鄧濤，年懸懸，張家友，黃仕和，楊曉明

1.武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司，湖北武漢430207；2.國家聯(lián)合疫苗工程技術(shù)研究中心，湖北 武漢430207；3.中國生物技術(shù)股份有限公司，北京100029

過去十幾年，因重癥急性呼吸綜合征冠狀病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARSCoV）及中東呼吸綜合征冠狀病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV）感染引起的呼吸道傳染病的流行，使冠狀病毒成為21世紀(jì)新的公共衛(wèi)生問題［1］。2019年12月，中國武漢報告了一種伴隨不明原因發(fā)熱的呼吸道疾病病例，隨后通過病毒分離鑒定為一種由新型冠狀病毒引起的肺炎［2］。國際病毒分類委員會（International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV）將該病毒命名為重癥急性呼吸綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2），世界衛(wèi)生組織（WHO）將其引起的疾病命名為新型冠狀病毒肺炎（Coronavirus Disease 2019，COVID-19）［3］。COVID-19已演變?yōu)槿虼罅餍?，截?021年5月30日，全球已有超過1.69億的確診病例和超過351.91萬的死亡病例［4］。接種疫苗是預(yù)防控制COVID-19大流行最有效的措施之一。滅活疫苗一直是疫苗的重要研發(fā)方向，已被廣泛用于狂犬病、流感、脊髓灰質(zhì)炎、霍亂等疾病的預(yù)防。目前，全球范圍內(nèi)至少有9種COVID-19全病毒滅活疫苗已進入Ⅲ期臨床試驗，其中武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司（簡稱武漢生物）、北京生物制品研究所有限責(zé)任公司（簡稱北京生物）及北京科興生物制品有限公司（簡稱科興生物）的3種COVID-19滅活疫苗已在多個國家授權(quán)使用［5-6］。

本文對SARS-CoV-2的特征以及COVID-19滅活疫苗研發(fā)的毒種與細(xì)胞基質(zhì)選擇、生產(chǎn)工藝、臨床前與臨床研究、對突變株的保護作用和未來面臨的挑戰(zhàn)作一綜述。

1 SARS-CoV-2的特征

冠狀病毒為單股、正鏈RNA病毒，具有球形包膜，直徑為100~160 nm［7］，可感染蝙蝠、豬、貓、嚙齒動物和人類等多個物種［8］。與人類相關(guān)的冠狀病毒有7種：HCoV-NL63、HCoV229E、HCoV-OC43、HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV-2，其中前4種僅引起輕度的上呼吸道癥狀，而后3種是引起嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)疾病的高致病性冠狀病毒［7］。SARS-CoV-2、SARS-CoV和MERS-CoV均屬于冠狀病毒科β冠狀病毒屬，具有極高的致病性和傳染性。SARS-CoV-2和SARS-CoV與幾種蝙蝠冠狀病毒密切相關(guān)［9］，在COVID-19疫情早期階段，從5名患者身上獲得的全基因組序列與SARS-CoV序列相似性為79.6%［2］。盡管遺傳證據(jù)表明，SARS-CoV-2是一種可能起源于動物的自然病毒，但目前尚不清楚這種病毒首次感染人類的時間及地點［10］。SARSCoV-2基因編碼的蛋白包括S、M、E白和N蛋白4種主要結(jié)構(gòu)蛋白。S蛋白的同源三聚體構(gòu)成病毒表面的棘突，在病毒的附著、融合和侵入中起關(guān)鍵作用，也是目前開發(fā)疫苗及治療的靶點［11］。此外，研究表明，SARS-CoV-2 S蛋白的受體結(jié)合域（receptor binding domain，RBD）與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE2）受體的結(jié)合能力比SARS-CoV高10~20倍，這可能使SARS-CoV-2比SARS-CoV具有更高的傳染性［12］。與SARS-CoV和MERS-CoV相比，SARS-CoV-2的傳播速度似乎更快［13］，且不斷發(fā)現(xiàn)新的傳染性更強的病毒突變株，COVID-19的預(yù)防控制顯然比SARS-CoV和MERSCoV難度更大。

