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夏枯草粗多糖對鎘誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用

2021-06-30 15:41:22池慧欽黎姿茵宋佳賴月妃王延楊佳妮萬宇何志妮衛(wèi)秦芝吳煒亮楊杏芬
現(xiàn)代食品科技 2021年6期
關(guān)鍵詞:夏枯草多糖抗氧化

池慧欽,黎姿茵,宋佳,賴月妃,王延,楊佳妮,萬宇,何志妮,衛(wèi)秦芝,吳煒亮,楊杏芬

(1.南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,食物安全與健康研究中心,國家藥監(jiān)局化妝品安全評價重點實驗室,廣東省熱帶病研究重點實驗室,廣東廣州 510515)(2.暨南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)系,廣東廣州 510632)

有毒重金屬鎘(Cadmium,Cd)是一種已知的環(huán)境污染物,能通過污染空氣、食品和水等,帶來許多健康風(fēng)險。流行病學(xué)研究表明,鎘能對許多器官產(chǎn)生毒性作用,引起腎臟損傷[1]、骨質(zhì)疏松[2,3]、頸動脈斑塊[4,5]以及癌癥[6]。進(jìn)入機(jī)體的鎘主要在腎臟蓄積,半衰期約為10~30年[6,7],腎小管損傷是鎘暴露敏感的毒性終點[8]。研究表明,氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是鎘致腎臟及其它器官損傷的重要機(jī)制[9,10]。

夏枯草(Prunella vulgarisL.,PV)屬于唇形科(Labiate)夏枯草種屬植物,是一種重要的藥食同源草本植物,廣泛分布在韓國、日本、中國、歐洲等各個地區(qū)。夏枯草具有清火明目、散結(jié)消腫等功效[11]。作為一種傳統(tǒng)中藥,夏枯草已經(jīng)被用于治療咽喉痛、甲狀腺腫脹、乳腺疾病等[12]。對夏枯草的活性成分和藥理作用的研究表明,夏枯草具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎抗菌和免疫調(diào)節(jié)等作用[13,14]。

近年來,越來越多的人對夏枯草多糖的結(jié)構(gòu)及功效進(jìn)行研究。研究表明,夏枯草粗多糖不僅具有抗炎、抗氧化等作用,還具有金屬螯合作用[15]。與傳統(tǒng)的金屬螯合劑相比,天然多糖因其特有的生理活性及無毒副作用而更具優(yōu)勢。結(jié)構(gòu)方面,尹震花[16]等對夏枯草多糖的提取、結(jié)構(gòu)及生理活性進(jìn)行綜述,發(fā)現(xiàn)夏枯草多糖組分主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成,其中木糖和阿拉伯糖含量較高。然而,目前對夏枯草多糖的結(jié)構(gòu)研究較少,主要還集中在初級結(jié)構(gòu)方面。

到目前為止,對于鎘引起的腎毒性還未有較好的治療方法,也未有文獻(xiàn)報道將夏枯草用于探討對鎘誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞的毒性影響。因此,本研究采用腎小管上皮細(xì)胞RPTEC/TERT1來評估夏枯草粗多糖抗鎘誘導(dǎo)腎毒性的可能潛力,探討夏枯草粗多糖對染鎘細(xì)胞炎癥反應(yīng)是否具有抑制作用及可能介導(dǎo)的通路,為夏枯草的臨床應(yīng)用提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

夏枯草購買于廣東省藥材公司中藥飲片廠(產(chǎn)品編號:X2419412)。人腎近端小管上皮細(xì)胞系RPTEC/TERT1細(xì)胞購自美國菌種保藏中心(ATCC)細(xì)胞庫。

試劑:DMEM/F12培養(yǎng)基、胎牛血清FBS、青/鏈霉素、0.05% EDTA-胰酶,美國GIBCO;二甲亞砜DMSO,美國sigma;三碘-L-甲狀腺素、重組人EGF、抗壞血酸、人轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、前列腺素E1、氫化可的松、亞硒酸鈉、碳酸氫鈉,美國sigma;氯仿、無水乙醇、正丁醇,廣州化學(xué)試劑廠;Cell Counting Kit-8日本DOJINDO;BCA蛋白定量試劑盒,中國碧云天;抗氧化酶SOD、CAT試劑盒購于南京建成生物工程研究所;IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6的ELISA試劑盒,中國聯(lián)科生物。GAPDH、iκB及p65等抗體購于Cell Signaling Technology公司。

