吳淑花 劉慶芝 羅彩群

深圳市婦幼保健院生殖免疫綜合科 (廣東 深圳 518028)

染色體羅伯遜易位是導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)及胎兒染色體異常的常見原因，在人群中的發(fā)病幾率為1/900～1/1000[1]，它的發(fā)生機制通常是兩條近端著絲粒染色體(D、G 組)分別在著絲粒附近斷裂然后重新連接，由于兩條長臂基因并未丟失，表型及智力發(fā)育一般正常。按照染色體的不同，可分為同源性染色體羅伯遜易位及非同源性染色體羅伯遜易位。對于同源性的染色體羅伯遜易位，增加了染色體單親二倍體(uniparental disomy，UPD)的風(fēng)險，Berend等[2]報道6例同源性染色體羅伯遜易位，有4例為單親二倍體(66%)，而單親二倍體與常染色體隱性遺傳病、基因印跡障礙性疾病、復(fù)雜型綜合征等密切相關(guān)[3]。本文一例妻子反復(fù)自然流產(chǎn)的男性，其外周血染色體核型為45、XY、rob(22；22)(q10；q10)，通過染色體微陣列分析檢測，提示為22號染色體單親二倍體(UPD)。

1 資料與方法

1.1 對象 男性，35歲，妻子孕4產(chǎn)0，反復(fù)自然流產(chǎn)4次，每次胚胎于孕7周左右停育。該男性外周血染色體提示為22號染色體同源性羅伯遜易位[45，XY，rob(22；22)(q10；q10)](見圖1)。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取 采用Centra puregene試劑盒(美國Qiangen公司)提取孕婦外周血DNA。

1.2.2 染色體微陣列芯片檢測 采用單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNP)-Array分析平臺，應(yīng)用美國Affymetrix公司生產(chǎn)的全基因組CytoScan 750k芯片(55萬CNVs探針+20萬SNP探針)，嚴(yán)格按照芯片標(biāo)準(zhǔn)操作流程分別對提取的基因組DNA進行酶切、連接、擴增、純化、片段純化、標(biāo)記、芯片雜交、洗滌及掃描。對所得的原始數(shù)據(jù)應(yīng)用ChAs 3.0軟件進行分析。

圖1 染色體核型為45，XY，rob(22；22)(q10；q10)。

3 結(jié) 果

基因芯片提示該男性外周血的兩條22號染色體為同一親本，為22染色體單親二倍體。孕婦的外周血分子核型為arr(22)×2hmz。

圖2 染色體微陣列分析結(jié)果為arr(22)×2hmz，22號染色體單親二倍體。

4 討 論

該例男性染色體G顯帶核型為45，XY，rob(22；22)(q10；q10)，為同源性染色體平衡易位，從理論上講，當(dāng)其與正常配子結(jié)合后，只能形成單體或三體，無法生育正常的孩子，這也是其妻子多次發(fā)生流產(chǎn)的原因。然而，這類攜帶者有可能在減數(shù)分裂中，同源的羅伯遜易位染色體形成兩條獨立的染色單體，形成有23條正常染色體的配子，從而有生育正常后代的可能性[4]。Berend等[2]提出對所有的同源性染色體羅伯遜易位，均應(yīng)提供分子檢測，排除染色體單親二倍體的風(fēng)險，為很多的隱性遺傳病提供分析證據(jù)，特別是14號及15號染色體，與不良臨床后果相關(guān)。

單親二倍體是指在染色體核型中，某些同源的染色體或染色體的部分片段來源于父母的一方，而沒有另一方染色體的存在[5]。而單親二倍體發(fā)生的幾率為1/3500[6]，單親二倍體的發(fā)生機制包括配子互補、三體自救、單體復(fù)制、有絲分裂異常等，其發(fā)生的易感因素可能包括孕婦高齡和試管嬰兒促排卵等[7-8]。本研究利用染色體核型分析檢測出該例男子為22號同源性染色體羅伯遜易位，利用CMA檢測提示其22號染色體的所有SNP位點均為純合子基因型，但拷貝數(shù)為正常的二倍體，提示其22號染色體單親二倍體。該染色體的發(fā)生機制考慮為單體復(fù)制，即在正常精子受精后產(chǎn)生染色體單體合子，常染色體單染色體在胚胎發(fā)生早期可能是致命的，可以通過單染色體的合子后復(fù)制來挽救。通過單染色體的復(fù)制形成單染色體自救，而導(dǎo)致了UPD。越來越多隱性遺傳病是由UPD引起的，如自閉癥、軟骨發(fā)育不良、杜氏肌營養(yǎng)不良癥以及血友病A等[9]?；蛴≯E障礙性疾病，如母源性15q11～13UPD會導(dǎo)致Prader-Willi綜合征，如父源性15q11～13UPD會導(dǎo)致Angelman綜合征等。而單親二倍體的檢出，提高了常染色體隱性遺傳病及基因印跡性疾病的檢出。所以本研究認(rèn)為對同源性染色體羅伯遜易位進行單親二倍體的排除是非常有必要的。

與細(xì)胞遺傳學(xué)分析比較，染色體微陣列基因芯片具有高分辨率，高通量分析基因組拷貝數(shù)變異的特點，為染色體微缺失、微重復(fù)、雜合性缺失及單親二倍體檢測提供了高效的技術(shù)平臺。