賈 喆，張肖瑕，劉欣妍，許 艷，宋 茹

（浙江海洋大學(xué)食品與藥學(xué)學(xué)院,浙江舟山 316022）

中華管鞭蝦（Solenocera crassicornis）俗名紅蝦，外殼呈粉紅色，廣泛分布于我國(guó)黃海、南海及日本、印度尼西亞等海域，屬于一年生底棲甲殼動(dòng)物[1]。中華管鞭蝦營(yíng)養(yǎng)豐富、味甜鮮美，是我國(guó)重要的海捕蝦、經(jīng)濟(jì)蝦種類之一，大部分加工成蝦仁出口。但是，中華管鞭蝦在加工過(guò)程中產(chǎn)生30%～50%包括蝦頭、蝦殼等在內(nèi)的副產(chǎn)物同樣含有大量的營(yíng)養(yǎng)成分，而這些副產(chǎn)物目前主要被用作低值飼料原料，深加工利用還較少，未充分挖掘其中的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[2]。

蝦青素（astaxanthin，Asta）化學(xué)名稱3,3′-二羥基-4,4′-二酮基-β,β′-胡蘿卜素[3?5]，是一種橙紅色酮式類胡蘿卜素。蝦青素具有抗氧化、抗腫瘤、抗癌等多種生理功效[4?6]，其抗氧化性比β-胡蘿卜素及葉黃素強(qiáng)10 倍，比天然維生素E強(qiáng)100 倍[7?8]。因此，蝦青素在食品添加劑、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。蝦青素分子含有兩個(gè)六元環(huán)結(jié)構(gòu)，六元環(huán)上的羥基能夠與脂肪酸結(jié)合形成蝦青素脂肪酸酯（Astaxanthin esters），根據(jù)結(jié)合脂肪酸數(shù)量不同，又可以分為蝦青素單酯（Astaxanthin monoesters）和蝦青素雙酯（Astaxanthin diesters）[9?10]。同時(shí)，由于六元環(huán)結(jié)構(gòu)中兩個(gè)手性中心的存在，可以使蝦青素產(chǎn)生三種光學(xué)異構(gòu)體，即左旋（3S,3′S）、內(nèi)消旋（3S,3′R）和右旋（3R,3′R）[11?12]。蝦青素可以用化學(xué)法合成，也可以直接從藻類、酵母和甲殼類動(dòng)物中提取天然蝦青素。化學(xué)合成蝦青素的抗氧化活性遠(yuǎn)低于天然蝦青素，如：自由基消除能力比天然蝦青素低20 倍，淬滅單線態(tài)氧能力比天然蝦青素低50 倍[13]。此外，化學(xué)合成的蝦青素不可避免會(huì)有化學(xué)雜質(zhì)殘留問(wèn)題，因此在食品中使用會(huì)受到一定程度限制[14?15]。

中華管鞭蝦的蝦青素提取物有顯著的抗氧化活性，且以酯型蝦青素為主[16?17]。因?yàn)橛坞x型蝦青素化學(xué)結(jié)構(gòu)比酯型蝦青素簡(jiǎn)單，所以易通過(guò)一些修飾改性技術(shù)制備天然蝦青素高級(jí)產(chǎn)物[18?19]。蝦青素酯類經(jīng)皂化或酯酶水解轉(zhuǎn)化為游離型蝦青素，其中酶水解法所得副產(chǎn)物少，但是成本高。而皂化法需要嚴(yán)格控制皂化時(shí)間，否則蝦青素會(huì)發(fā)生嚴(yán)重降解。Su等[20]報(bào)道采用低溫皂化法將酯型蝦青素轉(zhuǎn)化為游離型蝦青素，經(jīng)低溫皂化后的蝦青素降解率低，且副產(chǎn)物生成量少。本研究以中華管鞭蝦的蝦殼為原料，采用低溫皂化法轉(zhuǎn)化蝦青素提取物中酯型蝦青素，系統(tǒng)研究皂化時(shí)間對(duì)蝦青素總量、抗氧化活性、游離型和酯型蝦青素相對(duì)含量和蝦青素光學(xué)異構(gòu)體組成影響，旨在為中華管鞭蝦的蝦青素綜合應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮中華管鞭蝦 華潤(rùn)萬(wàn)家超市；人工合成蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品（3S,3′S:3S,3′R:3R,3′R=1:2:1）純度>99%，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）日本和光純業(yè)株式會(huì)社；羥自由基測(cè)試盒、總抗氧化能力測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所；二氯甲烷、甲醇、甲基叔丁基醚、乙腈 色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；其他試劑 分析純，上海國(guó)藥集團(tuán)。