儀器:熒光倒置顯微鏡,德國Zeiss;全波長酶標(biāo)儀,美國BioTek;超低溫冰箱,美國Thermo;電子天平,德國,Sartorius;恒溫水浴鍋,中國上海一恒科技有限公司;全自動化學(xué)發(fā)光成像分析儀,中國上海天能科技有限公司;EVOM2跨膜電阻儀,美國世界精密儀器公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 夏枯草粗多糖提取及含糖量測定

夏枯草多糖采用水提醇沉法及Sevage法去除蛋白進(jìn)行提取,具體步驟如下所述。夏枯草干穗用組織搗碎器搗成粉末。將夏枯草粉末150 g加入蒸餾水,加熱煮沸2 h。將夏枯草粉末和蒸餾水以1:30的料液比加熱煮沸提取2 h。4000×g離心15 min,收集上清液。濾渣再加入30倍體積的蒸餾水,再次煮沸提取2 h,離心,收集上清液,濾渣棄去。合并兩次的上清液,于60 ℃減壓濃縮至100 mL得到夏枯草多糖水提液。濃縮后的夏枯草水提液采用Sevage法去除蛋白雜質(zhì)。水提液與去蛋白有機(jī)溶劑(氯仿及正丁醇按4:1比例混合)按1:1體積比混合,室溫下?lián)u床震蕩2 h,離心取上清,重復(fù)5次后,水相和有機(jī)相間沒有明顯蛋白層,再次離心收集上清,得去蛋白糖液。去除蛋白質(zhì)后的夏枯草溶液用蒸餾水室溫下透析48 h,透析完成后,將透析液進(jìn)行真空濃縮。往濃縮后的夏枯草溶液中加入3倍體積的無水乙醇混合均勻后置于4 ℃冰箱中靜置24 h。60 ℃鼓風(fēng)干燥去除多余的乙醇和有機(jī)物,然后經(jīng)真空冷凍干燥得到夏枯草粗多糖干品。采用苯酚-硫酸法測定夏枯草粗多糖的糖含量[17],繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為Y=8.171X-0.009,如圖1所示。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of glucose

1.2.2 夏枯草粗多糖樣品中蛋白質(zhì)、糖醛酸及總多酚含量測定

采用BCA(bicinchoninic acid,BCA)法測定夏枯草粗多糖樣品中蛋白質(zhì)含量[18],采用間羥基聯(lián)苯法測定糖醛酸含量[19],采用福林酚法測定總多酚含量[20]。得到三個實驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線和R2分別為:Y=13.396x-0.9101,R2=0.9963;Y=0.3202x-0.0158,R2=0.9980;Y=0.5104x-0.0344,R2=0.9973。

1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)

RPTEC/TERT1細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM/F12培養(yǎng)基中(含5 pmol/L三碘-L-甲狀腺素、10 ng/mL重組人EGF、3.5 μg/mL抗壞血酸、5.0 μg/mL人轉(zhuǎn)鐵蛋白、5.0 μg/mL胰島素、25 ng/mL前列腺素E1、25 ng/mL氫化可的松、8.65 ng/mL亞硒酸鈉、1.2 mg/mL碳酸氫鈉、0.1 mg/mL G418、100 U/mL青鏈霉素),置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。70%~80%融合時用0.25%EDTA-胰酶消化,傳代至6孔板,每孔細(xì)胞含量為106個。

1.2.4 CCK-8法測細(xì)胞存活率

在預(yù)實驗的基礎(chǔ)上,氯化鎘設(shè)置劑量組0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L。夏枯草粗多糖提取物設(shè)計劑量組12.5、25、50、100、200、400、600、800、1000 μg/mL。RPTEC/TERT1細(xì)胞以密度4×105個/mL接種于96孔板培養(yǎng)至細(xì)胞分化,加入不同濃度的氯化鎘或夏枯草孵育24 h。按照CCK-8試劑盒說明書測定細(xì)胞存活率。存活率/%=(處理組OD450-空白組OD450)/(對照組OD450-空白組OD450)

