方磊，王雨辰，馬永慶，張海欣，陸路，王憬，谷瑞增，魏穎

（中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院，北京市蛋白功能肽工程技術(shù)研究中心，北京 100015）

勃起功能障礙（ED）是一個(gè)陰莖能否勃起以及能否保持陰莖硬度以達(dá)到滿意性交的問(wèn)題，越來(lái)越多的男性患有ED，且患病率逐年升高[1]。陰莖勃起是一個(gè)復(fù)雜的心理生理過(guò)程，本質(zhì)是一系列神經(jīng)-血管活動(dòng)，受到性刺激后，非膽堿能、非腎上腺素能神經(jīng)末梢會(huì)釋放神經(jīng)遞質(zhì)，刺激神經(jīng)型一氧化氮合酶（nNOS）和海綿體血管內(nèi)皮細(xì)胞上的內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）催化產(chǎn)生NO，并經(jīng)過(guò)NO/cGMP信號(hào)通路的傳導(dǎo)，使陰莖海綿體平滑肌松弛，血管擴(kuò)張充血，促進(jìn)并維持陰莖勃起[2,3]。睪酮是機(jī)體內(nèi)主要的循環(huán)雄激素，對(duì)男性的性別分化和發(fā)育、第二性征、生殖道功能和性功能均有重要作用。精子是在睪丸細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的，生精過(guò)程中睪丸內(nèi)的生精細(xì)胞所處的氧化環(huán)境與精子的發(fā)育和分化密切相關(guān)[4]。目前，臨床上有多種治療ED的方法，如5型磷酸二酯酶抑制劑、手術(shù)治療、真空負(fù)壓吸引和陰莖假體植入術(shù)等多種治療手段，但這些治療手段因有較嚴(yán)重的不良反應(yīng)并不為多數(shù)患者所接受[5-7]。因此，開(kāi)發(fā)針對(duì)ED的口服新藥物是當(dāng)前臨床治療的迫切需求，也具有廣闊的市場(chǎng)前景。

男性的雄激素主要由睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌，而睪酮作為最主要的雄激素，可以通過(guò)劑量依賴的方式促進(jìn)精子的產(chǎn)生，并改善肌肉質(zhì)量和增強(qiáng)體力，在維持男性健康方面發(fā)揮著重要作用。生物活性肽是由蛋白質(zhì)經(jīng)酶解消化制備，一般含有3~20個(gè)氨基酸殘基，具有不同的生物活性，其活性取決于它們的氨基酸組成及其排列順序；低聚肽是位于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的片段，由于其分子量較小可不經(jīng)消化直接被胃吸收，且比游離氨基酸消化更快更多，具有更高的生物效價(jià)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。張亭等研究發(fā)現(xiàn)牡蠣低聚肽配伍核桃低聚肽和山藥多糖通過(guò)增加雄性小鼠附性器官指數(shù)，提高NO、睪酮和cGMP含量并降低PDE5水平增強(qiáng)雄性小鼠的性功能[8]；劉瑜等通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明補(bǔ)充牡蠣低聚肽能夠通過(guò)改善下丘腦-垂體-性腺軸（HPG軸）有效防止環(huán)磷酰胺（CTX）引起的中老年男性雄激素部分缺乏綜合征（PADAM）的形成，顯著改善性功能和生殖功能[9]；精氨酸可以合成信號(hào)分子NO以及參與某些多胺類物質(zhì)的合成，而NO和多胺對(duì)于男性勃起功能和精子生成至關(guān)重要，補(bǔ)充精氨酸或富含精氨酸的蛋白質(zhì)可以提高男性的性功能；紫蘇籽肽可以有效改善環(huán)磷酰胺造成的大鼠生殖損傷狀況從而達(dá)到改善性功能的作用以及提高大鼠血清中IL-2、IFN-γ、IgG水平和免疫器官臟器指數(shù)可能與紫蘇籽肽富含精氨酸有關(guān)[10]；此外，據(jù)報(bào)道鹿角多肽、大豆多肽等具有提高血清睪酮含量和改善運(yùn)動(dòng)性低血睪酮的作用[11]。牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽是經(jīng)現(xiàn)代酶解技術(shù)制備的小分子低聚肽，本文以牡蠣肽為主，然后復(fù)配大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽，研究其對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞雄激素生成的研究，開(kāi)發(fā)具有改善男性性功能的食源低聚肽組合，為低聚肽改善男性性功能提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽，實(shí)驗(yàn)室自制；小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞（TM3細(xì)胞），上海冠導(dǎo)生物工程有限公司；DMEM/F12（1:1）培養(yǎng)基、胎牛血清，美國(guó)Gibco公司；胰蛋白酶、緩沖液PBS、青霉素鏈霉素溶液，碧云天生物技術(shù)研究所；NO測(cè)定試劑盒、SOD測(cè)定試劑盒、睪酮測(cè)定試劑盒、二氫睪酮測(cè)定試劑盒、cGMP測(cè)定試劑盒，北京百智生物科技公司；西地那非，美國(guó)Sigma公司；DMSO，西隴化工股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

