劉羽清　王俊鵬　姜川藍(lán)　成慧中　張龍崗　楊玲

摘要：在水溫為（25.3±2.4）℃條件下，采用靜水試驗(yàn)法，進(jìn)行了四種稻田常用農(nóng)藥（虱螨脲、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、氰氟草酯和五氟磺草胺）對(duì)體質(zhì)量為（16.2±0.6）g的臺(tái)灣泥鰍（Paramisgurnus dabryanus spp.）幼魚的急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果顯示：四種試驗(yàn)藥物對(duì)臺(tái)灣泥鰍幼魚的96 h半致死濃度和安全質(zhì)量濃度分別為：虱螨脲（712.7 mg/L，168.7 mg/L）、甲維鹽（39.4 mg/L，12.3 mg/L）、氰氟草酯（26.1 mg/L，11.0 mg/L）、五氟磺草胺（25.2 mg/L，9.3 mg/L）。四種試驗(yàn)藥物毒性大小依次為五氟磺草胺>氰氟草酯>甲維鹽>虱螨脲。試驗(yàn)結(jié)果表明，四種農(nóng)藥安全質(zhì)量濃度均高于日常用量，可安全使用。

關(guān)鍵詞：臺(tái)灣泥鰍（Paramisgurnus dabryanus spp.）;急性毒性;半致死濃度;安全濃度

中圖分類號(hào)：S966.4

臺(tái)灣泥鰍（Paramisgurnus dabryanus spp.）又名臺(tái)灣龍?chǎng)q、臺(tái)灣鰻鰍等，是由臺(tái)灣、大陸及東南亞地區(qū)的泥鰍品種進(jìn)行種間雜交、選育，培育出的泥鰍新品種，取名為“TW-6臺(tái)灣龍?chǎng)q”，屬于大鱗副泥鰍的改良養(yǎng)殖新品種[1]。隸屬于鯉形目（Cypriniformes）、鰍科（Cobitidae）、花鰍亞科（Cobitinae）、副泥鰍屬（Paramisgurnus），具體分類地位不明確[2-3]。近年來(lái)，隨著“稻漁綜合種養(yǎng)模式”在全國(guó)范圍掀起的發(fā)展熱潮[4]，“水稻+臺(tái)灣泥鰍”的養(yǎng)殖模式也得到了大力推廣。該模式是在稻田四周開(kāi)挖環(huán)溝，或者在稻田中開(kāi)挖“十”字、“井”字溝，利用稻田水系中天然餌料生物，并投喂少量的泥鰍專用配合飼料來(lái)養(yǎng)殖臺(tái)灣泥鰍[5]。水稻種植期間需要定期噴灑農(nóng)藥來(lái)除草和殺蟲，農(nóng)藥的劑量和使用時(shí)機(jī)如有不當(dāng)，將嚴(yán)重威脅稻田中臺(tái)灣泥鰍的存活和產(chǎn)量。因此，摸清稻田幾種常用農(nóng)藥對(duì)臺(tái)灣泥鰍的毒性效應(yīng)和安全濃度，是“水稻+臺(tái)灣泥鰍”養(yǎng)殖模式能否成功的重要前提。目前，關(guān)于農(nóng)藥對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的毒性效應(yīng)研究較少，僅見(jiàn)在泥鰍[5-8]、大鱗副泥鰍[9]、黃河鯉[10]、羅非魚[11]等品種上有報(bào)道，而關(guān)于農(nóng)藥對(duì)臺(tái)灣泥鰍的急性毒性研究尚未見(jiàn)報(bào)道，本試驗(yàn)選擇兩種稻田常用殺蟲劑和兩種常用除草劑對(duì)臺(tái)灣泥鰍進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，用以評(píng)價(jià)4種常用藥物的安全質(zhì)量濃度和毒性等級(jí)，以期達(dá)到稻鰍養(yǎng)殖模式中安全養(yǎng)殖臺(tái)灣泥鰍的目的。

1材料和方法

1.1材料

試驗(yàn)所用臺(tái)灣泥鰍取自濟(jì)寧大啟發(fā)泥鰍養(yǎng)殖專業(yè)合作社，選取體質(zhì)健康、無(wú)病無(wú)傷、規(guī)格一致的臺(tái)灣泥鰍幼魚進(jìn)行試驗(yàn)。泥鰍體長(zhǎng)為（14.4±1.1） cm，體質(zhì)量為（16.2±0.6） g。試驗(yàn)前，將臺(tái)灣泥鰍置玻璃鋼水池中暫養(yǎng)一周，暫養(yǎng)水為地下深井水，充氣泵充氣，水溫23～28 ℃，每天上午投食1次臺(tái)灣泥鰍專用配合飼料（蛋白含量36%），以飽食為準(zhǔn)（80%個(gè)體離開(kāi)投餌區(qū)），于試驗(yàn)開(kāi)始前24 h停止投食。