×100%。

1.2.5 跨膜電阻值(TEER)測定

將RPTEC/TERT1細(xì)胞以5×105/mL的密度接種于24孔Transwell小室(型號3407,美國Corning公司)中,上室加入200 μL細(xì)胞懸液,下室中加入500 μL的培養(yǎng)基[21]。接種后,每2 d換液,1周后改為每天換液。采用EVOM2細(xì)胞電阻儀測量TEER。

1.2.6 抗氧化酶SOD、CAT測定

收集處理后的RPTEC/TERTl細(xì)胞裂解液,根據(jù)BCA試劑盒說明書測定蛋白濃度。參照試劑盒說明書采用黃嘌呤氧化酶還原法(450 nm)檢測SOD活性,鉬酸銨終止法(520 nm)檢測CAT活性。

1.2.7 炎癥指標(biāo)測定

收集夏枯草及鎘處理后的細(xì)胞上清液,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)檢測細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6的水平。

1.2.8 Western blot檢測各蛋白的表達(dá)

提取處理后的細(xì)胞蛋白根據(jù)BCA試劑盒說明書測定蛋白濃度。進(jìn)行SDS-PAGE電泳,各組蛋白樣品調(diào)整至等濃度(30 μL)上樣,電泳條件為110 V恒壓電泳。電泳結(jié)束將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,浸潤于5%脫脂牛奶中,室溫封閉2 h。加入一抗(GAPDH稀釋比1:3000,p-iκB及p-p65稀釋比1:1000)4 ℃孵育過夜后,TBST洗膜。二抗(羊抗鼠IgG抗體,體積稀釋比1:1000)室溫孵育2 h,TBST洗膜。于全自動化學(xué)發(fā)光成像分析儀中進(jìn)行顯影。使用 Image J 軟件完成條帶的灰度分析各蛋白的相對表達(dá)量。

1.2.9 統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計分析,圖表繪制采用GraphPad Prism 7軟件,用四參數(shù)回歸法計算氯化鎘暴露對RPTEC/TERT1細(xì)胞的IC50值,用t檢驗或方差分析進(jìn)行差異性分析,組間差異的兩兩比較采用Dunnett-t法,以p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 夏枯草粗多糖提取結(jié)果

熱水浸提法是目前夏枯草多糖提取的主要方法[22]。本研究經(jīng)熱水浸提、Sevage法去蛋白及乙醇沉淀后得到夏枯草粗多糖提取物,經(jīng)計算提取率為3.33%。本研究采用苯酚硫酸法測定多糖含量,根據(jù)回歸方程Y=8.171X-0.009,計算得夏枯草粗多糖樣品中的含糖率為65.00%。因此,本研究的夏枯草多糖提取率為2.14%。孔思遠(yuǎn)[23]等對夏枯草多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,以多糖含量和浸膏得率為指標(biāo),得到最優(yōu)水提工藝下(第1次加水14倍,第2、3次加水12倍,提取3次,每次提取時間1.5 h)夏枯草多糖提取率為1.87%,略低于本研究結(jié)果。熊雙麗等[24]采用熱水浸提法提取夏枯草多糖,探索出最優(yōu)工藝條件為提取溫度90 ℃,時間4 h,料液比1:35,在此條件下提取率達(dá)到5.39%,高于本研究結(jié)果。由此可見,夏枯草的多糖提取率可因提取工藝不同而呈現(xiàn)較大的差異。

本研究對夏枯草粗多糖樣品中的蛋白質(zhì)、糖醛酸、總多酚含量進(jìn)行測定,計算得該樣品中的蛋白質(zhì)含量為24.30%,糖醛酸含量為3.59%,總多酚含量為2.21%。張霞[25]等利用分級醇沉法得到夏枯草多糖的六個多糖組分,并測定了各組分的糖含量、糖醛酸含量及蛋白質(zhì)含量。結(jié)果顯示,六個組分的含糖量在21.02%~65.04%之間,糖醛酸含量在13.02%~30.90%之間,蛋白質(zhì)含量在15.40%~22.25%之間。該研究結(jié)果與本研究結(jié)果較為相似,但本研究結(jié)果的糖醛酸含量明顯低于張霞等的研究結(jié)果。在另一篇文獻(xiàn)中[26],該課題組測定了上述六種組分中其中四種組分的體外抗氧化性,結(jié)果表明,上述組分對二苯代苦味肼基自由基(DPPH?)的清除效率全部在87.71%以上。本研究中的夏枯草粗多糖樣品中含糖量較高,而多酚含量僅占2.21%,表明提取的粗多糖樣品可用于體外抗氧化性及抗炎活性的研究。

