許師源，張峻瑋，張宏玲

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院 動(dòng)物科技學(xué)院 132101）

熱應(yīng)激是家禽生產(chǎn)養(yǎng)殖中經(jīng)常面臨的問(wèn)題之一，給禽業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)熱應(yīng)激發(fā)生時(shí)，如果不能及時(shí)采取積極有效的防治措施，持續(xù)的熱應(yīng)激會(huì)引起機(jī)體出現(xiàn)中暑，會(huì)對(duì)機(jī)體造成廣泛損傷作用,危及體內(nèi)各個(gè)系統(tǒng),導(dǎo)致器官組織在功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)上發(fā)生改變,甚至造成動(dòng)物死亡。本研究以肉雞為試驗(yàn)動(dòng)物，建立急性熱應(yīng)激模型，通過(guò)臨床觀察、抗氧化指標(biāo)檢測(cè)等技術(shù)，探討熱應(yīng)激條件下肉雞肝臟損傷的相關(guān)指標(biāo)的變化。為探討熱應(yīng)激條件下肉雞肝損傷的發(fā)病機(jī)理提供理論依據(jù)，對(duì)預(yù)防和抵抗熱應(yīng)激有重要的實(shí)踐指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

將60只10日齡的肉雞，隨機(jī)分為對(duì)照組、熱應(yīng)激組、VC組，每組20只。各組動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食飲水。所有雞飼喂全價(jià)飼料，其中，VC組飲用水中預(yù)混入VC溶劑（按250mg/kg標(biāo)準(zhǔn)）。每日光照時(shí)間維持10h左右，溫度維持在25℃左右，嚴(yán)格按照肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)。待雞經(jīng)過(guò)一周的環(huán)境適應(yīng)后，除對(duì)照組外，熱應(yīng)激組和VC組雞分別進(jìn)行熱應(yīng)激處理（溫度為38±1℃，濕度為55%～65%）。

1.2 樣品采集與處理

待高溫應(yīng)激分別持續(xù)2h、5h和10h時(shí)，對(duì)照組、熱應(yīng)激組和VC組各選取5只雞,進(jìn)行心臟無(wú)菌采血，分離血清備用。

1.3 檢測(cè)項(xiàng)目與方法

（1）NO含量測(cè)定——硝酸比色法；（2）GSH-Px活力測(cè)定——DTNB顯色法。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)采用 SPSS軟件對(duì)本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 熱應(yīng)激對(duì)肉雞血清中NO含量影響

數(shù)據(jù)結(jié)果表明，熱應(yīng)激2h階段，熱應(yīng)激組雛雞血清中NO含量升高，VC組NO含量降低，熱應(yīng)激組與對(duì)照組相比，組間差異極顯著（p＜0.01），VC組與對(duì)照組相比，組間差異不顯著（p＞0.05）；5h階段，熱應(yīng)激組和VC組NO含量有升高。

趨勢(shì)；各組與對(duì)照組相比，組間差異極顯著(p＜0.01)；10h階段，VC組NO含量比5h階段降低,但仍然高于對(duì)照組，與對(duì)照組相比差異極顯著(p＜0.01)，熱應(yīng)激組NO含量繼續(xù)升高，與對(duì)照組相比差異極顯著，VC組與對(duì)照組比較差異顯著。

表1 熱應(yīng)激肉雞血清中NO含量的變化（U/mL，n=8）

2.2 熱應(yīng)激對(duì)肉雞血清中GSH-Px活性影響

由表2可以看出，熱應(yīng)激2h階段，熱應(yīng)激組和VC組肉雞血清中GSH-Px活性略有下降趨勢(shì)；與對(duì)照組相比，差異極顯著（p＜0.01）。VC組與對(duì)照組相比，組間差異顯著（p＜0.05）；5h階段，熱應(yīng)激組和VC組GSH-Px活性繼續(xù)降低；各組與對(duì)照組相比，組間差異極顯著(p＜0.01)；10h階段，VC組GSH-Px活性比5h階段升高,但仍高于對(duì)照組，與對(duì)照組相比差異極顯著(p＜0.01)，熱應(yīng)激組GSH-Px活性繼續(xù)升高，與對(duì)照組相比差異極顯著，VC組與對(duì)照組相比差異不顯著(p＞0.05)。

表2 熱應(yīng)激對(duì)肉雞血清中GSH-Px活性的變化（U/mL，n=8）

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激組和VC組肉雞血清中NO含量明顯增高，同時(shí)GSH-Px活性下降。已有研究表明，熱應(yīng)激顯著抑制機(jī)體氧自由基代謝，是造成該環(huán)境下機(jī)體免疫力下降的原因之一，氧自由基的產(chǎn)生在熱應(yīng)激性的病理過(guò)程中起重要作用[1]。在正常情況下，生物體內(nèi)氧自由基產(chǎn)生、利用和清除保持著動(dòng)態(tài)平衡，自由基清除主要依靠體內(nèi)NO、SOD、GSH-Px等酶類(lèi)物質(zhì)[2]。當(dāng)機(jī)體受應(yīng)激刺激時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)NO的產(chǎn)生，NO與體內(nèi)超氧陰離子（0-2）等活性氧反應(yīng)介導(dǎo)細(xì)胞毒作用，造成生物膜結(jié)構(gòu)和功能損傷。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）是機(jī)體內(nèi)一種重要的過(guò)氧化物分解酶，能清除細(xì)胞內(nèi)有害的過(guò)氧化代謝產(chǎn)物，阻止脂質(zhì)過(guò)氧化連鎖反應(yīng)，從而對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能起到保護(hù)的作用[3]。過(guò)量的O-2，H2O2能使還原型谷胱甘肽氧化成氧化型谷胱甘肽，進(jìn)而抑制GSH-Px酶的活性，引起動(dòng)物免疫力下降，誘發(fā)各種疫病[4]。楊鳳微等（2009年）研究證實(shí)，冷應(yīng)激能引起雛雞血清NO含量升高、GSH-PX活性降低，使機(jī)體抗氧化系統(tǒng)遭到破壞[5]。Gumuslu等學(xué)者在對(duì)小鼠慢性冷應(yīng)激研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)冷應(yīng)激可使小鼠紅細(xì)胞CuZn-SOD活性下降，GSH-Px活性升高[6]。

在熱應(yīng)激條件下，VC有利于維持細(xì)胞膜的完整性，能增強(qiáng)白細(xì)胞吞噬功能和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能，另外VC能減輕熱應(yīng)激造成的氧化應(yīng)激損傷，提高超氧化物酶和谷胱甘肽的活性。孫延鳴等發(fā)現(xiàn)，預(yù)先添加VC能顯著改善熱應(yīng)激產(chǎn)蛋雞血清ALT、LDH、TP等生化指標(biāo)[6]。然而 Nockels卻發(fā)現(xiàn)，高溫條件下在肉雞的日糧中添加200mg/kg VC并不能改善各項(xiàng)指標(biāo)和減少死亡率。本試驗(yàn)結(jié)果中，熱應(yīng)激組肉雞隨著熱應(yīng)激時(shí)間的持續(xù)，NO含量升高，GSH-Px活性降低，總體趨勢(shì)與所報(bào)道的研究結(jié)果基本一致，表明熱應(yīng)激時(shí)，肉雞體內(nèi)氧化-抗氧化平衡被破壞，導(dǎo)致氧自由基生成增多，對(duì)機(jī)體造成一定程度上損害。VC組在熱應(yīng)激初期NO含量降低,中期升高,末期又下降，NO總體水平比未添加組要低，說(shuō)明VC在緩解熱應(yīng)激損傷方面起到了一定的作用。