SSW-600-2S型電熱恒溫水槽 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；UV-5900 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海源喜儀器有限公司；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；SM800 型酶標(biāo)儀 上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司；Agilent 1260 Infinity高效液相色譜儀 德國(guó)安捷倫科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蝦青素提取 參考文獻(xiàn)[19]并適當(dāng)修改，具體如下：新鮮中華管鞭蝦取殼、破碎，按照1:5（m:v）比例加入無(wú)水乙醇，37 ℃水浴振蕩提取1 h，然后6000×g離心10 min，收集上清液，沉淀重復(fù)提取2 次，合并上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，按1:2（v:v）比例加入石油醚萃取3 次，收集石油醚層，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，避光冷凍干燥24 h，干燥物充氮?dú)猓?20 ℃保藏備用。

1.2.2 皂化處理 參考Su等[20]方法并適當(dāng)修改，具體如下：蝦青素提取物用無(wú)水乙醇復(fù)溶，按4:1（v:v）比例加入0.105 mol/L氫氧化鈉-甲醇溶液，5 ℃水浴下分別皂化0、2、4、6、12 h，按1:2.5（v:v）加入去離子水終止反應(yīng)。石油醚萃取皂化液3 次至基本無(wú)色，合并石油醚層，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，避光冷凍干燥24 h，干燥物充氮?dú)猓?20 ℃保藏備用。

1.2.3 蝦青素濃度測(cè)定 采用齊宇等[21]分光光度法，將凍干的皂化和未皂化蝦青素提取物用無(wú)水乙醇復(fù)溶后，經(jīng)6000×g離心10 min，取上清液測(cè)定477 nm下吸光值（y），根據(jù)蝦青素標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0947x+0.0108（R2=0.9926）計(jì)算樣品中蝦青素濃度（μg/mL）。

1.2.4 游離型和酯型蝦青素分析 參考Yuan等[22]方法，具體條件如下：采用ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫25 ℃，流動(dòng)相A為二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=5:85:5.5:4.5（v:v:v:v），流動(dòng)相B為二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=22:28:45.5:4.5（v:v:v:v），進(jìn)樣量10 μL，0～10 min用100%流動(dòng)相A洗脫，10～20 min用0～100%流動(dòng)相B線性洗脫，20～35 min用100%流動(dòng)相B洗脫，35～45 min用100%～0 流動(dòng)相B線性洗脫，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)477 nm。蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品（游離型）（40 μg/mL）在上述條件下洗脫，提取物中游離型與酯型蝦青素相對(duì)濃度按照公式（1）計(jì)算：

式中：C表示游離型、酯型蝦青素相對(duì)濃度，μg/mL；S表示游離型或酯型蝦青素總峰面積，mAU·s；S標(biāo)準(zhǔn)表示蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品總峰面積，mAU·s；C標(biāo)準(zhǔn)表示蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μg/mL。

1.2.5 蝦青素光學(xué)異構(gòu)體分析 采用楊澍[23]高效液相色譜法分析，具體條件如下：采用Chiralpak IC色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），進(jìn)樣體積10 μL，甲基叔丁基醚（MBTE）/乙腈（95:5，v:v）為洗脫劑，流速1.0 mL/min，柱溫35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)477 nm。

