吳云輝 陸許貞 王柯尹

原發(fā)性肝癌（PHC）簡稱肝癌，其發(fā)病率和死亡率居我國惡性腫瘤的第二位，其中肝細胞癌（HCC）約占90%，具有侵襲性強、生長速度快、轉(zhuǎn)移范圍廣等特性，是其臨床治療效果差和死亡率高的主要原因［1］。研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶-7（MMP-7）等基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）通過降解細胞外基質(zhì)（ECM）參與癌細胞的浸潤、生長和遠處轉(zhuǎn)移等過程，是肝癌等惡性腫瘤發(fā)展的必經(jīng)階段［2］。近年來，中醫(yī)臨床治療癌癥的開展得到了醫(yī)學界的廣泛認可，已知槐杞黃顆?？梢种聘伟┘毎蠱MP-7等基質(zhì)金屬蛋白酶的表達，進而降低腫瘤細胞的遷移和侵襲力，然而臨床研究資料目前尚缺乏［3］。本研究旨在觀察肝癌患者口服槐杞黃顆粒治療前后的血清中MMP-7水平變化，通過隨訪并進行生存分析以明確其治療效果。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2018年1月至2018年12月本院收治的肝癌患者90例。（1）納入標準：①經(jīng)臨床和病理確診為肝癌，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期，預計生存期≥3個月；②存在手術禁忌或患者及家屬不愿意接受手術。均行TACE介入治療，未行放化療或其他介入治療；③自愿簽署知情同意書。（2）排除標準：①合并嚴重心、肝、腎、肺等臟器疾??；②合并其他原發(fā)惡性腫瘤；③各種因素導致資料無法收集的患者。隨機分為常規(guī)治療組和觀察組，每組各45例，另同期選取健康體檢者45例作為正常對照組。常規(guī)治療組，男31例、女14例；年齡（52.11±13.20）歲；觀察組，男24例、女21例，年齡（53.58±17.97）歲；對照組，男28例、女17例，年齡（51.16±13.17）歲。三組的性別、年齡等資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。觀察組和常規(guī)治療組以影像學發(fā)現(xiàn)肝占位病灶開始到行TACE術前的病程分別為33.00（43.5）d和31.00（36.50）d，差異無統(tǒng)計學意義（Z=0.827，P=0.408）。觀察組的病因包括乙型肝炎病毒感染31例（68.89%），血吸蟲病14例（31.11%）；38例（84.44%）合并肝硬化；臨床分期Ⅲ期12例（26.67%），Ⅳ期33例（73.33%）。常規(guī)治療組的病因包括乙肝病毒感染37例（82.22%），血吸蟲病8例（17.78%）；35例合并肝硬化（77.78%）；臨床分期Ⅲ期17例（37.78%），Ⅳ期28例（62.22%）；兩組肝癌患者的病因、合并癥及臨床分期構成比較，差異均無統(tǒng)計學（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準（2017-107）。

1.2 治療方法 TACE術后，常規(guī)治療組給予護肝等對癥處理，觀察組在常規(guī)治療組的基礎上加用槐杞黃顆粒（規(guī)格：10 g/袋，國藥準字B20020074，廠家：啟東蓋天力藥業(yè)有限公司），2袋/次，2次/d，連續(xù)口服3個月。

1.3 血清MMP-7檢測 所有受試者分別于TACE治療的前1日、觀察組治療結束的次日空腹采集全血 5～10 ml，置于分離膠-促凝管中，4 ℃低溫離心機以2000 r/min離心10 min，收集血清立即儲存于-70 ℃冰箱。提前20 min從冰箱取出試劑盒和待測樣本血清，室溫下放置至樣本復溶，采用ELISA法檢測MMP-7（試劑盒購自美國R&D公司），檢測程序嚴格按說明書操作，采用全自動定量酶標儀（購自芬蘭Thermo公司）讀取吸光度值。

1.4 觀察隨訪 電話或門診隨訪至2020年7月，了解患者生存情況。生存時間為從TACE術后日期至因肝癌相關死亡日期或隨訪終點。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件。計量資料符合正態(tài)分布以（）表示，方差齊組間比較采用t檢驗；多樣本比較采用單因素方差分析，進一步比較采用LSD-t檢驗；治療前后血清MMP-7水平比較，采用兩因素重復測量的方差分析；偏態(tài)分布則以［M（QR）］表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。計數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗。采用Kaplan.Meier法繪制生存曲線并計算生存率，Log.rank檢驗進行生存分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 治療前三組血清MMP-7水平比較 常規(guī)治療組和觀察組的血清MMP-7水平分別為（12.072±4.151）ng/ml和（11.679±4.253）ng/ml，明顯高于健康對照組（1.856±0.772）ng/ml，差異均有統(tǒng)計學意義（t=13.465，14.003，P＜0.001）；常規(guī)治療組和觀察組比較，差異無統(tǒng)計學意義（t=0.538，P=0.591）。