2 疫苗毒種與細(xì)胞基質(zhì)選擇

滅活疫苗研制的首要任務(wù)是篩選毒株。理想情況下，應(yīng)收集不同地區(qū)不同來源的病毒分離株，比較各種病毒株在遺傳穩(wěn)定性、免疫原性、交叉保護性以及細(xì)胞中的傳代適應(yīng)性等，從中選擇免疫原性強、交叉保護范圍廣、能穩(wěn)定傳代的毒株用于滅活疫苗生產(chǎn)。WANG等［14］從3名COVID-19住院患者中分離出3株SARS-CoV-2毒株HB02、CQ01和QD01，其中HB02株在Vero細(xì)胞中復(fù)制最為理想，產(chǎn)毒量最高。全基因組序列比較發(fā)現(xiàn)，HB02株與其他毒株具有同源性，主要保護抗原（S蛋白）同源性為100%，表明其對各種SARS-CoV-2毒株具有廣泛的保護作用。因此，北京生物使用HB02株進行COVID-19滅活疫苗的生產(chǎn)。武漢生物則選擇從武漢金銀潭醫(yī)院1名肺炎患者支氣管肺泡灌洗液中分離出的SARS-CoV-2原始毒株（WIV04）作為滅活疫苗毒種，并在Vero E6細(xì)胞中進行分離培養(yǎng)［15-17］。科興生物從11名住院患者（5名來自中國，3名來自意大利，1名來自瑞士，1名來自英國，1名來自西班牙）支氣管肺泡灌洗液樣本中分離出SARS-CoV-2，并選擇具有良好遺傳穩(wěn)定性的CN2株作為疫苗生產(chǎn)毒株［18］。印度Bharat Biotech公司從COVID-19患者分離出包含D614G突變的病毒株NIV-2020-770用于研發(fā)滅活疫苗［19-20］。

其次，選擇易感、穩(wěn)定傳代、高效增殖及具有遺傳穩(wěn)定性的細(xì)胞基質(zhì)也是研發(fā)滅活疫苗的關(guān)鍵因素。常用于病毒疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)有雞胚成纖維細(xì)胞、Vero細(xì)胞、二倍體細(xì)胞、MDCK細(xì)胞及CHO細(xì)胞等。WANG等［21］評估了常用于分離培養(yǎng)病毒的細(xì)胞系對SARS-CoV-2的敏感性，發(fā)現(xiàn)猴腎細(xì)胞最敏感，包括來自于非洲綠猴腎的Vero細(xì)胞系、Vero76細(xì)胞系和BGMK細(xì)胞系，以及來自恒河猴腎的LLCMK2細(xì)胞系、RhMK細(xì)胞系，但來自人類、狗、貓、鼠和雞的多種細(xì)胞類型對SARS-CoV-2不敏感，同時最常用于流感病毒研究的MDCK細(xì)胞對SARS-CoV-2也不敏感。武漢生物、北京生物、科興生物以及印度Bharat Biotech公司等眾多企業(yè)生產(chǎn)的COVID-19滅活疫苗均選擇Vero細(xì)胞作為傳代培養(yǎng)細(xì)胞。WHO已對Vero細(xì)胞進行了疫苗生產(chǎn)認(rèn)證［14］。

3 滅活疫苗的生產(chǎn)工藝

全病毒滅活疫苗的生產(chǎn)工藝一般包括病毒擴增、病毒滅活和分離純化3個主要階段。武漢生物制備COVID-19滅活疫苗的主要步驟包括：使用SARS-CoV-2 WIV04株在Vero細(xì)胞中進行傳代培養(yǎng)，在細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect，CPE）出現(xiàn)的第3~4天收集上清液，采用β-丙內(nèi)酯滅活48 h后進行澄清、超濾，進行第2次β-丙內(nèi)酯滅活后，經(jīng)凝膠層析、離子交換層析、除菌過濾后加入氫氧化鋁佐劑制備滅活疫苗［15，17］。北京生物通過將SARSCoV-2 HB02株接種Vero細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、收獲、滅活、澄清、濃縮、純化后，加入氫氧化鋁佐劑制備滅活疫苗［14］。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所（簡稱醫(yī)科院生物所）對收獲的病毒上清液用甲醛進行滅活，色譜法進行純化濃縮，并使用β-丙內(nèi)酯進行二次滅活，再次純化和濃縮制備滅活疫苗［22］。