人工合成蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品（3S,3′S:3S,3′R:3R,3′R=1:2:1）用無(wú)水乙醇溶解，制備50 μg/mL工作液，然后用無(wú)水乙醇依次稀釋成40、30、20、10、5 μg/mL使用液，采用Chiralpak IC色譜柱分離，以各異構(gòu)體的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x），峰面積（y）為縱坐標(biāo)，將3S,3′S、3S,3′R和3R,3′R蝦青素異構(gòu)體的濃度和峰面積進(jìn)行擬合，得到三種光學(xué)異構(gòu)體回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 蝦青素三種光學(xué)異構(gòu)體回歸方程Table 1 Standard curves of three Asta optical isomers

1.2.6 體外抗氧化性分析

1.2.6.1 清除DPPH自由基能力 參照Bersuder等[24]方法進(jìn)行：將皂化（0～12 h）蝦青素提取物、無(wú)水乙醇和0.02%DPPH乙醇液，按1:4:1（v:v:v）混合，室溫下避光放置60 min，無(wú)水乙醇調(diào)零，測(cè)定517 nm處吸光值（A樣品），樣品對(duì)DPPH自由基清除率按照公式（2）計(jì)算：

式中：A對(duì)照用等體積無(wú)水乙醇代替樣品，A樣品空白用等體積無(wú)水乙醇代替0.02%DPPH乙醇液。

1.2.6.2 羥自由基清除能力及總抗氧化能力 使用羥自由基測(cè)試盒和總抗氧化能力測(cè)試盒測(cè)定，結(jié)果以U/μg蝦青素表示。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用Origin 2018 軟件繪制圖形，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（n=3）表示。采用SPSS19.0 軟件對(duì)組間差異性進(jìn)行分析，P<0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與討論

2.1 皂化時(shí)間對(duì)蝦青素濃度影響

由圖1 可知，中華管鞭蝦的蝦青素提取物在477 nm處有最大吸收峰，皂化處理可以提高提取物的蝦青素濃度，其中皂化2 和4 h時(shí)，總蝦青素濃度分別達(dá)到8.71 和8.79 μg/mL，顯著高于未皂化的蝦青素濃度（P<0.05）。當(dāng)皂化超過(guò)6 h時(shí)，總蝦青素濃度開(kāi)始顯著下降（P<0.05），其中皂化12 h時(shí)，總蝦青素濃度降至4.66 μg/mL。圖1A光譜掃描結(jié)果顯示蝦青素提取物除了在477 nm有蝦青素特征吸收峰外，在280 nm附近吸收峰明顯，說(shuō)明提取物中含有大量蛋白質(zhì)和肽類物質(zhì)。蝦蟹殼中蝦青素通常與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，活體蝦蟹殼表現(xiàn)為藍(lán)紫或青綠色[25]。圖1B中皂化2 和4 h時(shí)，提取物中總蝦青素濃度顯著高于未皂化的蝦青素（P<0.05），推測(cè)與皂化條件下蝦青素結(jié)合蛋白質(zhì)發(fā)生水解，釋放出來(lái)的蝦青素導(dǎo)致提取物中總蝦青素濃度增加有關(guān)。但是，當(dāng)皂化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，蝦青素會(huì)發(fā)生不同程度的降解，結(jié)果導(dǎo)致提取物中總蝦青素濃度降低。Su等[20]報(bào)道了低溫皂化處理會(huì)導(dǎo)致半蝦紅素、蝦紅素及其它降解產(chǎn)物生成量增加，結(jié)果造成總蝦青素濃度降低。本研究采用分光光度法測(cè)定不同皂化時(shí)間下總蝦青素濃度變化，雖然未進(jìn)一步檢測(cè)皂化物中蝦青素降解物的含量變化，但是從圖1B也能夠看出當(dāng)皂化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，總蝦青素濃度急劇降低。