2.2 RPTEC/TERT1細(xì)胞具有良好的腎小管上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能

多項研究表明[27-29],RPTEC/TERT1 細(xì)胞保留了人體內(nèi)腎小管上皮細(xì)胞的形態(tài)和功能特點,具有豐富的轉(zhuǎn)運蛋白和代謝酶,是藥理學(xué)和生理學(xué)體外研究的有力工具。如圖2所示,RPTEC/TERT1細(xì)胞能夠形成特有的圓頂結(jié)構(gòu)(圖2a),分化良好。細(xì)胞于第8 d左右達(dá)到150~200 Ω*cm2之間,并穩(wěn)定在該范圍,說明該細(xì)胞的屏障功能及緊密性良好。以上結(jié)果表明,RPTEC/TERT1細(xì)胞具有良好的腎近端小管上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能,可用于后續(xù)實驗。

圖2 RPTEC/TERT1細(xì)胞的形態(tài)及功能指標(biāo)Fig.2 Characterization of morphology and function markers of RPTEC/TERT1

2.3 鎘暴露及夏枯草粗多糖對RPTEC/TERT1細(xì)胞活力的影響

將0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L的氯化鎘處理RPTEC/TERT1細(xì)胞24 h后,RPTEC/TERT1細(xì)胞活力如圖2所示。結(jié)果顯示,自10 μmol/L劑量組開始,氯化鎘能夠顯著抑制RPTEC/TERT1細(xì)胞活性,且呈劑量依賴性。三次重復(fù)實驗得到其IC50值為15.2 μmol/L。Tomasz等人對鎘的促炎作用進(jìn)行綜述,結(jié)果顯示微摩爾濃度范圍(1~10 μmol/L)的鎘即能表現(xiàn)出促炎特性[30]。因此,結(jié)合本研究的結(jié)果,后續(xù)實驗選擇8 μmol/L劑量的氯化鎘(約二分之一的IC50值)作為鎘誘導(dǎo)RPTEC/TERT1炎癥模型組。

將12.5、25、50、100、200、400、600、800、1000 μg/mL的夏枯草粗多糖處理RPTEC/TERT1細(xì)胞24 h后,RPTEC/TERT1細(xì)胞活力如圖3所示。結(jié)果顯示,夏枯草粗多糖劑量為400 μg/mL時,RPTEC/TERT1細(xì)胞的活力出現(xiàn)下降的趨勢(p<0.01)。因此,選擇50、100、200 μg/mL的夏枯草粗多糖進(jìn)行后續(xù)研究。

圖3 不同濃度的氯化鎘及夏枯草粗多糖對RPTEC/TERT1細(xì)胞活力的影響Fig.3 Effects of the different concentrations of cadmiumchloride and PVCP on RPTEC/TERT1 cell viability (±s, n=3)

2.4 夏枯草粗多糖對鎘暴露致RPTEC/TERT1細(xì)胞形態(tài)的影響

將50、100、200 μg/mL夏枯草粗多糖作用于細(xì)胞2 h后使用8 μmol/L氯化鎘繼續(xù)處理細(xì)胞24 h,結(jié)果如圖4所示,氯化鎘處理組的細(xì)胞明顯皺縮、變圓。通過100、200 μg/mL夏枯草粗多糖預(yù)處理的細(xì)胞形態(tài)與對照組接近。由此可見,夏枯草粗多糖能有效減輕鎘對RPTEC/TERT1細(xì)胞的損傷作用。

圖4 夏枯草粗多糖對鎘暴露致RPTEC/TERT1細(xì)胞形態(tài)的影響Fig.4 Effects of PVCP on morphology of RPTEC/TERT1 cells induced by cadmium (×100, n=3)