在過去幾十年中，已經(jīng)研發(fā)出多種用于疫苗生產(chǎn)的培養(yǎng)工藝，包括轉(zhuǎn)瓶、細(xì)胞工廠及生物反應(yīng)器等培養(yǎng)工藝。目前，大多疫苗生產(chǎn)企業(yè)均采用生物反應(yīng)器培養(yǎng)替代傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)瓶或細(xì)胞工廠培養(yǎng)工藝?；谏锓磻?yīng)器的疫苗生產(chǎn)的主要優(yōu)勢包括：使用封閉系統(tǒng)，可有效避免污染風(fēng)險；生產(chǎn)流程及過程自動化程度高，可減少人為操作因素的影響，提高疫苗各批次的一致性和穩(wěn)定性；通過監(jiān)測培養(yǎng)參數(shù)控制細(xì)胞生長和病毒復(fù)制來實現(xiàn)產(chǎn)量最大化，降低了運營成本及生產(chǎn)時間［23］?；谏锓磻?yīng)器培養(yǎng)一般分為微載體、片狀載體及懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。北京生物研發(fā)了自主知識產(chǎn)權(quán)的蜂窩交聯(lián)片狀載體，其相同培養(yǎng)體積的細(xì)胞密度較微載體高10余倍，極大提高了COVID-19滅活疫苗的產(chǎn)量［14］。

滅活疫苗的滅活方法包括化學(xué)滅活或物理滅活，前者如β-丙內(nèi)酯、乙烯亞胺和甲醛滅活，后者如γ輻射、紫外光和加熱滅活。這些方法的作用機制主要是通過共價修飾、交聯(lián)、氧化和結(jié)構(gòu)改變對病原體的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)構(gòu)進行化學(xué)修飾，使處理的病毒不能感染靶細(xì)胞或在機體內(nèi)復(fù)制［24］。甲醛和β-丙內(nèi)酯作為最常用的滅活劑，廣泛用于人用滅活疫苗的生產(chǎn)，如對脊髓灰質(zhì)炎病毒、流感病毒等均顯示出較好的滅活效果。烷化劑和雙氧水也可用于病毒滅活［25］，但目前仍處于臨床前研究階段。目前報道的SARS-CoV-2全病毒滅活疫苗最常見使用 β-丙內(nèi)酯進行滅活［15，18］，武漢生物和科興生物生產(chǎn)的疫苗還采用了二次β-丙內(nèi)酯滅活策略；醫(yī)科院生物所生產(chǎn)的疫苗先經(jīng)甲醛滅活后，再采用β-丙內(nèi)酯進行第2次滅活策略。RAGAN等［24］報道了一種新的滅活方法來制備滅活疫苗，即使用核黃素結(jié)合紫外照射來改變病毒核酸結(jié)構(gòu)，該方法制備的SARS-CoV-2全病毒滅活疫苗在倉鼠的攻毒模型中具有保護作用。與常規(guī)用于滅活疫苗生產(chǎn)的β-丙內(nèi)酯滅活劑不同的是，該方法中使用的核黃素具有良好的安全性，并且沒有致突變性和致癌性，同時避免了烷基化、交聯(lián)和共價修飾［26］。KARAKUS等［27］使用γ射線滅活的SARS-CoV-2疫苗（OZG-3861-01），在BALB／c小鼠體內(nèi)可誘導(dǎo)具有中和能力的抗體產(chǎn)生，并且未觀察到抗體依賴增強效應(yīng)（antibody dependent enhancement，ADE）。佐劑的應(yīng)用對滅活疫苗也非常重要，其能增強機體對抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型，減少抗原用量。目前至少10家企業(yè)計劃研發(fā)含佐劑的COVID-19疫苗，包括葛蘭素史克公司的AS03、Seqirus公司的MF59和Dynavax公司的CpG 1018［28］，而幾種候選滅活疫苗均選擇較為常用的氫氧化鋁作為佐劑。見表1。

表1 COVID-19候選滅活疫苗制備的比較Tab.1 Preparations of candidate inactivated COVID-19 vaccines