圖1 蝦青素提取物紫外可見(jiàn)光譜掃描及皂化時(shí)間對(duì)總蝦青素濃度影響Fig.1 UV-visible full wavelength scan of Asta extracts and effect of saponification time on the total concentration of Asta

2.2 皂化時(shí)間對(duì)蝦青素體外抗氧化活性影響

不同皂化時(shí)間下，蝦青素提取物的DPPH自由基清除率、羥自由基清除能力和總抗氧化性變化如圖2 所示。圖2A中，皂化2 h時(shí)，蝦青素提取物對(duì)DPPH自由基的清除率最高達(dá)到25.85%，顯著高于未皂化的15.16%（P<0.05）。隨著皂化時(shí)間的延長(zhǎng)，蝦青素提取物清除DPPH自由基能力開(kāi)始急劇下降，其中皂化6 h和12 h時(shí)蝦青素提取物對(duì)DPPH自由基清除率僅為5.75%和1.81%。同樣，皂化時(shí)間對(duì)蝦青素提取物的羥自由基清除能力和總氧化性也有顯著性影響，但是與DPPH自由基清除率呈現(xiàn)不同的變化規(guī)律。圖2B中隨著皂化時(shí)間的延長(zhǎng)，蝦青素提取物對(duì)羥自由基的清除效果呈上升趨勢(shì)，其中皂化4～12 h時(shí)羥自由基清除能力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異（P>0.05），皂化6 h時(shí)清除效果最強(qiáng)，為3.17 U/μg。而圖2C中蝦青素在皂化6 h時(shí)，總抗氧化能力最高達(dá)到0.62 U/μg，之后皂化時(shí)間延長(zhǎng)至12 h時(shí)，總抗氧化能力急劇降低至0.133 U/μg。圖2 結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明不同皂化時(shí)間下，蝦青素提取物的抗氧化性發(fā)生變化，但是與總蝦青素濃度變化（圖1B）并未表現(xiàn)出完全的一致性，如：經(jīng)6 和12 h皂化，蝦青素提取物的總蝦青素濃度低于皂化2 和4 h的蝦青素濃度，同樣皂化6 和12 h的蝦青素提取物對(duì)DPPH自由基清除率顯著低于其他皂化時(shí)間下的DPPH自由基清除率（P<0.05）。皂化4～12 h時(shí)，提取物的總蝦青素濃度表現(xiàn)出差異性（圖1B），但是對(duì)羥自由基清除能力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異（P>0.05）。因此，本研究進(jìn)一步分析了不同皂化時(shí)間下蝦青素提取物中游離型和酯型蝦青素相對(duì)濃度變化。

圖2 不同皂化時(shí)間下蝦青素提取物的抗氧化能力比較Fig.2 Comparison of antioxidant activities of Asta extracts after saponification for different time

2.3 皂化時(shí)間對(duì)游離型和酯型蝦青素的影響

采用高效液相色譜分離法可以直觀看出酯型蝦青素轉(zhuǎn)化為游離型蝦青素程度[22]，中華管鞭蝦的蝦青素提取物經(jīng)過(guò)不同時(shí)間皂化后蝦青素的分布變化如圖3 所示。蝦青素酯化后疏水性增強(qiáng)，而雙酯又強(qiáng)于單酯，因此HPLC采用C18柱分析檢測(cè)蝦青素時(shí)，依次洗脫下來(lái)游離型蝦青素、蝦青素單酯、蝦青素雙酯[26]。通過(guò)對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)品及參考文獻(xiàn)[17]確定未皂化的中華管鞭蝦的蝦青素提取物中含有游離型蝦青素（其中峰1～3 分別為全反式蝦青素、9-順異構(gòu)體、13-順異構(gòu)體）和酯型蝦青素。隨著皂化的進(jìn)行，蝦青素提取物中游離型蝦青素中的全反式、9-順式和13-順式峰值增加明顯，當(dāng)皂化6 h時(shí)，蝦青素提取物中的酯型蝦青素峰明顯減少，至皂化12 h時(shí)完全消失。圖3 結(jié)果表明經(jīng)過(guò)6～12 h皂化處理，蝦青素提取物中酯型蝦青素基本完全轉(zhuǎn)為游離型蝦青素。