BX53型倒置顯微鏡，日本奧林巴斯公司；細(xì)胞培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo公司；SpectraMax? iD5型多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)Molecular Devices公司；Accuri C6型流式細(xì)胞儀，美國(guó)BD生物科學(xué)儀器及軟件公司；ESCO AC2-6S1生物安全柜，新加坡藝思高科技有限公司；3K-15型冷凍離心機(jī)，德國(guó)Sigma公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 食源性肽的制備

牡蠣肉→水洗→勻漿→加入風(fēng)味蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解4 h→滅酶→離心取上清→陶瓷膜過(guò)濾→濃縮→活性炭脫色→過(guò)濾→滅菌→噴霧干燥→牡蠣肽

大豆分離蛋白→加水混勻→調(diào)節(jié)pH至8.5加入堿性蛋白酶酶解2 h→調(diào)pH至7.0加入中性蛋白酶酶解2 h→滅酶→離心取上清液→超濾膜超濾→濃縮→滅菌→噴霧干燥→大豆肽

鱈魚(yú)魚(yú)皮→洗凈→潤(rùn)漲→絞碎勻漿→調(diào)節(jié)溫度至55 ℃，pH至8.5，加入堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解3 h→滅酶→離心取上清液→陶瓷膜過(guò)濾→濃縮→滅菌→噴霧干燥→膠原肽

將紫蘇籽蛋白粉→勻漿→調(diào)pH至5.5~6.0→加熱至45~55℃→加入酸性蛋白酶、中性蛋白酶及木瓜蛋白酶酶解4 h→滅酶→離心取上清液→陶瓷膜過(guò)濾→減壓濃縮→硅藻土過(guò)濾→滅菌→噴霧干→紫蘇籽肽

1.3.2 氨基酸組成分析

依據(jù)GB/T 5009.124方法，采用L-8900日立全自動(dòng)氨基酸分析儀對(duì)牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽的氨基酸組成進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3 分子量分布測(cè)定

將樣品用流動(dòng)相溶解后并經(jīng)孔徑0.2 μm聚四氟乙烯過(guò)濾膜過(guò)濾，然后通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行凝膠過(guò)濾，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品的分子量分布。

1.3.4 TM3細(xì)胞培養(yǎng)

使用含有5% HS、2.5% FBS的DMEM/F12（1:1）培養(yǎng)基，在37 ℃，5% CO2及充分飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞的實(shí)際情況，2~3 d換一次液，待細(xì)胞融合至培養(yǎng)皿的80%左右時(shí)，棄掉培養(yǎng)瓶中舊培養(yǎng)基，用PBS緩沖液沖洗細(xì)胞2~3次，加入適量室溫復(fù)溫的0.05%胰酶消化液，按照1:3傳代培養(yǎng)。3次傳代后取處于對(duì)數(shù)期、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3.5 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞存活的影響

1.2.2 腸外營(yíng)養(yǎng) 采取全腸外營(yíng)養(yǎng)支持，靜脈營(yíng)養(yǎng)配伍方案與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組相同，總熱量約為110kj/（kg·d），給予靜脈支持。

將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化后，用DMEM/F12完全培養(yǎng)基（含10% FBS和1%青霉素鏈霉素溶液）調(diào)整細(xì)胞密度為105個(gè)/mL，接于96孔板，每孔100 μL細(xì)胞懸液。于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，細(xì)胞單層貼壁后更換DMEM/F12不完全培養(yǎng)基，加入相應(yīng)濃度復(fù)配的樣品溶液（牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽濃度均為400 μg/mL，分別以體積1:1、2:1、4:1、8:1復(fù)配，組別簡(jiǎn)稱為牡大（1:1）、牡大（2:1）、牡大（4:1）、牡大（8:1）、牡膠（1:1）、牡膠（2:1）、牡膠（4:1）、牡膠（8:1）、牡紫（1:1）、牡紫（2:1）、牡紫（4:1）、牡紫（8:1）繼續(xù)培養(yǎng)24 h，然后用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，計(jì)算公式為：