試驗(yàn)所用藥物分別為稻田用殺蟲劑：虱螨脲和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（以下簡(jiǎn)稱甲維鹽）;除草劑：氰氟草酯和五氟磺草胺，均購(gòu)買自濟(jì)寧當(dāng)?shù)氐霓r(nóng)藥商店，具體規(guī)格和生產(chǎn)廠家見(jiàn)表1。試驗(yàn)藥液配置方法為先配成一定濃度的母液，再根據(jù)試驗(yàn)需要，逐步按比例用水稀釋成試驗(yàn)所需濃度藥液，所有藥液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2試驗(yàn)條件

試驗(yàn)用水為地下深井水，經(jīng)曝氣后，加入規(guī)格為60 cm×40 cm×40 cm的白色塑料箱中，每箱加水30 L，水溫（25.3±2.4）℃，pH值為8.0±0.4，溶解氧（4.7±0.6）mg/L，水質(zhì)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（GB 11607-1989）。每箱放入臺(tái)灣泥鰍10尾，每天測(cè)量1次水溫、pH值、溶解氧。

1.3試驗(yàn)方法

試驗(yàn)參考《水生生物毒性試驗(yàn)方法》[12]，采用96 h靜水法，試驗(yàn)期間保持充氧但不投餌。

1.3.1預(yù)試驗(yàn)首先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，確定最小全致死以及最大零致死濃度。試驗(yàn)持續(xù)96 h，每天2次記錄各箱內(nèi)臺(tái)灣泥鰍的死亡數(shù)量，及時(shí)撈出死魚。

1.3.2正式試驗(yàn)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，按照等對(duì)數(shù)間距設(shè)置5個(gè)濃度梯度組和1個(gè)空白對(duì)照組，每個(gè)質(zhì)量濃度組設(shè)2個(gè)平行，由預(yù)試驗(yàn)得到的4種藥物質(zhì)量濃度見(jiàn)表2。將試驗(yàn)藥液稀釋至設(shè)定濃度后，隨機(jī)撈取暫養(yǎng)的10尾臺(tái)灣泥鰍迅速放入各塑料箱中，所有試驗(yàn)魚在30 min內(nèi)完成分組。

試驗(yàn)開(kāi)始后分別于24 h、48 h、72 h和96 h觀察試驗(yàn)魚的中毒反應(yīng)和死亡情況，在試驗(yàn)過(guò)程中及時(shí)撈出死亡個(gè)體，記錄其死亡時(shí)間。并計(jì)算各試驗(yàn)組24 h、48 h、72 h和96 h的死亡率。對(duì)受試泥鰍的死亡判斷為呼吸停止，用鑷子夾住其尾部30 s后依然毫無(wú)反應(yīng)[6]。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用改良后的寇氏法[13-14]，進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及計(jì)算，得出四種農(nóng)藥對(duì)臺(tái)灣泥鰍的半致死濃度（LC50）以及安全濃度（SC）。計(jì)算公式如下：

lgLC50=Xm-i（Σp-0.5）???????????????????????? 式（1）

SC=LC50（48 h）×0.3/[LC50（24 h）/LC50（48 h）]2??????????????????????? 式（2）

式中：LC50為半致死質(zhì)量濃度，mg/L;Xm為最大處理濃度的對(duì)數(shù)值;i為相鄰兩處理組濃度對(duì)數(shù)差值;∑p為各處理組死亡率總和;p為死亡率（以小數(shù)表示）。

2結(jié)果與分析

2.1試驗(yàn)觀察結(jié)果

整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)照組的臺(tái)灣泥鰍沒(méi)有發(fā)現(xiàn)死亡個(gè)體，即死亡率為0。四種藥物對(duì)臺(tái)灣泥鰍的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