2.5 夏枯草粗多糖拮抗鎘對RPTEC/TERT1細(xì)胞CAT及SOD酶活性的抑制作用

多項研究表明,鎘能促進(jìn)自由基產(chǎn)生,引起腎臟氧化應(yīng)激,該機(jī)制是鎘介導(dǎo)毒性的重要機(jī)制之一[10,31]。本研究結(jié)果顯示(圖5),模型組(8 μmol/L)細(xì)胞內(nèi)SOD及CAT酶活性顯著低于對照組(p<0.01),表明鎘引起RPTEC/TERT1細(xì)胞內(nèi)的氧化損傷。Abdullah等人[32]的研究發(fā)現(xiàn)鎘作用的大鼠體內(nèi)SOD、CAT活力顯著下降,總抗氧化水平降低導(dǎo)致全身氧化應(yīng)激,且血漿中IL-6、TNF-α濃度顯著升高。該作者還指出,鎘誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激與其促炎活性密切相關(guān)。

圖5 夏枯草粗多糖對鎘暴露致RPTEC/TERT1細(xì)胞CAT及SOD的影響Fig.5 Effects of PVCP on activities of CAT and SOD of RPTEC/TERT1 cells induced by cadmium (±s, n=3)

研究顯示,夏枯草莖葉和果穗水提物均表現(xiàn)出一定的抗氧化及抗炎作用[33]。本研究細(xì)胞經(jīng)50 μg/mL及以上濃度的夏枯草粗多糖處理后,細(xì)胞內(nèi)SOD及CAT酶活性較鎘處理組升高(p<0.01),說明夏枯草多糖可以提高RPTEC/TERT1細(xì)胞中SOD及CAT的酶活性,提高細(xì)胞的抗氧化能力。熊雙麗[24]等對夏枯草多糖的自由基清除能力及抗氧化活性進(jìn)行研究,結(jié)果表明,夏枯草多糖對羥自由基(?OH)和二苯代苦味肼基自由基(DPPH?)具有直接清除作用。其中,當(dāng)夏枯草多糖濃度為0.8 mg/mL時,羥基自由基清除率高達(dá)96.25%。張淼[34]的研究表明,夏枯草多糖含量與?OH、O2-?、DPPH?及金屬螯合能力成正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)在0.55~0.71之間,說明夏枯草多糖在夏枯草抗氧化功能中發(fā)揮較大作用。近年來國內(nèi)外研究表明,植物多糖的清除自由基機(jī)制類似于SOD酶的作用[35]。結(jié)合本研究結(jié)果,夏枯草多糖可能通過提高RPTEC/ TERT1細(xì)胞內(nèi)的SOD及CAT的酶活性,從而抑制自由基的產(chǎn)生,達(dá)到抗氧化的目的;或直接發(fā)揮類抗氧化物酶的作用而降低細(xì)胞內(nèi)的自由基,從而發(fā)揮抗氧化的作用。

2.6 夏枯草粗多糖拮抗鎘對RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥因子分泌的促進(jìn)作用

白細(xì)胞介素(interleukin,IL)是免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)中的重要介質(zhì)。TNF-α主要來源于巨噬細(xì)胞,因細(xì)菌感染或其它免疫源反應(yīng)而產(chǎn)生。研究表明,TNF-α、IL-1β、IL-6可作為與鎘相關(guān)的促炎癥細(xì)胞因子[36]。近期多項研究表明,IL-18作為一種促炎癥細(xì)胞因子,可作為急性腎損傷,尤其是腎小管損傷的早期生物標(biāo)志物[37,38]。本研究結(jié)果如圖6所示,鎘處理組(8 μmol/L)引起RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥因子IL-6、IL-1β、IL-18及TNF-α表達(dá)水平分別升高了9.53倍、8.80倍、10.86倍和1.17倍(p<0.01),說明鎘可引起RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥反應(yīng)。

圖6 夏枯草粗多糖對鎘暴露致RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥因子的影響Fig.6 Effects of PVCP on the expression of inflammatory factors of RPTEC/TERT1 cells induced by cadmium (±s,n=3)