1.3.6 檢測(cè)指標(biāo)與方法

分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO（硝酸還原酶法）、睪酮（競(jìng)爭(zhēng)ELISA法）、二氫睪酮（競(jìng)爭(zhēng)ELISA法）、及胞內(nèi)SOD（WST-8法）、MDA（硫代巴比妥酸法）、cGMP（競(jìng)爭(zhēng)ELISA法）產(chǎn)生量，并用各孔的蛋白總量（BCA法）進(jìn)行校正，評(píng)價(jià)牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽的復(fù)配調(diào)節(jié)TM3細(xì)胞雄激素生成作用。

1.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Origin 9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用單因素方差分析，若t檢驗(yàn)，p<0.05，則證明數(shù)據(jù)差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽的氨基酸組成和分子量分布

牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽的氨基酸總量分別為57.74%、83.81%、85.91%、79.42%，四種低聚肽都含有較高的精氨酸，尤其紫蘇籽肽中的精氨酸含量最高為10.02%，精氨酸對(duì)于男性精子的生成具有非常重要的作用，精氨酸通過(guò)精氨酸酶途徑和NO合成途徑參與免疫調(diào)控以及精子生成[12,13]；有研究報(bào)道，肽的抗氧化活性與其氨基酸組成有關(guān)。許多氨基酸具有抗氧化活性[14,15]，如賴氨酸、亮氨酸、精氨酸、脯氨酸、丙氨酸、纈氨酸、色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸等；由表1可知，牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽均含有較高的亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸等，可改善細(xì)胞內(nèi)的氧化環(huán)境，睪丸間質(zhì)細(xì)胞的氧化環(huán)境對(duì)睪酮、二氫睪酮等雄性激素的生成至關(guān)重要；脯氨酸通過(guò)其代謝產(chǎn)物5-吡咯啉羧酸調(diào)控細(xì)胞增殖和DNA合成以及影響促進(jìn)精子生成的多胺類物質(zhì)的合成；牡蠣肽、大豆肽、膠原肽和紫蘇籽肽分子量分布如表2所示，4種肽的分子量<1000 u以下占比均分別為88.54%、92.53%、88.53%和91.38%，有研究顯示分子量小于1000 u的蛋白水解物更易被人體吸收從而發(fā)揮功能活性[16,17]。

表1 牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽的氨基酸組成Table 1 Amino acid composition of oyster peptide, soybean peptide, collagen peptide and perill peptide

表2 牡蠣肽、大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽的分子量分布Table 2 Molecular weight distribution of oyster peptide, soybean peptide, collagen peptide, and perilla peptide

2.2 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞存活率的影響

圖1 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)細(xì)胞存活的影響Fig.1 Effect of oyster peptide, soybean peptide, collagen peptide,and perillin on cell survival

2.3 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞睪酮和NO的影響

TM3細(xì)胞在促黃體生成激素的調(diào)節(jié)下合成和分泌睪酮，睪酮合成后，一方面可以釋放到淋巴液，并轉(zhuǎn)運(yùn)到曲細(xì)精管及附睪，促進(jìn)精子發(fā)生、成熟；另一方面，睪酮進(jìn)人血流，周流全身而發(fā)揮作用[18]。此外，血清中的睪酮可以調(diào)節(jié)基因，抑制PDE5酶合成，促進(jìn)NOs酶、精氨酸酶的產(chǎn)生；NO是一種非腎上腺非膽堿的神經(jīng)遞質(zhì)，是引起陰莖平滑肌松弛和血液進(jìn)入海綿體使之充盈勃起的關(guān)鍵物質(zhì)[19,20]；NO是由一氧化氮合酶（NOS）催化產(chǎn)生的，而NOS的底物為左旋精氨酸（L-Arg）；在陰莖組織中，它成為海綿體舒張的重要信使，陰莖勃起的誘導(dǎo)和維持的過(guò)程起著決定性作用[21]。