滅活病毒收獲液通常除含有病毒顆粒外，還含有宿主細(xì)胞及殘留蛋白／核酸、培養(yǎng)基成分和引入的外來物質(zhì)如滅活劑等。如果疫苗制劑中含有雜質(zhì)過多，則極有可能增加過敏等不良反應(yīng)風(fēng)險。因此，在生產(chǎn)滅活疫苗時需要進行純化。滅活疫苗通常采用的純化工藝包括超濾、層析、過濾等，病毒是否被徹底滅活是生產(chǎn)工藝研究的重點，需對滅活條件進行充分的研究及驗證，同時應(yīng)考慮滅活程序?qū)σ呙缈乖?、效價等的影響。

4 臨床前研究

疫苗的臨床前研究多基于動物模型評價免疫原性及安全性。小型動物如大鼠、小鼠、家兔和倉鼠可用于對候選疫苗的安全性、免疫原性和劑量進行初步評估，而大型動物尤其是非人靈長類動物（nonhuman primates，NHPs）則是評估疫苗保護效力的理想模型，其中恒河猴是公認(rèn)為研發(fā)SARS-CoV-2疫苗的理想動物模型［30］。幾種候選滅活疫苗的NHPs模型見表2。SARS-CoV和MERS-CoV的中和抗體具有保護作用，但也有研究發(fā)現(xiàn)SARS-CoV和MERSCoV存在ADE現(xiàn)象［31-32］。ADE是一種非中和抗體與病毒結(jié)合，通過Fcγ受體或補體受體介導(dǎo)的導(dǎo)致疾病增強現(xiàn)象［32-34］。有研究認(rèn)為冠狀病毒的S和N蛋白具有能夠引起ADE的抗原表位，同為冠狀病毒的SARS-CoV-2是否引起ADE也備受關(guān)注［35-36］。臨床前研究的安全性評價一般在動物模型中進行免疫后攻毒試驗，檢測動物保護效力以及有無抗體介導(dǎo)的免疫病理反應(yīng)。目前4種類型的COVID-19候選疫苗包括滅活疫苗、mRNA疫苗、蛋白亞單位疫苗和腺病毒載體疫苗的動物模型中均未觀察到明顯的免疫病理損傷或ADE現(xiàn)象［14-15，18，29，37-43］，見表2。雖然這4種類型的候選疫苗在接種和SARS-CoV-2攻擊動物的肺中未顯示免疫病理學(xué)變化的證據(jù)，但在人體身上是否產(chǎn)生免疫病例損傷有待進一步研究。

表2 COVID-19滅活疫苗的NHPs模型試驗比較Tab.2 NHIPs model tests on inactivated COVID-19 vaccine

5 臨床研究

一種新疫苗的研發(fā)周期較長，需經(jīng)過臨床前的動物試驗以及嚴(yán)格的臨床試驗，這對于保證疫苗的安全性及有效性是必要的。目前，全球范圍內(nèi)至少有24種COVID-19滅活疫苗在研發(fā)，其中有15種進入臨床研究階段［5］，見表3。在COVID-19滅活疫苗研發(fā)進程中，中國處于全球領(lǐng)先地位，在獲得緊急使用或附條件上市的4種COVID-19滅活疫苗中，中國占據(jù)其中3種，見表4。

表3 全球進入臨床階段的COVID-19候選滅活疫苗Tab.3 Candidate inactivated COVID-19 vaccines in clinical trials worldwide

5.1 北京生物COVI D-19滅活疫苗 國家藥品監(jiān)督管理局于2020年12月30日附條件批準(zhǔn)了北京生物研發(fā)的COVID-19滅活疫苗（BBIBP-CorV）的注冊申請，在此之前，阿聯(lián)酋和巴林已相繼批準(zhǔn)該疫苗注冊上市［44］。Ⅰ／Ⅱ期臨床試驗在中國河南省進行，其中Ⅰ期納入18~80歲健康人群共192人，Ⅱ期納入18~59歲健康人群共448人，BBIBP-CorV在兩個年齡組的所有試驗劑量下安全性和耐受性均良好，在第42天，所有疫苗接種者體內(nèi)均誘導(dǎo)了針對SARS-CoV-2的體液免疫應(yīng)答［45-46］。Ⅲ期臨床試驗為隨機、雙盲、安慰劑對照的多中心臨床研究，13 086人完成了2劑次注射，自第2劑接種后14 d，累計確診21例有效病例，疫苗保護效力為78.1%。接種后7 d內(nèi)嚴(yán)重不良事件59例，報告發(fā)生率為0.4%，嚴(yán)重不良事件發(fā)生率與僅接種氫氧化鋁佐劑組（嚴(yán)重不良發(fā)生事件78例，報告發(fā)生率0.6%）相似，顯示出該疫苗良好的安全性［47］。目前，該研究仍在進行中，長期保護性和安全性仍在評估中。