臺(tái)灣泥鰍在虱螨脲藥液中的中毒癥狀表現(xiàn)為：在低質(zhì)量濃度虱螨脲藥液（500、609 mg/L）中起初無(wú)明顯中毒反應(yīng)，隨后逐漸出現(xiàn)中毒癥狀，反應(yīng)遲緩，身體逐漸失去平衡，最后死于塑料箱底。在高質(zhì)量濃度組（741.3、903.6、1 100 mg/L）時(shí)，反應(yīng)較為激烈，狂躁不安。死亡的臺(tái)灣泥鰍體色變淺、發(fā)白，魚體僵硬，體表黏液增多，當(dāng)質(zhì)量濃度為1 100 mg/L時(shí)，臺(tái)灣泥鰍約于4 h出現(xiàn)中毒癥狀，48 h死亡率達(dá)100%（表3）。

臺(tái)灣泥鰍在甲維鹽藥液中的中毒癥狀表現(xiàn)為：初期急劇狂游，并撞擊塑料箱，之后聚集于塑料箱一角，隨時(shí)間的延長(zhǎng)，身體逐漸失去平衡，直至最后死亡。死亡后的魚體體表無(wú)潰瘍和腐爛，體色變白。試驗(yàn)結(jié)果表明，臺(tái)灣泥鰍在低質(zhì)量濃度（30 mg/L）試驗(yàn)組中96 h的死亡率為20%，而在高質(zhì)量濃度（180 mg/L）試驗(yàn)組在24 h時(shí)死亡率為90%，而48 h和96 h時(shí)死亡率均為100%（表3）。

臺(tái)灣泥鰍在氰氟草酯藥液中的中毒癥狀表現(xiàn)為：反應(yīng)激烈，竄游不安，頭部時(shí)常露出水面，初期能對(duì)外界環(huán)境刺激作出反應(yīng)，后期逐漸出現(xiàn)中毒癥狀，身體失去平衡并沉于箱底。死亡魚體僵直，鰓蓋張開(kāi)。結(jié)果表明，臺(tái)灣泥鰍在低濃度試驗(yàn)組（20 mg/L）24 h死亡率為0，而在高質(zhì)量濃度組（90 mg/L）的24 h、48 h死亡率分別為70%、80%，96 h死亡率為100%（表3）。

臺(tái)灣泥鰍在五氟磺草胺藥液中表現(xiàn)為：焦躁不安，來(lái)回游竄，不時(shí)把頭伸出水面游動(dòng)，和在氰氟草酯中的中毒癥狀基本一致。死亡后的臺(tái)灣泥鰍魚體僵硬，體表一層白色黏液。當(dāng)在低質(zhì)量濃度組（20 mg/L）時(shí)，魚體24 h死亡率為0，而在高質(zhì)量濃度試驗(yàn)組（50 mg/L）48 h、96 h死亡率分別為60%和100%（表3）。

2.2半致死濃度和安全質(zhì)量濃度

由式（1）和式（2）得到四種藥物的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度見(jiàn)表4。四種藥物的24 h、48 h、96 h半致死質(zhì)量濃度均為24 h>48 h>96 h，四種農(nóng)藥的半致死質(zhì)量濃度由高到低依次為虱螨脲>甲維鹽>氰氟草酯>五氟磺草胺。四種藥物的安全質(zhì)量濃度大小依次為虱螨脲（168.7 mg/L）>甲維鹽（12.3 mg/L）>氰氟草酯（11.0 mg/L）>五氟磺草胺（9.3 mg/L）。

3討論

3.1四種藥物對(duì)臺(tái)灣泥鰍的毒性評(píng)價(jià)

半致死質(zhì)量濃度（LC50）用來(lái)衡量藥物對(duì)試驗(yàn)魚毒性的大小，其值越小則藥物毒性越高，其值越大則藥物毒性越低[15-16]。以96 h為魚類急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，分為極高毒（<1 mg/L）、高毒（1～10 mg/L）、中毒（>10～100 mg/L）、低毒（>100 mg/L）4個(gè)等級(jí)[17]。本試驗(yàn)中四種藥物對(duì)臺(tái)灣泥鰍的96 h半致死質(zhì)量濃度依次為虱螨脲>甲維鹽>五氟磺草胺>氰氟草酯，四種藥物對(duì)臺(tái)灣泥鰍的毒性大小依次為氰氟草酯>五氟磺草胺>甲維鹽>虱螨脲。試驗(yàn)結(jié)果表明，甲維鹽、五氟磺草胺、氰氟草酯是中毒藥物，虱螨脲是低毒藥物。