2.2 治療前后常規(guī)治療組和觀察組血清MMP-7水平比較 見表1。

表1 肝癌患者在治療前后MMP-7水平變化比較［ng/ml，（）］

表1 肝癌患者在治療前后MMP-7水平變化比較［ng/ml，（）］

組別 治療前 治療后 F值 P值常規(guī)治療組 12.072±4.151 11.663±4.329 3.010 0.090觀察組 11.679±4.253 9.461±3.907* 53.710 ＜0.001 F值 0.268 9.496 P值 0.607 0.004

2.3 隨訪情況與生存分析 90例患者均獲得隨訪，隨訪時間為4～29個月，中位隨訪時間為13個月；常規(guī)治療組刪失病例1例，為隨訪結束時未死亡病例，該組中位生存時間為11個月，第1、2年的生存率分別為37.78%和23.53%；觀察組刪失病例5例，其中4例為隨訪結束時未死亡病例，1例在隨訪18個月時退出研究為脫落病例，其余均結束隨訪，中位生存時間為16個月，第1、2年的生存率分別為64.44%和44.83%；兩組患者的生存率比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.095，P=0.024）。生存曲線見圖1。

圖 1 肝癌患者總體生存曲線

3 討論

肝癌浸潤與轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，其中腫瘤微環(huán)境中ECM被降解，形成轉(zhuǎn)移灶是關鍵的步驟［4］。MMPs是一族活性依賴于鋅離子和鈣離子的內(nèi)源性蛋白水解酶，近年來研究發(fā)現(xiàn)MMPs與肝癌惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移關系密切［5］。MMP-7又稱基質(zhì)溶解素，具有廣泛的作用底物，是MMPs主要成員之一，能降解 Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白（FN）、層粘連蛋白（LN）和可溶性彈性蛋白等多種ECM，通過滅活а1抗胰蛋白酶來激活其他MMPs，進一步降解ECM及基底膜，破壞腫瘤入侵的自然屏障，還能調(diào)節(jié)VEGF受體等影響內(nèi)皮細胞的活力參與腫瘤血管新生［6］，進而促進腫瘤的浸潤、生長和轉(zhuǎn)移。黎爵等［7］研究表明，肝癌、胰腺癌、胃癌、結腸癌等多種惡性腫瘤中都有MMP-7高表達，并與病情進展密切相關。本研究結果顯示，兩組肝癌患者的血清 MMP-7 水平明顯高于正常對照組，提示血清MMP-7升高可能參與肝癌的進展。

槐杞黃顆粒是由槐耳菌質(zhì)配伍中藥枸杞子、黃精而制成的顆粒劑。枸杞子補肝明目，可促進肝損傷的修復和肝細胞再生；黃精補氣而兼潤養(yǎng)，抗疲勞抗氧化，具有益氣滋陰之功效；槐耳菌質(zhì)是槐杞黃顆粒主要成分，歷代本草書籍記載槐耳有“治風”“破血”“益力”之功效，具有提高機體免疫力等功能［8］。其他惡性腫瘤既往研究顯示，槐耳能通過抑制MMPs表達而降低腫瘤細胞的遷移和侵襲力，將槐耳顆粒和輔助化療聯(lián)合應用，乳腺癌患者總生存率顯著提高，預后明顯改善［9］。推測血清中的MMP-7等水平下降與TIMPs抑制MMPs的活性相關，從而削弱了腫瘤細胞的遷移能力［10］。本研究觀察組患者在常規(guī)治療的基礎上口服槐杞黃顆粒，治療后的血清MMP-7水平明顯下降，與治療前及常規(guī)治療組治療后比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），提示槐杞黃顆粒也能降低肝癌患者的MMP-7表達水平。經(jīng)隨訪，觀察組患者的中位生存時間也明顯長于常規(guī)治療組對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），可推測聯(lián)合槐杞黃顆粒治療可延長患者的生存時間。肝癌的常規(guī)治療，目前國內(nèi)外主要采用手術、放療、介入治療，但效果不太理想，TACE殺死大部分腫瘤中央部分的癌組織，術后腫瘤完全壞死率僅為0%～4.8%［11］，在取得一定療效的同時安全性也較大，因此選擇TACE術治療的肝癌患者逐漸增多。本研究為減少偏倚，選用TACE術作為常規(guī)治療，其它常規(guī)治療方案聯(lián)合槐杞黃顆粒治療的相關研究今后將擴大病例數(shù)量進一步開展。

綜上，槐杞黃顆?？赡芡ㄟ^降低MMP-7水平，進而影響通過MMP-7激活的多種MMPs成員在肝癌細胞的表達，從而降低肝癌的浸潤轉(zhuǎn)移能力。提示聯(lián)合槐杞黃顆粒治療可以起到抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，可能將在肝癌發(fā)病中扮演重要角色，成為防治肝癌的選擇之一。