陳旭青 馬華安 周龍云 嚴道南 劉書芬 吳繼勇

中圖分類號 R765.2;R285.5 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）10-1187-09

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.10.06

摘 要 目的：初步研究黃芪甲苷對變應性鼻炎（AR）模型小鼠改善作用的可能機制。方法：將C57/BL6小鼠隨機分為空白組、模型組和黃芪甲苷組，每組10只。除空白組外，其余大鼠均于第0、7、14、21～27天以卵清蛋白為致敏源進行攻擊以復制AR模型。于造模第15～27天，黃芪甲苷組小鼠按0.02 mL/g腹腔注射黃芪甲苷40 mg/kg（第21～27天均于攻擊致敏前1 h給藥），空白組和模型組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水，每天1次。末次攻擊致敏24 h后，觀察各組小鼠鼻黏膜組織中炎癥細胞的浸潤情況，檢測其鼻腔灌洗液中白細胞介素4（IL-4）、IL-5、干擾素γ（IFN-γ）含量，鼻黏膜和脾臟組織中活性氧簇（ROS）水平和磷酸化Janus激酶2（p-JAK2）、磷酸化信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活蛋白6（p-STAT6）陽性細胞計數(shù)，以及脾臟組織中JAK2、STAT6蛋白的磷酸化水平（即p-JAK2/JAK2比值、p-STAT6/STAT6比值）。結(jié)果：與空白組比較，模型組小鼠鼻黏膜組織中炎癥細胞（嗜酸粒細胞和肥大細胞）計數(shù)，鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5含量，鼻黏膜和脾臟組織中ROS水平和p-JAK2、p-STAT6陽性細胞計數(shù)，脾臟組織中p-JAK2/JAK2比值、p-STAT6/STAT6比值均顯著升高（P<0.05），鼻腔灌洗液中INF-γ含量顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，黃芪甲苷組小鼠鼻黏膜組織中炎癥細胞計數(shù)，鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5含量，鼻黏膜和脾臟組織中ROS水平和p-JAK2、p-STAT6陽性細胞數(shù)量，脾臟組織中p-JAK2/JAK2比值、p-STAT6/STAT6比值均顯著降低（P<0.05），鼻腔灌洗液中INF-γ含量顯著增加（P<0.05）。結(jié)論：黃芪甲苷能夠有效改善AR模型小鼠變應性炎癥反應，其機制可能與下調(diào)JAK2/STAT6信號通路及ROS水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞 變應性鼻炎;黃芪甲苷;活性氧簇;Janus激酶2/信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活蛋白6信號通路;小鼠

Preliminary Study on the Improvement Effects of Astragaloside Ⅳ on Allergic Rhinitis Model Mice

