趙苗苗，呂朝治，余 玲

(漢中市中心醫(yī)院兒科，陜西 漢中 723000)

腺病毒是雙鏈DNA病毒，易侵犯呼吸道而引發(fā)呼吸道感染，如扁桃體炎、支氣管炎、支氣管肺炎等，且多發(fā)生在兒童時期，給患兒生命健康造成嚴重威脅[1]。人腺病毒型別眾多，現(xiàn)階段，將人腺病毒劃分為7個亞群(A、B、C、D、E、F、G)，共包含52個血清型別，其中引發(fā)呼吸道感染的腺病毒主要集中在1型、2型、3型、4型、5型、7型、11型等血清型中[2]。目前，關(guān)于腺病毒感染的發(fā)病機制雖尚未完全清楚，但有研究[3]表明，呼吸道腺病毒感染涉及到多種細胞因子及淋巴細胞亞群的作用。且有研究[4]顯示，重癥腺病毒肺炎患兒發(fā)病時，其外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比值均降低，存在機體細胞免疫功能下降的情況，但經(jīng)治療后，恢復(fù)期外周血CD3、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比值均升高，其為治療效果的判斷提供了監(jiān)測依據(jù)。本研究特就此展開探討，以期為臨床病情及治療的判斷提供客觀參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將本院2017年3月至2019年12月收治的67例呼吸道腺病毒感染患兒設(shè)為研究組，另將同期體檢健康的53例兒童設(shè)為對照組。其中研究組男36例，女31例；年齡3個月至12歲，平均(3.56±0.67)歲；體重6.02～36.19 kg，平均(15.82±3.06)kg；發(fā)病類型：急性上呼吸道感染35例，支氣管炎17例，支氣管肺炎15例。對照組男29例，女24例；年齡4個月至10歲，平均(3.35±0.54)歲；體重6.62～33.24 kg，平均(14.83±2.46)kg。兩組在性別、年齡、體重等方面比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，本研究已獲取醫(yī)院倫理委員會審批。病例納入標準：研究組均符合呼吸道腺病毒感染診斷標準[5]，且經(jīng)病原學(xué)檢測確診；對照組均體檢健康，無慢性疾病，且近1個月內(nèi)未發(fā)生感染性疾病；年齡<14歲；家屬均知情且自愿參與。排除標準：伴肺結(jié)核、哮喘、支原體感染等呼吸系統(tǒng)疾病者；其他病毒感染者；伴免疫系統(tǒng)疾病者；營養(yǎng)不良者；近期使用過抗生素、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等藥物者；先天性肺發(fā)育不良者。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血T淋巴細胞亞群水平檢測：抽取兩組研究對象空腹外周靜脈血4 ml，離心并分離血清，采用流式細胞術(shù)檢測外周血T淋巴細胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+水平，并計算CD4+/CD8+比值，其中流式細胞儀及相關(guān)試劑盒均購于美國BD公司。

1.2.2 腺病毒血清型別檢測：采取研究組患兒鼻咽分泌物，應(yīng)用免疫熒光法對其進行病毒抗原檢測，確定腺病毒陽性。提取病毒DNA，并進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增，其反應(yīng)體系(25 μl)：反應(yīng)液2 μl，模板液2 μl，TaqDNA聚合酶12.5 μl，上、下游引物各0.5 μl，加水補足至25 μl；反應(yīng)條件：在94 ℃下預(yù)變性4 min，94 ℃下變性1 min，在55 ℃下退火30 s，另在72 ℃下延伸1 min，總共35個循環(huán)，在72 ℃下終延伸5 min。其中DNA分子質(zhì)量標準、聚合酶、脫氧核苷酸試劑盒購自上海雅吉生物科技有限公司，PCR試劑盒購自生工生物工程(上海)股份有限公司，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，PCR擴增儀購自杭州朗基科學(xué)儀器有限公司。

1.3 觀察指標 ①研究組與對照組外周血T淋巴細胞亞群水平情況；②研究組血清型別情況；③研究組各血清型別外周血T淋巴細胞亞群水平情況。

2 結(jié) 果

2.1 研究組與對照組外周血T淋巴細胞亞群水平比較 研究組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均較對照組降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)；研究組外周血CD8+水平與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義差異(P>0.05)。見表1。

表1 研究組與對照組外周血T淋巴細胞亞群水平比較

2.2 研究組血清型型別情況 經(jīng)腺病毒血清型別檢測，在67例呼吸道腺病毒感染患兒中，3型腺病毒35例(52.24%)，7型腺病毒21例(31.34%)，其他型腺病毒11例(16.42%)。