由圖2可知，陽(yáng)性對(duì)照西地那非和牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配均能提高TM3細(xì)胞睪酮的分泌量、增加TM3細(xì)胞培養(yǎng)上清的NO濃度，但其提高TM3細(xì)胞分泌睪酮和NO作用要低于西地那非；與空白對(duì)照組相比，牡蠣肽與紫蘇籽肽（2:1）復(fù)配對(duì)睪酮和NO促進(jìn)作用最好，分別提高了50.64%、125.61%；不同復(fù)配組升高睪酮和NO水平效果大小排序?yàn)椋耗迪犽?紫蘇籽肽>牡蠣肽+膠原肽>牡蠣肽+大豆肽。有研究報(bào)道，雄性小鼠服用瑪咖后血清NO濃度提高，陰莖勃起能力加強(qiáng)，勃起時(shí)間延長(zhǎng)，說(shuō)明NO能刺激陰莖勃起[19]，對(duì)改善性功能有重要作用；曹東等研究表明麗江瑪咖正丁醇/水提取物具有提高雄性小鼠性行為的作用，對(duì)雄性小鼠睪酮和雌二醇含量無(wú)明顯影響，說(shuō)明牡蠣肽與紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)睪酮雄性激素的調(diào)節(jié)要優(yōu)于麗江瑪咖提取物[22]。

圖2 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞睪酮(a)和NO(b)的影響Fig.2 Effect of oyster peptides, soybean peptides, collagen peptides, and perillin pairs on testosterone (a) and NO (b) in TM3 cells

2.4 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞二氫睪酮的影響

二氫睪酮是由睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌的一種類固醇激素，是人體內(nèi)主要的雄激素，與男性第二性征的發(fā)育有關(guān)。睪酮作為一種激素原，在芳香化酶的作用下可轉(zhuǎn)變?yōu)?7β-雌二醇，廣泛分布于全身血液中，能夠與生精細(xì)胞的雄激素受體結(jié)合，促進(jìn)精子的生成；主要作用是維持生精、正常的性欲以及刺激生殖器官的發(fā)育，是男性重要的雄性激素。男性未成年時(shí)期二氫睪酮分泌不足，就會(huì)導(dǎo)致男性第二性征發(fā)育不明顯，產(chǎn)生小陰莖，小陰囊等病理現(xiàn)象。

由圖3可知，陽(yáng)性對(duì)照西地那非和牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配均能提高TM3細(xì)胞二氫睪酮的分泌量，但復(fù)配組的促進(jìn)作用要低于西地那非；復(fù)配組升高二氫睪酮水平效果大小排序?yàn)椋耗迪犽?紫蘇籽肽>牡蠣肽+膠原肽>牡蠣肽+大豆肽，該結(jié)果與促進(jìn)TM3細(xì)胞分泌睪酮趨勢(shì)相一致；表明牡蠣肽和紫蘇籽肽復(fù)配可顯著提高血清中睪酮和二氫睪酮雄激素水平，這可能與酪氨酸、絲氨酸、谷氨酸和精氨酸以及支鏈氨基酸的促睪酮、二氫睪酮分泌活性有關(guān)[10]。

圖3 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞二氫睪酮的影響Fig.3 Effect of oyster peptides, soybean peptides, collagen peptides, and perillin pairs on dihydrotestosterone in TM3 cells

2.5 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞抗氧化活性的影響

精子是在睪丸細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的，生精過(guò)程中睪丸內(nèi)的生精細(xì)胞所處的氧化環(huán)境與精子的發(fā)育和分化密切相關(guān)[3]。睪丸細(xì)胞內(nèi)良好的氧化環(huán)境有利于精子及雄性激素的生成。SOD酶活力和MDA含量是評(píng)價(jià)機(jī)體抗氧化性常用的兩個(gè)指標(biāo)，SOD是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化物酶，能消除生物體在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，如O2-?、H2O2、?OH，減少細(xì)胞膜受到的損傷。睪丸細(xì)胞內(nèi)的SOD酶能夠維持細(xì)胞正常的氧化環(huán)境并調(diào)控生精細(xì)胞的精子生成。