CHEN Xuqing1，MA Huaan1，ZHOU Longyun2，YAN Daonan1，LIU Shufen3，WU Jiyong1（1. Dept. of Otorhinolaryngology， the Affiliated Hospital of Nanjing University of TCM， Nanjing 210029， China; 2. Dept. of Rehabilitation， the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing 210029， China; 3. Faculty of Basic Medicine， Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM， Shanghai 210032， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To preliminarily study the potential mechanism of astragaloside Ⅳ on allergic rhinitis （AR） model mice. METHODS： C57/BL6 mice were randomly divided into blank group， model group and astragaloside Ⅳ group， with 10 mice in each group. Except for blank group， AR model was prepared by sensitization and challenge with ovalbumin on day 0， 7， 14 and 21-27.? Astragaloside Ⅳ group was given astragaloside Ⅳ 40 mg/kg intraperitoneally at the dose of 0.02 mL/g on the 15th to 27th day of modeling （given the drug 1 h before challenge sensitization on the 21st to 27th day）. Blank group and model group were given constant volume of normal saline intraperitoneally， once a day. Twenty-four hours after sensitization from the last challenge， the infiltration of inflammatory cells in the nasal mucosa of each group was observed， and the contents of interleukin 4 （IL-4）， IL-5 and interferon gamma （IFN-γ） in the nasal lavage fluid were measured. The levels of reactive oxygen species （ROS）， and the count of phosphorylated Janus kinase 2 （p-JAK2） and phosphorylation signal transduction and activation of transcription protein 6 （p-STAT6） positive cells in the nasal mucosa and spleen as well as the phosphorylation levels of JAK2 and STAT6 proteins in spleen tissue （i.e. p-JAK2/JAK2 ratio， p-STAT6/STAT6 ratio） were also determined. RESULTS： Compared with blank group， the number of inflammatory cells in the nasal mucosa （eosinophils and mast cells） in the model group， the contents of IL-4 and IL-5 in the nasal lavage fluid， and the levels of ROS in the nasal mucosa and spleen tissues in the model group， the count of p-JAK2 and p-STAT6 positive cells increased significantly， the p-JAK2/JAK2 ratio， p-STAT6/STAT6 ratio in the spleen tissue were significantly increased （P<0.05）， and the content of INF-γ in the nasal lavage fluid was significantly decreased （P<0.05）. Compared with model group， the count of inflammatory cells infiltrated in the nasal mucosa， the contents of IL-4 and IL-5 in the nasal cavity lavage fluid， the level of ROS and the number of p-JAK2 and p-STAT6 positive cellsin the nasal mucosa and spleen tissue as well as the p-JAK2/JAK2 ratio and p-STAT6/STAT6 ratio in spleen tissue were decreased significantly （P<0.05）， and the content of INF-γ in nasal lavage fluid was significantly increased （P<0.05）.? CONCLUSIONS： Astragaloside Ⅳ can effectively improve the inflammatory response in AR model mice， the mechanism of which may be related to down-regulation of JAK2/STAT6 signaling pathway and ROS level.

KEYWORDS? ?Allergic rhinitis; Astragaloside Ⅳ; ROS;JAK2/STAT6 signaling pathway; Mice

變應性鼻炎（AR）為耳鼻咽喉頭頸外科最常見的疾病之一[1-3]。據(jù)統(tǒng)計，世界范圍內(nèi)約有10.0%～40.4%的人口具有AR的臨床表現(xiàn)[4-6]。研究表明，內(nèi)源性活性氧簇（ROS）水平升高以及Janus激酶2（JAK2）、信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活蛋白6（STAT6）信號分子活化是變應性炎癥發(fā)生發(fā)展的重要病理機制，而選擇性降低ROS水平，抑制JAK2、STAT6信號分子活化，則能顯著改善AR等變應性炎癥[7-10]。黃芪甲苷是AR治療經(jīng)驗方——益氣溫陽方中君藥黃芪的重要成分[11-13]。研究顯示，該成分能有效改善變應性炎癥，但其作用機制尚不明確[14-15]?；诖耍狙芯繑M從ROS以及JAK2/STAT6信號通路角度出發(fā)，初步研究黃芪甲苷對AR模型小鼠改善作用的可能機制，旨在為AR的中醫(yī)藥治療提供科學依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括BX51型正置熒光顯微鏡和SZ51型體視顯微鏡（日本Olympus公司）、ChemiDoc XRS型化學發(fā)光檢測儀（美國 Bio-Rad 公司）、CM3050 S型冰凍切片機（德國Leica公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