5.2 科興生物COVI D-19滅活疫苗 科興生物研發(fā)的COVID-19滅活疫苗克爾來福?（CoronaVac），于2021年2月6日經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)附條件上市，目前，在32個國家授權(quán)緊急使用［48］。該疫苗Ⅰ期和Ⅱ期臨床試驗同時進行，針對不同年齡健康人群分別開展臨床試驗，18~59歲健康人群納入744名志愿者，60歲以上健康人群納入422名志愿者。該公司于2020年6月14日進行Ⅰ／Ⅱ期臨床試驗揭盲，初步結(jié)果顯示，CoronaVac具有良好的安全性和免疫原性［49］。Ⅲ期臨床試驗中期結(jié)果表明，該疫苗具有良好的保護效力，巴西、土耳其、智利還提供了針對住院病例的保護效力臨床數(shù)據(jù)。該疫苗對巴西和土耳其住院病例的保護效力均為100%；對智利住院病例的保護效力為85%。在巴西，CoronaVac預(yù)防癥狀性感染有50.4%的保護效力，預(yù)防嚴(yán)重病例有100%的保護效力；安全性方面，接種該疫苗后大多數(shù)不良事件為輕度 ／中度［48，50］。

5.3 武漢生物COVI D-19滅活疫苗 國家藥品監(jiān)督管理局于2021年2月25日批準(zhǔn)了該疫苗附條件上市申請。該疫苗是全球首個進入臨床試驗的SARSCov-2滅活疫苗。Ⅰ／Ⅱ期臨床試驗是在18～59歲健康成人中進行的一項隨機、雙盲、安慰劑對照試驗，Ⅰ期和Ⅱ期臨床試驗分別納入96和224名志愿者。結(jié)果顯示，不同劑量疫苗組均誘導(dǎo)了高滴度抗體，2劑接種后中和抗體陽性率達(dá)100%，無嚴(yán)重不良事件發(fā)生［17］。在阿聯(lián)酋、巴林、秘魯、摩洛哥、阿根廷等國家進行的Ⅲ期臨床試驗中，疫苗組完成第2劑注射的志愿者共13 066人，自第2劑接種后14 d，累計確診26例有效病例；2針免疫程序接種后，中和抗體陽轉(zhuǎn)率超過99%，針對由COVID-19的保護效力為72.8%。接種后7 d內(nèi)嚴(yán)重不良事件64例，報告發(fā)生率為0.5%，不良事件發(fā)生率與對照組無顯著差異,顯示出該疫苗良好的安全性［47］。

5.4 醫(yī)科院生物所COVI D-19滅活疫苗 該疫苗于2020年5月15日正式啟動Ⅰ期和Ⅱ期臨床試驗。在Ⅰ／Ⅱ期臨床試驗評估了該疫苗在18~59歲健康成人的安全性及免疫原性，Ⅰ期和Ⅱ期分別招募192和750名志愿者［51-52］。Ⅰ期臨床試驗數(shù)據(jù)顯示，2劑次接種后，不同劑量組血清轉(zhuǎn)換率均超過87.5%，未觀察到與免疫病理相關(guān)的細(xì)胞因子和免疫細(xì)胞［53］。Ⅱ期臨床試驗數(shù)據(jù)顯示，不同試驗組內(nèi)檢出高滴度的中和抗體和抗S／N蛋白抗體，在研究期間未報告與疫苗接種相關(guān)的嚴(yán)重不良事件［52］。目前，該種疫苗正在進行Ⅲ期臨床試驗［5］。