稻田其他常用殺蟲劑主要有吡蟲啉、殺蟲單、毒死蜱、氯氰菊酯、溴氰菊酯、二硫代磷酸酯、高效氯氟氰菊酯等。已有研究結(jié)果表明：菊酯類農(nóng)藥對(duì)魚類的安全濃度都比較小，氯氰菊酯對(duì)箭尾魚和羅非魚96 h的LC50分別為13.43 μg/L和3.82 μg/L，均為極高毒[11]。溴氰菊酯對(duì)箭尾魚和羅非魚96 h的LC50分別為6.81 μg/L和3.04 μg/L，均是高毒農(nóng)藥[11];高效氯氟氰菊酯對(duì)大鱗副泥鰍的96 h的LC50為14.11 μg/L，毒性為極高毒[18];高效氯氰菊酯對(duì)泥鰍的24 h和48 h的LC50僅為0.8 μg/L和0.4μg/L[6]，泥鰍對(duì)這類農(nóng)藥敏感，應(yīng)避免在稻田使用。吡蟲啉和殺蟲丹對(duì)泥鰍96 h的LC50分別為 40.975、12.994 mg/L，均為高毒[8]，而毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍的96 h的LC50為193.20 μg/L ，毒性為極高毒[9]，二硫代磷酸酯對(duì)泥鰍屬于中毒[5];而本試驗(yàn)所用兩種殺蟲劑虱螨脲和甲維鹽的96 h的LC50分別為712.7 mg/L和39.4 mg/L，毒性分級(jí)上屬于低毒和中毒，毒性均小于其他常用農(nóng)藥。稻田常用除草劑對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的毒性研究較少：其中，宋穩(wěn)成等[19]的研究表明二氯喹啉酸對(duì)湘云鯽96 h的LC50為149.14 mg/L，屬于一種低毒農(nóng)藥;邢躍楠等[5]的研究結(jié)果同樣表明二氯喹啉酸對(duì)泥鰍也是一種低毒農(nóng)藥。很多研究結(jié)果表明丁草胺對(duì)魚類是一種高毒農(nóng)藥，其中對(duì)泥鰍48 h的LC50為1.41 mg/L[5]，而對(duì)鮭、翻車魚、鯉、鯰和牙鲆96 h的LC50分別為：0.52、0.44、0.32、0.14 mg/L和0.002 mg/L，毒性均屬于極高毒[20]。而本試驗(yàn)所用兩種除草劑五氟磺草胺和氰氟草酯96 h的LC50分別為25.2 mg/L和26.1 mg/L，屬于中等毒性的農(nóng)藥。

四種農(nóng)藥對(duì)臺(tái)灣泥鰍的半致死質(zhì)量濃度呈24 h半致死質(zhì)量濃度>48 h半致死質(zhì)量濃度>96 h半致死質(zhì)量濃度（表4），說(shuō)明隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，四種農(nóng)藥對(duì)臺(tái)灣泥鰍幼魚的毒性效應(yīng)逐漸增加。

3.2四種藥物對(duì)臺(tái)灣泥鰍的用藥安全

虱螨脲為昆蟲的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，有抑制幾丁質(zhì)合成的作用，主要作用于昆蟲幼蟲，阻止幼蟲蛻皮過(guò)程，具有胃毒和觸殺作用，適用于防治對(duì)擬除蟲菊酯和有機(jī)磷等農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的害蟲，是當(dāng)前農(nóng)業(yè)害蟲綜合防治中的理想藥劑[21]。本試驗(yàn)中，虱螨脲對(duì)臺(tái)灣泥鰍的安全質(zhì)量濃度為168.7 mg/L，高于常用劑量，且其在毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)中屬于低毒，因此在臺(tái)灣泥鰍養(yǎng)殖過(guò)程中可采用該藥物進(jìn)行水稻的病蟲害防治。

