5min；95 ℃5 s，55 ℃40 s，共40 個(gè)循環(huán)；在55 ℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)，報(bào)告基團(tuán)為“FAM”，淬滅基團(tuán)為“NONE”。

1.2.4 結(jié)果判定 若陽(yáng)性對(duì)照Ct 值≤35，陰性對(duì)照Ct值＞38或無(wú)Ct值，則試驗(yàn)成立。如Ct值≤35并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，則為豬巴氏桿菌病陽(yáng)性；如35＜Ct值＜38需重新提取DNA進(jìn)行擴(kuò)增，如仍為可疑，則判定為陽(yáng)性；如Ct 值＞38 或無(wú)Ct值，判為陰性。

2 結(jié)果與分析

2020年2月至12月，共檢測(cè)病死豬內(nèi)臟組織混合樣品1 037 份，其中豬巴氏桿菌病核酸陽(yáng)性的有93份，平均陽(yáng)性率達(dá)8.97%。具體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

檢測(cè)結(jié)果顯示2020 年成都市病死豬中豬巴氏桿菌病的陽(yáng)性感染率為8.97%，說(shuō)明該病在成都市豬群中有存在，對(duì)成都生豬養(yǎng)殖造成了一定的威脅。多殺性巴氏桿菌屬于豬呼吸道內(nèi)的一種常見(jiàn)條件性致病菌［1］，該病與氣候變化、飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)葢?yīng)激因素緊密相關(guān)［2］。豬群飼養(yǎng)密度大，圈舍通風(fēng)不良，衛(wèi)生條件差，或發(fā)生其他傳染病時(shí)，均可導(dǎo)致豬的免疫力下降，從而誘發(fā)豬巴氏桿菌?。?］。

3 防控建議

3.1 疫苗免疫接種 疫苗接種是預(yù)防該病的主要措施，但大多中小養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）并未進(jìn)行疫苗免疫。目前市面上有多種疫苗可供選擇，如弱毒疫苗、滅活疫苗、莢膜亞單位疫苗等，多以聯(lián)苗為主［4］，較為常見(jiàn)的有豬瘟-丹毒-肺疫三聯(lián)活疫苗、豬丹毒-肺疫二聯(lián)活疫苗等，均有較好的免疫效果。需要注意的是，在免疫前后10 d 左右，禁止飼喂含抗生素的藥物和飼料，否則會(huì)直接影響免疫效果［5］。

表12020 年成都市無(wú)害化處理廠豬巴氏桿菌病檢測(cè)結(jié)果

3.2 日常管理 豬群的日常管理與該病的發(fā)生密切相關(guān)。養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)科學(xué)規(guī)范養(yǎng)殖密度，及時(shí)清運(yùn)糞污，降低豬舍內(nèi)有害氣體的濃度，保證豬舍內(nèi)的空氣流通，溫濕度適宜；注意飼料營(yíng)養(yǎng)和質(zhì)量，禁止飼喂發(fā)霉變質(zhì)的飼料，保持飲水清潔，提高豬只免疫力；做好驅(qū)蟲(chóng)、防蚊、防鼠工作；養(yǎng)殖場(chǎng)盡量做到“自繁自養(yǎng)”，堅(jiān)持“全進(jìn)全出”制度，盡可能地減少豬只混合飼養(yǎng)。

3.3 日常監(jiān)測(cè) 定期對(duì)種豬進(jìn)行病原學(xué)監(jiān)測(cè)，對(duì)陽(yáng)性豬及時(shí)隔離、淘汰，建立無(wú)巴氏桿菌病種豬群；商品豬也應(yīng)定期檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性豬盡快隔離治療，及時(shí)淘汰無(wú)治療價(jià)值的病豬，其他豬只進(jìn)行緊急免疫或藥物治療。進(jìn)行了免疫接種的豬場(chǎng)應(yīng)定期進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)，抗體水平較低的豬應(yīng)及時(shí)補(bǔ)免，以保證豬群的免疫質(zhì)量。

3.4 治療 選用具有抑制和殺滅巴氏桿菌的抗菌藥物，并結(jié)合對(duì)癥治療。有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)最好進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，有針對(duì)性的用藥，以免造成抗生素濫用。

3.5 消毒 豬場(chǎng)應(yīng)制定科學(xué)合理的消毒方案，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)外環(huán)境、人員車輛、墊料、排泄物及運(yùn)載工具等進(jìn)行嚴(yán)格消毒。禁止飼養(yǎng)狗、貓等動(dòng)物，加強(qiáng)滅蚊蠅和滅鼠工作，控制疫病傳播。每批豬出欄后徹底清洗消毒并空欄1周以上。

3.6 無(wú)害化處理 在生產(chǎn)過(guò)程中出現(xiàn)病豬死亡的，應(yīng)將死豬裝入專用的防滲漏尸體袋中，按規(guī)定進(jìn)行無(wú)害化處理。同時(shí)，要對(duì)病死豬的圈舍和尸體堆放點(diǎn)進(jìn)行全面徹底地清洗消毒?！?/p>