由表3可知，陽(yáng)性對(duì)照西地那非和牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配均能提高TM3細(xì)胞的SOD酶活力，相比于對(duì)照組，西地那非組和牡蠣肽與大豆肽（2:1）、膠原肽（1:1）、紫蘇籽肽（2:1）復(fù)配分別提升了165.87%、34.56%、17.83%、87.17%，增強(qiáng)TM3細(xì)胞SOD酶活效果的順序?yàn)椋耗迪犽?紫蘇籽肽>牡蠣肽+大豆肽>牡蠣肽+膠原肽；此外，與對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照西地那非和牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配均能顯著降低TM3細(xì)胞內(nèi)的MDA濃度，其中牡蠣肽與紫蘇籽肽（2:1）降低效果最好，相比對(duì)照組降低了61.60%，與西地那非的降低效果61.99%相近，說(shuō)明牡蠣肽與紫蘇籽肽復(fù)配更有利于穩(wěn)定TM3細(xì)胞內(nèi)的氧化環(huán)境；綜上牡蠣肽和紫蘇籽肽復(fù)配能顯著提高TM3細(xì)胞的SOD活力，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化能力，可能與精氨酸對(duì)SOD活性的激活作用有關(guān)；牡蠣肽和紫蘇籽肽復(fù)配能減輕脂質(zhì)過(guò)氧化程度，與牡蠣肽和紫蘇籽肽含有的半胱氨酸、精氨酸、亮氨酸等參與自由基消除反應(yīng)和谷氨酸、精氨酸等通過(guò)側(cè)鏈的螯合作用抑制自由基氧化反應(yīng)可能有關(guān)；機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定的氧化環(huán)境可減輕細(xì)胞損傷及線粒體功能障礙，減少損傷精子膜和DNA，有利于維持精子的穩(wěn)定。

表3 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞中SOD酶活、MDA含量的影響Table 3 Effects of oyster peptides, soybean peptides, collagen peptides, and perilla peptides on SOD enzyme activity and MDA content in TM3 cells

2.6 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞cGMP的影響

陰莖勃起是指由于受到性刺激陰莖海綿體快速充血，陰莖迅速充血變硬并延伸的現(xiàn)象。副交感神經(jīng)中樞通過(guò)釋放可溶性神經(jīng)遞質(zhì)NO來(lái)激活可溶性腺苷酸環(huán)化酶，細(xì)胞內(nèi)的GTP轉(zhuǎn)化成cGMP，cGMP作為細(xì)胞內(nèi)的第二信使，可以使細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度降低，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+減少，海綿體平滑肌舒張，海綿體內(nèi)壓增加，同時(shí)，白膜下小靜脈被動(dòng)受壓閉塞，產(chǎn)生勃起[21]。

由圖4可知，陽(yáng)性對(duì)照西地那非和牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配均能促進(jìn)TM3細(xì)胞內(nèi)的cGMP含量，但陽(yáng)性對(duì)照西地那非作用最強(qiáng)；增強(qiáng)TM3細(xì)胞cGMP含量的順序?yàn)椋耗迪犽?紫蘇籽肽>牡蠣肽+大豆肽>牡蠣肽+膠原肽；此外，牡蠣肽與紫蘇籽肽（2:1）復(fù)配提高TM3細(xì)胞分泌cGMP效果最好，與對(duì)照組相比，提高了近88.44%，但促進(jìn)效果仍低于陽(yáng)性對(duì)照西地那非。

圖4 牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配對(duì)TM3細(xì)胞cGMP的影響Fig.4 Effect of oyster peptide, soybean peptide, collagen peptide,and perillin on cGMP of TM3 cells

3 結(jié)論

本文對(duì)牡蠣肽、大豆肽、膠原肽和紫蘇籽肽的氨基酸組成進(jìn)行了分析，結(jié)果表明四種低聚肽都富含精氨酸、尤其紫蘇籽肽的精氨酸含量最高為10.02%；然后將牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽（濃度均為400 μg/mL，分別以體積1:1、2:1、4:1、8:1）復(fù)配作用于小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞（TM3），并以西地那非作為陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)西地那非和牡蠣肽與大豆肽、膠原肽、紫蘇籽肽復(fù)配均能刺激TM3細(xì)胞分泌睪酮和二氫睪酮等雄性激素、提高了TM3細(xì)胞內(nèi)的NO和cGMP含量，增強(qiáng)了TM3細(xì)胞內(nèi)的SOD酶活，顯著降低細(xì)胞內(nèi)的MDA濃度，維持了細(xì)胞內(nèi)正常的氧化環(huán)境，有利于雄性激素和精子的生成；牡蠣肽和紫蘇籽肽復(fù)配的促進(jìn)效果最好，可能與牡蠣肽、紫蘇籽肽富含精氨酸有關(guān)，具有改善男性性功能的作用，為牡蠣肽和紫蘇籽肽應(yīng)用于保健功能食品奠定了理論基礎(chǔ)。