甲維鹽作為一種生物殺蟲殺螨劑，因其具有超高效、低毒、低殘留、無(wú)公害等特性，主要用于去除水產(chǎn)養(yǎng)殖生物中的寄生性橈足類以及多種農(nóng)作物的害蟲。已有報(bào)道表明，甲維鹽能對(duì)蝦類、橈足類、魚類等多種海洋生物造成影響[22]。范仁俊等[23]評(píng)價(jià)了甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對(duì)斑馬魚的毒性和藥效。試驗(yàn)表明，在96 h的試驗(yàn)期間，斑馬魚游動(dòng)減緩，側(cè)翻失衡，甲維鹽對(duì)斑馬魚的96 h半致死濃度為27.01 mg/L。本試驗(yàn)中，甲維鹽對(duì)臺(tái)灣泥鰍的96 h半致死濃度為39.4 mg/L，安全質(zhì)量濃度為12.3 mg/L，其在毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)中屬于中毒，因此在臺(tái)灣泥鰍養(yǎng)殖過(guò)程中該藥物應(yīng)慎用。由于生產(chǎn)中水稻田噴灑劑量為330～390 mL/hm2，劑量遠(yuǎn)低于該安全質(zhì)量濃度，因此，該殺蟲劑可限量地用于水稻田病蟲害防治。

氰氟草酯又名千金，最早由美國(guó)陶氏公司開(kāi)發(fā)研制，屬芳氧苯氧基丙酸酯類除草劑，是唯一對(duì)水稻具有高度安全性的品種，具有高效的內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，在國(guó)內(nèi)外應(yīng)用相當(dāng)廣泛。朱麗珍[24]對(duì)斑馬魚的毒性試驗(yàn)表明，氰氟草酯對(duì)斑馬魚成魚的96 h半致死濃度為4.05 mg/L，對(duì)斑馬魚成魚的急性毒性屬于中毒。本試驗(yàn)中，氰氟草酯對(duì)臺(tái)灣泥鰍的安全質(zhì)量濃度為11.0 mg/L，其在毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)中也是屬于中等毒性藥物，但是生產(chǎn)中一般常用劑量為750～1 050 mL/hm2，遠(yuǎn)低于該安全濃度，該除草劑可限量地用于水稻田除草。

五氟磺草胺是由美國(guó)陶農(nóng)科公司（Dow Agro Sciences）所開(kāi)發(fā)的一種三唑并嘧啶磺酰胺除草劑，在芽前使用，并通過(guò)抑制乙酰乳酸合成酶（ALS）而起作用，具有廣譜性，可有效除去稻田中的多種雜草。亓蒙[25]研究了四種農(nóng)藥對(duì)泥鰍和大鱗副泥鰍的毒性，結(jié)果表明，五氟磺草胺對(duì)泥鰍的96 h半致死濃度為26.993 9 mg/L，安全濃度為8.246 7 mg/L;對(duì)大鱗副泥鰍的96 h半致死濃度為28.964 1 mg/L，安全濃度為9.400 1 mg/L，大鱗副泥鰍對(duì)藥物的耐受性略高于泥鰍。本試驗(yàn)中，五氟磺草胺對(duì)臺(tái)灣泥鰍的96 h半致死濃度為25.2 mg/L，安全質(zhì)量濃度為9.3 mg/L，96 h半致死濃度略低于泥鰍和大鱗副泥鰍，但是安全濃度略高于泥鰍，低于大鱗副泥鰍。從毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)上看屬于中等毒性。因生產(chǎn)中一般常用劑量為495～1 500 mL/hm2，遠(yuǎn)低于該安全濃度，因此，該除草劑可限量地用于水稻田除草。

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Acute toxicity of pesticides in rice field to Paramisgurnus dabryanus spp.

LIU Yuqing， WANG Junpeng， JIANG Chuanlan，CHENG Huizhong， ZHANG Longgang， YANG Ling

（Shandong Freshwater Fisheries Research Institute，Shandong Provincial Key Laboratory of Freshwater Genetics and Breeding，Jinan 250117，China）

Abstract：The acute toxicity of four pesticides （lufenuron，emamectin benzoate，cyhalofop-butyl and penoxsulam）to Paramisgurnus dabryanus spp. with body weight of （16.2±0.6）g were studied at water temperature of （25.3±2.4）℃ by? hydrostatic test method.The results showed that the LC50（96 h）and the SC of lufenuron，emamectin benzoate，cyhalofop-butyl and penoxsulam in Paramisgurnus dabryanus spp. were（712.7 mg/L，168.7 mg/L），（39.4 mg/L，12.3 mg/L），（26.1 mg/L，11.0 mg/L） and （25.2 mg/L，9.3 mg/L）respectively. The toxicity of the four pesticides with order as penoxsulam>cyhalofop-butyl >emamectin benzoate>lufenuron.According to the results，the four chemicals were safe in rice disease control.

Key words：Paramisgurnus dabryanus spp.;acute toxicity;median-lethal concentration;safe concentration

（收稿日期：2021-03-30）