黃芪甲苷對照品（批號b10462，純度≥98%）購自上海士鋒生物科技有限公司;卵清蛋白（OVA，批號O1641，純度≥98%）購自美國Sigma公司;ROS檢測熒光探針-二氫乙啶（DHE）試劑盒（批號KGAF019）購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司;甲苯胺藍染料（批號D034-1-1）購自南京建成生物工程研究所;蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、TritonX-100試劑、十二烷基硫酸鈉（SDS）、牛血清白蛋白（BSA）、ECL化學發(fā)光試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒、辣根過氧化物酶（HRP）標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（批號分別為C0105S、ST795、ST626、ST025、P0018AS、P0012、A0208）均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;冰凍切片包埋劑（批號4583）購自美國Sakura公司;含4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）的抗熒光淬滅封片液（批號H-1200）購自美國Vector Laboratories公司;聚偏二氟乙烯（PVDF）膜（批號IPVH00010）購自美國Millipore公司;白細胞介素4（IL-4）、IL-5、干擾素γ（IFN-γ）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（批號分別為70-EK204HS-96、70-EK205HS-96、70-EK280HS-96）均購自杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司;兔磷酸化JAK2（p-JAK2）單克隆抗體、兔JAK2單克隆抗體、兔磷酸化STAT6（p-STAT6）多克隆抗體、兔STAT6單克隆抗體、兔β-肌動蛋白（β-actin）兔多克隆抗體（批號分別為ab32101、ab108596、ab28829、ab32520、ab8227）均購自英國Abcam公司;CoraLite 594標記的驢抗兔IgG二抗（批號SA00013-8）購自美國Proteintech公司;其余試劑均為分析純或?qū)嶒炇页Ｓ靡?guī)格，水為純化水或超純水。

1.3 動物

SPF級C57/BL6小鼠30只，雌雄各半，6～8周齡，體質(zhì)量（20±2）g，由南京中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供，動物使用許可證號為SYXK（蘇）2018-0049。所有動物按每籠5只飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學動物實驗中心，室溫為22～24 ℃，相對濕度為50%～60%，光照時間為每天12 h;自由攝食飲水，每3天更換1次墊料。本研究實驗方案獲得南京中醫(yī)藥大學動物倫理委員會的批準。

2 方法

2.1 造模、分組與給藥

將30只C57/BL6小鼠按隨機數(shù)字表法分為空白組、模型組、黃芪甲苷組，每組10只。采用基礎(chǔ)致敏聯(lián)合攻擊致敏以復制AR模型。于造模第0、7、14天進行基礎(chǔ)致敏：模型組和黃芪甲苷組小鼠于上述時間點分別單次腹腔注射OVA-氫氧化鋁混懸液（以O(shè)VA 25 μg、氫氧化鋁1 mg加入至生理鹽水300 μL中，制得）;空白組小鼠于相同時間點單次腹腔注射同體積生理鹽水。于造模第21～27天連續(xù)進行攻擊致敏：模型組和黃芪甲苷組小鼠雙側(cè)鼻腔滴入OVA混懸液（以O(shè)VA 500 μg加入至生理鹽水20 μL中，制得），每側(cè)10 μL，每天1次;空白組小鼠于相同時間點同法滴入等體積生理鹽水。于造模第15～27天，黃芪甲苷組小鼠腹腔注射黃芪甲苷40 mg/kg（以生理鹽水為溶劑，第21～27天于攻擊致敏前1 h給藥）[15-18]，按0.02 mL/g給藥，每天1次;空白組和模型組小鼠同法注射等體積生理鹽水。若小鼠出現(xiàn)頻繁撓鼻、噴嚏，則視為造模成功[19-20]。AR建模及給藥流程見圖1。

2.2 小鼠樣本的收集與制備

2.2.1 鼻腔灌洗液 于末次OVA鼻腔攻擊致敏24 h后，以戊巴比妥鈉進行麻醉，并將小鼠固定于超凈工作臺內(nèi)甲板上，以75%乙醇消毒后剖開頸部，分離氣管，于氣管內(nèi)注入生理鹽水1 mL，收集小鼠鼻腔流出的液體，于4 ℃下以1 000×g離心10 min，吸取上清液，分裝保存于-80 ℃冰箱中，備用。

2.2.2 不經(jīng)固定的組織切片 收集鼻腔灌洗液后處死小鼠，每組取3只小鼠，分離其新鮮鼻黏膜及脾臟組織，以冰凍切片包埋劑包埋后切片，制得厚約7 μm的新鮮冰凍組織切片，用于DHE染色;每組另取3只小鼠，分離其新鮮脾臟，經(jīng)錫紙包裹后放入試劑管中，液氮速凍后，移至-80 ℃冰箱中，備用。