與模型組相比,夏枯草粗多糖預(yù)處理組(50、100、200 μg/mL)RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥因子IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6分泌量明顯降低(p<0.01),說明夏枯草粗多糖預(yù)處理具有拮抗鎘誘導(dǎo)的RPTEC/ TERT1細(xì)胞炎癥的作用。Seung等人[39]在腎損傷大鼠模型中觀察到夏枯草水提物能顯著抑制炎癥反應(yīng)且對腎纖維化具有重要的保護(hù)作用。李超的研究[15]通過熱水浸提法并經(jīng)離子交換柱層析分離得到一種中性多糖PV-P1、兩種酸性多糖,PV-P2及PV-P3。構(gòu)效研究表明三種成分均具有抗氧化和免疫活性。其中,PV-P2及PV-P3的抗氧化能力最強(qiáng),能清除DPPH?、HOO自由基等,而PV-P1的免疫活性最強(qiáng),能夠抑制小鼠巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-6等炎癥因子,發(fā)揮抗炎作用。然而,還未有文獻(xiàn)報道夏枯草多糖在體外拮抗鎘誘導(dǎo)的腎臟細(xì)胞炎癥反應(yīng)。本文結(jié)果已經(jīng)提示夏枯草粗多糖對鎘誘導(dǎo)的RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥反應(yīng)具有保護(hù)作用,后續(xù)需進(jìn)一步探討夏枯草多糖中何種成分發(fā)揮效應(yīng)。

2.7 夏枯草粗多糖拮抗鎘對NF-κB信號通路關(guān)鍵蛋白的激活作用

圖7 夏枯草粗多糖對RPTEC/TERT1細(xì)胞NF-κB信號通路中相關(guān)蛋白的影響Fig.7 Effects of PVCP on the related proteins of NF-κB signaling pathway of RPTEC/TERT1 cells induced by cadmium (±s, n=3)

研究表明,夏枯草的變種紫丁香在體外即具有抗炎活性,能通過NF-κB信號通路抑制脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[12]。NF-κB是一種作用廣泛的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,在機(jī)體免疫、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期調(diào)控等方面發(fā)揮重要的作用[40]。NF-κB的信號傳導(dǎo)始于誘導(dǎo)物的活化作用,隨后NF-κB與其抑制蛋白IκB解離,p65-p50異二聚體轉(zhuǎn)移入核,與DNA上的特定位點結(jié)合,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞因子、趨化因子、轉(zhuǎn)錄因子以及氧化應(yīng)激相關(guān)酶等基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[41]。本研究結(jié)果顯示,鎘處理組(8 μmol/L)RPTEC/TERT1細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號通路關(guān)鍵蛋白p-iκB及p-p65的表達(dá)均顯著高于對照組(p<0.05)。但經(jīng)100及200 μg/mL夏枯草粗多糖預(yù)處理后,p-iκB及p-p65的蛋白表達(dá)均顯著低于鎘染毒組(p<0.05),200 μg/mL作用最為明顯。結(jié)果表明,鎘暴露能顯著激活RPTEC/TERT1細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)iκB及p65的表達(dá),而夏枯草粗多糖則可抑制該效果。研究顯示,抗氧化劑及抗氧化物酶的過表達(dá)可以抑制NF-κB信號通路的激活[42]。結(jié)合本研究結(jié)果,夏枯草粗多糖可能通過下調(diào)SOD、CAT酶活力抑制NF-κB信號通路激活,繼而削弱鎘誘導(dǎo)的RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥反應(yīng),相關(guān)內(nèi)容有待進(jìn)一步驗證。

3 結(jié)論

本研究以鎘染毒RPTEC/TERT1細(xì)胞作為研究對象,探討夏枯草粗多糖對鎘染毒的RPTEC/TERT1細(xì)胞的影響,結(jié)果顯示夏枯草粗多糖對鎘染毒RPTEC/TERT1細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用,可拮抗鎘抑制RPTEC/TERT1細(xì)胞CAT及SOD酶活性以發(fā)揮抗氧化功能,且能夠有效抑制RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α及IL-18的釋放。夏枯草粗多糖能改善鎘誘導(dǎo)的 RPTEC/TERT1細(xì)胞炎癥反應(yīng),該效應(yīng)可能與其抗氧化能力及通過NF-κB信號通路抑制細(xì)胞因子的分泌有關(guān)。作為一種藥食同源的中草藥,夏枯草具有深遠(yuǎn)的研究價值。由于夏枯草多糖具有的抗炎抗氧活性以及金屬螯合性,其可能成為治療鎘致腎毒性的潛在藥物。

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