苗仁華，莊星星，張 鵬

(安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院藥劑科，安徽 巢湖 238000)

茶堿的臨床治療安全窗較窄，相同劑量個(gè)體血藥濃度差異大[1-2]；其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程個(gè)體差異大，血藥濃度超過臨床推薦治療范圍時(shí)極易出現(xiàn)中毒癥狀[3-4]。因此，在使用茶堿類藥物時(shí)對(duì)其進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)顯得尤為重要，血清茶堿濃度監(jiān)測(cè)逐漸被臨床醫(yī)師和患者所接受，血藥濃度監(jiān)測(cè)被認(rèn)為是保證茶堿類藥物合理使用的最重要手段[5]。

室內(nèi)質(zhì)量控制(internal quality control，IQC)作為全面質(zhì)量管理體系的重要環(huán)節(jié)，是檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性、及時(shí)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)誤差的管理體系[6-7]?，F(xiàn)階段，治療藥物監(jiān)測(cè)工作實(shí)現(xiàn)IQC的一般方法是由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取特定的方法和程序，連續(xù)一段時(shí)間內(nèi)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的可靠性，以判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性[8-10]。治療藥物監(jiān)測(cè)室實(shí)行IQC旨在對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)的真實(shí)性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以判斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)工作的可靠性。 IQC結(jié)果對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的有效性和準(zhǔn)確性有著參考價(jià)值。

因此，本研究采用自制不同濃度的茶堿質(zhì)控血清，連續(xù)20 d不間斷監(jiān)測(cè)質(zhì)控血清，繪制質(zhì)控圖，結(jié)合 Westgard多規(guī)則[6,11]質(zhì)量控制評(píng)價(jià)體系評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室IQC情況，建立、完善茶堿血藥濃度監(jiān)測(cè)IQC體系[12]，提高血藥濃度監(jiān)測(cè)的準(zhǔn)確性。

1 材料

1.1 儀器

Viva-E型全自動(dòng)生化分析儀(德國SIEMENS公司)；Sartorius型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；TGL-16E型高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司)；海爾DW-4OL188型醫(yī)用低溫保存箱(青島海爾特種電器有限公司)。

1.2 藥品與試劑

Emit法茶堿檢測(cè)試劑(德國SIEMENS公司，批號(hào)為4P01946963)；茶堿對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，規(guī)格為100 mg/支，批號(hào)為100121-201805)；Emit法茶堿定標(biāo)液(0、2.5、5.0、10.0、20.0及40.0 μg/ml，德國SIEMENS公司，批號(hào)為4P10938092)；空白血清(上海斯信生物科技有限公司，批號(hào)為MR16118)

2 方法與結(jié)果

2.1 質(zhì)控樣品的制備

精密稱定茶堿對(duì)照品10.0 mg置于10.0 ml容量瓶中，定容，制備1.0 mg/ml的茶堿對(duì)照品溶液，備用。

分別精密移取1.0 mg/ml的茶堿對(duì)照品溶液50.0、100.0及200.0 μl置于10.0 ml容量瓶中，分別用9 950.0、9 900.0及9 800.0 μl空白血清定容，制備成質(zhì)量濃度為5.0、10.0及20.0 μg/ml的質(zhì)控樣品。

2.2 IQC規(guī)則

2.2.2 Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則：將低、中及高3個(gè)濃度水平的質(zhì)控測(cè)定值轉(zhuǎn)換成Z分?jǐn)?shù)形式，繪制Z-分?jǐn)?shù)質(zhì)控圖。 根據(jù)Westgard多規(guī)則控制方法，當(dāng)Z>2或者Z<-2時(shí)，即違反12 s規(guī)則的警告；當(dāng)Z>3或者Z<-3時(shí)，即違反13 s規(guī)則，為失控[13]。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

每次測(cè)定前，取出在2～8 ℃保存的茶堿定標(biāo)液放置室溫(25 ℃)，分別取0、2.5、5.0、10.0、20.0及40.0 μg/ml定標(biāo)液1.0 ml上機(jī)檢測(cè)，儀器自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.4 精密度

取5.0、10.0及20.0 μg/ml的質(zhì)控樣品。連續(xù)測(cè)量3次，計(jì)算日內(nèi)精密度；連續(xù)測(cè)量3 d，計(jì)算日間精密度，結(jié)果見表1。精密度試驗(yàn)結(jié)果符合《中華人民共和國藥典：四部》(2015年版)通則9012[14]的要求。

表1 茶堿血藥濃度IQC精密度和回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Precision and recovery test results of IQC of blood concentration of theophylline

2.5 回收率

日內(nèi)平均回收率=精密度試驗(yàn)中日內(nèi)差測(cè)得值/質(zhì)控樣本標(biāo)示濃度×100%；日間平均回收率=精密度試驗(yàn)中日間差測(cè)得值/質(zhì)控樣本標(biāo)示濃度×100%，見表1?；厥章试囼?yàn)結(jié)果符合《中華人民共和國藥典：四部》(2015年版)通則 9012的要求。