5.5 康泰生物COVI D-19滅活疫苗 該疫苗由深圳康泰生物制品有限公司（簡稱康泰生物）和北京民海生物技術(shù)有限公司研發(fā)的一款SARS-CoV-2滅活疫苗（KCONVAC）。Ⅰ／Ⅱ期臨床試驗均在18~59歲健康成年人中進行，Ⅰ期和Ⅱ期分別招募60和500名志愿者。在Ⅰ期和Ⅱ期臨床試驗中，除了報道的1例與疫苗無關(guān)的嚴(yán)重不良事件外，未有其他嚴(yán)重不良反應(yīng)報道，2劑次后，耐受性良好，能夠在健康成人中誘導(dǎo)強烈的的免疫反應(yīng)，目前正在進行Ⅲ期臨床試驗［54］。

5.6 印度Bharat Biotech公司COVI D-19滅活疫苗印度Bharat Biotech公司開發(fā)的COVID-19滅活疫苗（BBV152）是進入臨床試驗的第5種滅活疫苗［55］，也已被批準(zhǔn)在印度緊急使用。在印度11家醫(yī)院進行雙盲、多中心、隨機、對照的Ⅰ期臨床試驗，排除SARS-CoV-2核酸和／或血清學(xué)檢測陽性的個體，共納入375名18~55歲健康成人；Ⅰ期臨床試驗結(jié)果顯示，BBV152具有可接受的安全性和較強的免疫反應(yīng)，可產(chǎn)生較高中和抗體滴度，期間報告了1例與疫苗無關(guān)的病毒性肺炎的嚴(yán)重不良事件［19，56］。Ⅱ期臨床試驗受種人群擴大到12~65歲健康人群，共380名志愿者參與；Ⅱ期臨床試驗結(jié)果顯示了良好的免疫原性、安全性以及強烈的體液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，研究中未報告嚴(yán)重的不良事件［56］。

5.7 其他COVI D-19滅活疫苗 除了上述COVID-19候選滅活疫苗，全球還有多款滅活疫苗正在開發(fā)中，包括哈薩克斯坦生物安全問題研究所、法國Valneva公司、伊朗Shifa Pharmed Industrial公司、土耳其Erciyes大學(xué)、泰國政府制藥組織、日本KM Biologics公司、伊朗防御創(chuàng)新與研究組織等單位研發(fā)的COVID-19滅活疫苗相繼進入臨床研究階段，見表4。

表4 緊急使用或附條件上市的COVID-19滅活疫苗Tab.4 Inactivated COVID-19 vaccines for emergency use or conditional marketing

6 對突變株的保護作用

隨著大流行持續(xù)蔓延，出現(xiàn)了多種SARS-CoV-2變異株。值得注意的是，最近出現(xiàn)的SARS-CoV-2變異株可能會影響疫苗保護效力，而引發(fā)全球公眾擔(dān)憂。2020年首次在美國發(fā)現(xiàn)的包含D614G的突變株，顯著增強了病毒傳播能力，并逐漸在流行病毒株中占據(jù)主導(dǎo)地位［57］。最近從南非分離的B.1.351變突株在D614G株上引入了進一步突變，這些突變可逃避COVID-19康復(fù)者以及一些疫苗受試者的血清中和作用［58］。據(jù)報道，諾華（Novartis）、強生（Johnson）和阿斯利康（AstraZeneca）生產(chǎn)的COVID-19疫苗針對B.1.351變突株的保護作用均有下降［59］。在南非的一項Ⅲ期臨床試驗中，發(fā)現(xiàn)B.1.351突變株顯著降低了SARS-CoV-2 S蛋白疫苗的保護效力［14］。突變株的傳播給通過接種疫苗預(yù)防及控制SARSCoV-2大流行帶來了巨大挑戰(zhàn)，相繼出現(xiàn)的突變株是否影響滅活疫苗的效力同樣令人擔(dān)憂。