2.2.3 經(jīng)固定的組織切片 每組另取4只小鼠，斷頭后將頭部置于4%多聚甲醛溶液中固定1～3天，再置于10%乙二胺四乙酸溶液中脫鈣5天，分離自鼻尖往后10 mm的鼻腔結(jié)構(gòu)組織，樣本依次經(jīng)20%、30%蔗糖溶液脫水后，用冰凍切片包埋劑包埋后切片，制得厚約7 μm的鼻黏膜冰凍組織切片，保存于-80 ℃冰箱中，備用。取剩余脾臟組織置于4%多聚甲醛溶液中固定1～3天，用冰凍切片包埋劑包埋后切片，制得厚度約7 μm的脾臟冰凍組織切片，保存于-80 ℃冰箱中，備用。

2.3 小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5、INF-γ含量檢測

取“2.2.1”項下各組6只小鼠的鼻腔灌洗液樣本，按ELISA試劑盒說明書進行操作，使用酶標儀檢測其鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5、INF-γ含量。

2.4 小鼠鼻黏膜組織中炎癥細胞浸潤情況觀察

取“2.2.3”項下各組小鼠經(jīng)固定的鼻黏膜冰凍組織切片，經(jīng)HE或甲苯胺藍染色后封片，于正置顯微鏡下觀察其鼻黏膜組織中炎癥細胞（嗜酸粒細胞和肥大細胞）的浸潤情況并計數(shù)。

2.5 小鼠鼻黏膜和脾臟組織中p-JAK2、p-STAT6陽性細胞計數(shù)檢測

采用免疫熒光化學法進行檢測。在室溫下復溫“2.2.3”項下各組小鼠經(jīng)固定的各組小鼠鼻黏膜和脾臟冰凍組織切片，以pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次;用含0.3%TritonX-100、5%BSA的PBS室溫孵育1 h后，分別滴加以含0.3%TritonX-100、5%BSA的PBS稀釋的兔p-JAK2、p-STAT6抗體（稀釋比例為1 ∶ 200），4 ℃孵育過夜;以PBS洗滌3次后，滴加以含0.3%TritonX-100、5%BSA的PBS稀釋的CoraLite594標記的驢抗兔IgG二抗（稀釋比例為1 ∶ 2 500），室溫避光孵育2 h。以PBS洗滌3次后，滴加含DAPI的抗熒光淬滅封片液，于正置熒光顯微鏡下觀察各組小鼠鼻黏膜和脾臟組織中p-JAK2、p-STAT6的陽性細胞并計數(shù)。實驗重復3次。

2.6 小鼠鼻黏膜和脾臟組織中ROS水平檢測

取“2.2.2”項下各組小鼠的新鮮鼻黏膜和脾臟冰凍組織切片，以PBS洗滌，加5 μmol/L DHE染液100 μL，于37 ℃孵育30 min;以PBS洗滌后，于正置熒光顯微鏡下觀察其鼻黏膜和脾臟組織中ROS水平。以空白組為參照，以各組與空白組結(jié)果的比值進行定量。實驗重復3次。

2.7 小鼠脾臟組織中p-JAK2、JAK2、p-STAT6、STAT6蛋白表達的檢測

采用Western bolt法進行測定。取“2.2.2”項下各組小鼠新鮮脾臟組織，經(jīng)裂解、勻漿、靜置后，以13 000×g離心15 min，獲取上清液。采用BCA法測定蛋白濃度后，于100 ℃下變性5 min。取變性后的蛋白樣品經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，以含5%BSA的TBST溶液室溫封閉2 h后，分別加入以含1%BSA的PBS稀釋的p-JAK2、JAK2、p-STAT6、STAT6、β-actin一抗（稀釋比例均為1 ∶ 2 000），4 ℃孵育過夜;TBST溶液洗滌3次，加入以含1%BSA的PBS稀釋的HRP標記的山羊抗兔IgG二抗（稀釋比例為1 ∶ 2 000），室溫下孵育1.5 h;以TBST溶液洗滌后，滴加ECL曝光液，于化學發(fā)光檢測儀下顯影。使用Image J V 1.8.0.112軟件進行分析，以目標蛋白與內(nèi)參（β-actin）的灰度值比值表示目標蛋白的表達水平，并以p-JAK2/JAK2比值、p-STAT6/STAT6比值分別表示JAK2、STAT6蛋白的磷酸化水平。以空白組為參照，以各組與空白組結(jié)果的比值進行定量。試驗重復3次。