2.6 穩(wěn)定性

取5.0、10.0及20.0 μg/ml的質(zhì)控樣品。將質(zhì)控樣品即時(shí)進(jìn)樣后，放置于冷凍條件(-80 ℃)下分別冷凍儲(chǔ)藏12、24和48 h后取出，復(fù)融測(cè)量，計(jì)算RSD，考察質(zhì)控樣本在冷凍條件(-80 ℃)下反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性，見表2。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果符合《中華人民共和國藥典：四部》(2015年版)通則 9012的要求。

表2 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n=5)Tab 2 Results of stability test (n=5)

2.7 回顧性質(zhì)量控制

2.7.1 Levey-Jennings質(zhì)控方法：(1)低濃度質(zhì)控樣品連續(xù)20 d測(cè)定結(jié)果顯示，靶值(平均值)為5.36 μg/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.20；10個(gè)測(cè)定值高于靶值，10個(gè)測(cè)定值低于靶值；2個(gè)測(cè)定值低于控制線(-1 s)，3個(gè)測(cè)定值高于控制線(+1 s)；第15個(gè)點(diǎn)超過警戒線(+2 s)，提示警告1次。見圖1。(2)中濃度質(zhì)控樣品連續(xù)20 d測(cè)定結(jié)果顯示，靶值(平均值)為10.81 μg/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.39；10個(gè)測(cè)定值高于靶值，10個(gè)測(cè)定值低于靶值；4個(gè)測(cè)定值低于控制線(-1 s)，3個(gè)測(cè)定值高于控制線(+1 s)；第11個(gè)點(diǎn)超過警戒線(+2 s)，提示警告1次，見圖2。(3)高濃度質(zhì)控樣品連續(xù)20 d測(cè)定結(jié)果顯示，靶值(平均值)為20.33 μg/ml，標(biāo)準(zhǔn)差為0.89；10個(gè)測(cè)定值高于靶值，10個(gè)測(cè)定值低于靶值；2個(gè)測(cè)定值低于控制線(-1 s)，4個(gè)測(cè)定值高于控制線(+1 s)；第12個(gè)點(diǎn)超過警戒線(+2 s)，提示警告1次，見圖3。

圖1 低濃度茶堿質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)分布圖趨勢(shì)Fig 1 Trend of quality control data distribution of low concentration theophylline

圖2 中濃度茶堿質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)分布圖趨勢(shì)Fig 2 Trend of quality control data distribution of medium concentration theophylline

圖3 高濃度茶堿質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)分布圖趨勢(shì)Fig 3 Trend of quality control data distribution of high concentration theophylline

2.7.2 Westgard多規(guī)則控制方法：將低、中及高3個(gè)濃度水平的質(zhì)控測(cè)定值轉(zhuǎn)換成Z分?jǐn)?shù)形式，繪制Z-分?jǐn)?shù)質(zhì)控圖，見圖4。由圖4可知，低濃度第15個(gè)測(cè)量值Z分?jǐn)?shù)>2,即違反12 s規(guī)則的警告；高濃度第12個(gè)測(cè)量值Z分?jǐn)?shù)>2,即違反12 s規(guī)則的警告。

圖4 茶堿Z-分?jǐn)?shù)質(zhì)控圖Fig 4 Z-score quality control chart of theophylline

3 討論

隨著藥學(xué)服務(wù)轉(zhuǎn)型的需要，藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作越來越得到臨床的接受和認(rèn)可，而數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性顯得日益重要，受臨床關(guān)注程度得到提升。做好室間質(zhì)控和IQC日益受到藥學(xué)專業(yè)人員的重視[15]。因此，本研究結(jié)合日常工作實(shí)際，依據(jù)《中華人民共和國藥典：四部》(2015年版)通則中相關(guān)要求，對(duì)所建立的血藥濃度監(jiān)測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證，參照臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量專用要求建立IQC體系，在樣本的采集、保存和測(cè)定等方面提高樣本穩(wěn)定性的控制方法，建立血藥濃度監(jiān)測(cè)的質(zhì)量控制方法，規(guī)范工作流程，保證所得結(jié)果及時(shí)可靠[16]。

目前，實(shí)驗(yàn)室外部質(zhì)量控制的權(quán)威性無疑是高于IQC的，但實(shí)驗(yàn)室外部質(zhì)量控制的成本高、對(duì)實(shí)驗(yàn)室樣本數(shù)量要求比較高，因此實(shí)驗(yàn)室外部質(zhì)量控制的可操作性一般。此外，實(shí)驗(yàn)室外部質(zhì)量控制也是建立在IQC能夠切實(shí)有效實(shí)施的基礎(chǔ)上，由此可見，IQC是實(shí)驗(yàn)室全部質(zhì)量控制工作的基礎(chǔ)。IQC開展的目的就是把檢測(cè)結(jié)果的誤差控制在允許范圍內(nèi)，保證檢測(cè)過程精密、準(zhǔn)確和可重復(fù)，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差處于規(guī)定的置信區(qū)間內(nèi)[17]。IQC主要措施就是對(duì)同一樣本重復(fù)多次進(jìn)行測(cè)定，然后使用對(duì)照樣品比較測(cè)定結(jié)果，對(duì)測(cè)得結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)價(jià)和控制[18]。本研究選用日內(nèi)差、日間差2個(gè)指標(biāo)考核精密度試驗(yàn)，結(jié)果符合《中華人民共和國藥典》對(duì)生物樣品檢測(cè)誤差的要求。