HUANG等［60］評估了COVID-19滅活疫苗BBIBPCorV對突變株的影響，與原始SARS-CoV-2和目前流行的D614G病毒株相比，BBIBP-CorV在很大程度上保留了對B.1.351突變株的中和作用，這些數(shù)據(jù)表明，B.1.351變突株不能逃脫滅活疫苗誘導(dǎo)的免疫。最近CHEN等［61］評估了COVID-19滅活疫苗CoronaVac接種者血清對B.1.1.7，B.1.351，P.1，B.1.429和B.1.526突變株的中和活性，共研究了93份CoronaVac接種者血清，發(fā)現(xiàn)76份（82%）血清樣本能夠中和野生型假病毒，接種后血清中和D614G、B.1.1.7和B.1.429突變株假病毒同樣有效；然而對B.1.526、P.1、B1.351血清中和效率顯著降低，對B.1.526血清中和效率降低了4.03倍（95%CI 3.26~4.80），對P.1降低了3.92倍（95%CI 3.18~4.65），對最受關(guān)注的南非突變株B1.351降低了5.27倍（95%CI 4.19~6.34）；此外，僅有一小部分疫苗接種后血清能夠中和B.1.526（26%）、P.1（34%）和B.1.351（5%）。

7 COVID-19滅活疫苗的應(yīng)用及面臨挑戰(zhàn)

在COVID-19疫苗研發(fā)中，疫苗企業(yè)同步開展生產(chǎn)車間建設(shè)，對緩解疫苗安全量產(chǎn)的壓力非常必要。國藥集團中國生物在北京和武漢已經(jīng)建立或正在擴建高等級安全生產(chǎn)車間，預(yù)計COVID-19滅活疫苗年產(chǎn)量將超過40億劑［44，62］。2021年5月7日，WHO總干事譚德塞宣布，北京生物研發(fā)生產(chǎn)的COVID-19滅活疫苗獲得緊急使用授權(quán)，納入全球“緊急使用清單”，為實現(xiàn)COVID-19疫苗作為全球公共產(chǎn)品特別是在發(fā)展中國家的可及性和可負(fù)擔(dān)性邁出了重要一步。mRNA疫苗臨床研究的成功，將是疫苗制備技術(shù)的歷史性、革命性突破，但mRNA疫苗本身不穩(wěn)定，需低溫和超低溫運輸及儲存，而滅活疫苗4℃條件即能滿足儲存及運輸。常規(guī)、成熟技術(shù)、利用現(xiàn)有儲運接種系統(tǒng)的滅活疫苗，可及性強，特別適合分發(fā)于發(fā)展中國家。

多種滅活疫苗的開發(fā)及應(yīng)用，為日趨嚴(yán)峻的COVID-19疫情防控帶來希望。滅活疫苗工藝成熟，免疫原性穩(wěn)定，安全性良好，可及性高，但一些關(guān)于滅活疫苗的潛在挑戰(zhàn)也備受關(guān)注：①有報道COVID-19在老年人和其他疾病患者的死亡率更高［63］，因此滅活疫苗在老年、兒童、基礎(chǔ)性疾病等低免疫力人群的保護效力備受關(guān)注；②隨著多種SARS-CoV-2突變株的出現(xiàn)，滅活疫苗能否對突變株具有有效的保護也備受關(guān)注；③COVID-19康復(fù)期患者血清中產(chǎn)生中和抗體反應(yīng)，但抗體水平在一定時間內(nèi)達(dá)到峰值后逐漸降低［64］，提示疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性免疫反應(yīng)可能隨時間延長而減弱，面對COVID-19疫情并未減弱的情況下，滅活疫苗的長期有效性有待進一步研究；④滅活疫苗的安全性以及安全生產(chǎn)也至關(guān)重要，2004年有報道在滅活SARS-CoV后第3天檢測出活病毒［65］，提示COVID-19滅活疫苗應(yīng)特別需要關(guān)注滅活效果；⑤目前已有多種病毒被觀察到ADE現(xiàn)象，包括登革病毒、西尼羅河病毒、人類免疫缺陷病毒、埃博拉病毒等［66］，COVID-19滅活疫苗是否在人體引起ADE也有待進一步研究；⑥滅活疫苗通常表現(xiàn)出中等的免疫原性，需要應(yīng)用佐劑來增強免疫原性，但佐劑的應(yīng)用通常也增加了不良反應(yīng)的風(fēng)險；⑦滅活疫苗相對安全穩(wěn)定，但接種1劑通常不產(chǎn)生具有保護作用的免疫反應(yīng)，且免疫效果維持時間較短，需多次接種和加強免疫，目前進入臨床階段COVID-19滅活疫苗均采用2劑接種策略，COVID-19滅活疫苗最終需要接種幾劑次也有待于進一步研究。