2.8 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 黃芪甲苷對AR模型小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5、INF-γ含量的影響

與空白組比較，模型組小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5含量均顯著升高，INF-γ含量顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，黃芪甲苷組小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5含量顯著降低，INF-γ含量均顯著升高（P<0.05），詳見表1。

3.2 黃芪甲苷對AR模型小鼠鼻黏膜組織中炎癥細胞浸潤的影響

空白組小鼠下鼻甲黏膜和鼻底部黏膜組織中均未見明顯的嗜酸性粒細胞和肥大細胞浸潤。模型組小鼠下鼻甲黏膜和鼻底部黏膜組織中均可見大量的嗜酸性粒細胞，鼻底部黏膜附近可見大量肥大細胞浸潤，嗜酸性粒細胞和肥大細胞數(shù)量均較空白組顯著增加（P<0.05）。黃芪甲苷組小鼠下鼻甲黏膜和鼻底部黏膜組織中均可見少量嗜酸性粒細胞，鼻底部黏膜附近可見少量肥大細胞浸潤，嗜酸性粒細胞和肥大細胞數(shù)量均較模型組顯著減少（P<0.05），詳見圖2（圖中，嗜酸粒細胞被染成紅色）、圖3（圖中，肥大細胞被染成紫藍色，白邊方框為黑邊方框區(qū)域的放大圖）、表2。

3.3 黃芪甲苷對AR模型小鼠鼻黏膜和脾臟組織中p-JAK2、p-STAT6陽性細胞計數(shù)的影響

與空白組比較，模型組小鼠鼻黏膜和脾臟組織中p-JAK2、p-STAT6陽性細胞計數(shù)均顯著增加（P<0.05）;與模型組比較，黃芪甲苷組小鼠鼻黏膜和脾臟組織中p-JAK2、p-STAT6陽性細胞計數(shù)顯著降低（P<0.05），詳見圖4～圖7（圖中，紅色熒光表示p-JAK2、p-STAT6蛋白的陽性染色，藍色熒光表示細胞核，Merge為二者合并，大白邊方框為小白邊方框區(qū)域的放大圖）、表3。

3.4 黃芪甲苷對AR模型小鼠鼻黏膜和脾臟組織中ROS水平的影響

與空白組比較，模型組小鼠鼻黏膜和脾臟組織中ROS水平均顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，黃芪甲苷組小鼠鼻黏膜和脾臟組織中ROS水平均顯著降低（P<0.05），詳見圖8（圖中，紅色熒光表示ROS陽性染色）、表4。

3.5 黃芪甲苷對AR模型小鼠脾臟組織中p-JAK2/JAK2、p-STAT6/STAT6比值的影響

與空白組比較，模型組小鼠脾臟組織中p-JAK2/JAK2比值、p-STAT6/STAT6比值均顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，黃芪甲苷組小鼠脾臟組織中p-JAK2/JAK2比值、p-STAT6/STAT6比值均顯著降低（P<0.05），詳見圖9、表5。

4 討論

黃芪味甘，性微溫，入脾、肺二經(jīng)，以健脾補肺、益氣升陽、固表之功見長，正與AR中醫(yī)“肺脾虛寒”之機相合，故臨床常用之治療AR一癥[21-22]。黃芪甲苷是中藥黃芪的主要成分[11-13]。研究顯示，該成分對變應性炎癥的抑制具有良好的作用，但其內(nèi)在機制尚不明確[14-15]?；诖?，本研究擬從ROS以及JAK2/STAT6信號通路的角度出發(fā)，探討黃芪甲苷對小鼠AR的潛在效應機制，為AR中醫(yī)藥治療提供一定內(nèi)在依據(jù)。