2.3 研究組各血清型別外周血T淋巴細胞亞群水平比較 CD8+在研究組各血清型別間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+在研究組各血清型別間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(均P<0.05)，3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于其他型別腺病毒感染，7型腺病毒感染患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于3型腺病毒感染，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表2。

表2 研究組各血清型別外周血T淋巴細胞亞群水平比較

3 討 論

腺病毒是兒童呼吸道感染常見病原體之一，可引發(fā)嚴重支氣管炎或重癥肺炎等，增加兒童死亡風(fēng)險[6]。機體感染腺病毒后，可產(chǎn)生免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)，以對抗腺病毒感染[7]。T淋巴細胞亞群主要包括CD3+、CD4+、CD8+等，在免疫系統(tǒng)中具有重要的調(diào)控作用，正常情況下，T淋巴細胞亞群各細胞數(shù)量保持一定的比例而使機體免疫功能維持在動態(tài)平衡狀態(tài)，但當受到感染時，各數(shù)量或功能出現(xiàn)改變，導(dǎo)致免疫功能紊亂，引發(fā)疾病發(fā)生發(fā)展[8-9]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組外周血CD8+水平與對照組無明顯區(qū)別，但CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均較對照組明顯降低，提示呼吸道腺病毒感染患兒細胞免疫功能降低。CD3+是成熟T細胞，CD4+是免疫應(yīng)答中重要反應(yīng)細胞，協(xié)同發(fā)揮免疫功能，而CD8+為免疫抑制細胞，另CD4+/CD8+比值反應(yīng)機體免疫狀態(tài)[10]。正常情況下，CD4+與CD8+相互制約而達到動態(tài)平衡，腺病毒感染機體后，機體細胞免疫功能紊亂，輔助性T細胞比例下降[11]。有研究[12]表明，急性呼吸道腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+水平均較正常對照兒童明顯降低，而CD3+、CD8+無明顯差異，此與本研究結(jié)果相符合。盧華君等[13]研究亦表明呼吸道腺病毒感染患兒存在免疫功能紊亂，外周血CD3+、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，在67例呼吸道腺病毒感染患兒中，3型腺病毒感染占比52.24%，7型腺病毒感染占比31.34%，其他型腺病毒感染占比16.42%，提示腺病毒引發(fā)的呼吸道感染患兒以3型及7型腺病毒為主。帥金鳳等[14]研究顯示，2017年石家莊地區(qū)呼吸道腺病毒感染住院兒童中，3型腺病毒9例(11.8%)、7型腺病毒27例(35.5%)，為主要流行型別。另Haque等[15]研究表明，人腺病毒3型是世界范圍內(nèi)急性呼吸道感染主要病原，占所有腺病毒呼吸道感染的15%～87%。此外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，研究組各血清型別腺病毒感染患兒間CD8+無明顯差異，但3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于其他型別腺病毒感染，且7型腺病毒感染患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均較3型腺病毒感染降低，提示3型、7型腺病毒引發(fā)的呼吸道感染對機體免疫功能損傷較其他型別嚴重，且7型最為嚴重。有研究[16]表明，B亞組中的人腺病毒7型、3型的致病性較C組、E組中的其他型別強。另有研究[17]顯示，在人腺病毒7個亞組中，與呼吸道感染有關(guān)的主要是B組(3、7、11型等)、C組(1、2、5型等)、E組(4型)，尤其是B亞組中3、7型可引發(fā)嚴重呼吸道感染性疾病。3型、7型腺病毒致病性較強，可引發(fā)較重的臨床表現(xiàn)，導(dǎo)致淋巴細胞亞群紊亂較為嚴重，促使細胞免疫功能嚴重降低，則CD3+、CD4+、CD4+/CD8+下降更為明顯；而1型、2型等其他型別腺病毒的毒力較小，較少引發(fā)嚴重臨床表現(xiàn)，免疫功能紊亂相對較輕。此外，有研究[18-20]表明，與3型腺病毒感染相比較，7型腺病毒感染引起了更為嚴重的疾病特征與結(jié)果。此可有助于對患兒病情嚴重程度進行評估，以指導(dǎo)臨床治療，并可有助于治療效果的判斷。

綜上所述，呼吸道腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低，其腺病毒感染型別以3型、7型為主，且3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低情況較其他型別的腺病毒感染明顯，并以7型腺病毒感染降低最為嚴重，可指導(dǎo)臨床對此類患兒的免疫干預(yù)，實施重癥疾病的救治。