鼻黏膜中嗜酸性粒細胞、肥大細胞等浸潤，以及局部IL-4、IL-5等細胞因子含量升高，均是AR變應性炎癥的病理基礎(chǔ)，亦為評價變應性炎癥的重要指標[23-25]。本研究結(jié)果顯示，OVA誘導的模型組小鼠鼻黏膜組織中可見大量的嗜酸性粒細胞、肥大細胞浸潤。經(jīng)黃芪甲苷干預后，小鼠鼻黏膜組織中局部嗜酸性粒細胞、肥大細胞計數(shù)顯著減少，提示黃芪甲苷對AR模型小鼠的局部免疫應答具有一定的調(diào)節(jié)作用。同時ELISA結(jié)果顯示，與模型組小鼠比較，黃芪甲苷組小鼠鼻腔灌洗液中輔助型T細胞2型（Th2）細胞因子IL-4、IL-5含量有所下調(diào)，而輔助型T細胞1型（Th1）細胞因子INF-γ含量則顯著升高。上述結(jié)果表明，黃芪甲苷對Th1/Th2細胞平衡和AR變應性炎癥具有較好的改善作用。

JAK2、STAT6廣泛參與細胞的增殖、分化、膠原合成和免疫調(diào)節(jié)等過程，具有介導多種細胞因子和生長因子分泌的生物學作用，其活化參與變應性炎癥的進展，與AR、哮喘、特異性皮炎等疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[26-27]。大量研究表明，變應性炎癥局部JAK2、STAT6信號分子磷酸化水平顯著升高，而抑制JAK2、STAT6信號分子活化則能有效調(diào)節(jié)Th1/Th2細胞平衡，從而改善AR等變應性炎癥反應[9，26-28]。ROS是JAK2/STAT6信號通路的上游信號分子，為AR等變應性炎癥發(fā)展過程中的重要因子[9，29-30]。研究顯示，其水平升高，能調(diào)節(jié)核因子κB、JAK2、STAT6等信號分子，誘導Th2型細胞活化以及B細胞釋放IgE，從而促進變應性炎癥的進展[7，10，31-33]。更有研究表明，選擇性降低ROS水平能顯著降低JAK2、STAT6等信號分子活性，進而改善AR等變應性炎癥反應[10，29，34]。本研究結(jié)果顯示，AR模型小鼠鼻黏膜和脾臟組織中p-JAK2、p-STAT6陽性細胞計數(shù)和ROS水平均顯著升高，脾臟組織中p-JAK2/JAK2、p-STAT6/STAT6比值均顯著升高;經(jīng)黃芪甲苷干預后，小鼠鼻黏膜和脾臟組織中JAK2、STAT6陽性細胞數(shù)量和ROS水平以及脾臟組織中p-JAK2/JAK2、p-STAT6/STAT6比值均較模型組顯著降低?；谏鲜鼋Y(jié)果，筆者認為黃芪甲苷有效抑制AR變應性炎癥的效應可能與下調(diào)ROS水平及抑制JAK2/STAT6信號通路相關(guān)。

但本研究存在一些不足：（1）本次研究主要涉及體內(nèi)實驗，后續(xù)將開展體外實驗，以進一步明確藥物結(jié)合的蛋白及靶點;（2）鑒于鼻黏膜樣本量較少，本研究雖提取了相關(guān)樣本，但未能對全部樣本開展有效的聚合酶鏈式反應、Western blot檢測分析;（3）由于涉及ROS、JAK2/STAT6信號通路機制的常規(guī)陽性藥物缺乏，故未設(shè)置陽性對照組，本課題組下一步將篩選具有對比意義的陽性藥物，開展更全面、深層次的研究，為黃芪甲苷治療AR提供更豐富的臨床前證據(jù)。

綜上，中藥黃芪有效成分黃芪甲苷能夠有效改善AR模型小鼠的變應性炎癥反應，其內(nèi)在機制可能與調(diào)控JAK2/STAT6信號通路及ROS水平相關(guān)，即下調(diào)JAK2/STAT6信號通路及ROS水平可能是AR精準治療的潛在靶點之一。

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（收稿日期：2020-12-26 修回日期：2021-03-25）

（編輯：鄒麗娟）