圖3 不同皂化時(shí)間下蝦青素提取物中游離型和酯型蝦青素分布情況Fig.3 Distribution of free Asta and Asta esters in the Asta extracts after saponification for different time

由圖4 可知，未皂化中華管鞭蝦的蝦青素提取物中酯型蝦青素相對(duì)濃度顯著高于游離型蝦青素（P<0.05）。經(jīng)過(guò)皂化后，酯型蝦青素轉(zhuǎn)化為游離型蝦青素效果顯著，其中皂化2 h時(shí)游離型蝦青素相對(duì)濃度由皂化前的8.14 μg/mL增至27.11 μg/mL，而酯型蝦青素則由10.20 μg/mL降至5.60 μg/mL（P<0.05）。當(dāng)皂化時(shí)間大于6 h，游離型蝦青素的相對(duì)濃度趨于穩(wěn)定，保持在34 μg/mL左右。提取物中的酯型蝦青素在皂化12 h時(shí)基本水解完全，但皂化物中游離型蝦青素相對(duì)濃度無(wú)顯著性增加（P>0.05），應(yīng)與長(zhǎng)時(shí)間皂化處理游離型蝦青素發(fā)生部分降解有關(guān)。因此，要合理控制皂化時(shí)間。

圖4 不同皂化時(shí)間下蝦青素提取物中游離型和酯型蝦青素相對(duì)濃度比較Fig.4 Comparison of relative concentration of free Asta and Asta esters in the Asta extracts after saponification for different time

2.4 皂化時(shí)間對(duì)蝦青素光學(xué)異構(gòu)體濃度影響

人工合成蝦青素是三種光學(xué)異構(gòu)體的混合物（3S,3′S:3S,3′R:3R,3′R=1:2:1）[27]，在 Chiralpak IC手性柱上洗脫順序?yàn)?S,3′S、3S,3′R、3R,3′R[23]。自然界不同生物體的蝦青素光學(xué)異構(gòu)體組成存在明顯差異，如：雨生紅球藻主要為3S,3′S型[28]，紅發(fā)夫酵母中蝦青素光學(xué)異構(gòu)體主要是3R,3′R型[29]，三文魚中蝦青素光學(xué)異構(gòu)體以3S,3′S為主[30]，甲殼動(dòng)物對(duì)蝦和螃蟹則是存在較為獨(dú)特的3S,3′S/3S,3′R/3R,3′R異構(gòu)體混合物[29]。從圖5 結(jié)果可以看出：未皂化的中華管鞭蝦的蝦青素提取物中含有上述三種光學(xué)異構(gòu)體，并且以3S,3′S和3S,3′R為主。當(dāng)皂化2 h時(shí)，三種光學(xué)異構(gòu)體的峰高及峰面積增加明顯，說(shuō)明蝦青素脫酯及脫蛋白后有助于三種光學(xué)異構(gòu)體含量增加。

圖5 不同皂化時(shí)間蝦青素提取物中光學(xué)異構(gòu)體分布比較Fig.5 Distribution comparisons of three Asta optical isomers in the Asta extracts after saponification for different time

進(jìn)一步分析了不同皂化時(shí)間下，蝦青素提取物中三種光學(xué)異構(gòu)體的濃度和相對(duì)含量變化，結(jié)果見(jiàn)圖6，其中，圖6A為三種光學(xué)異構(gòu)體濃度隨時(shí)間變化關(guān)系，圖6B為不同皂化時(shí)間下三種光學(xué)異構(gòu)體相對(duì)含量變化。從圖6A可知，皂化處理后蝦青素提取物中三種光學(xué)異構(gòu)體濃度增加顯著，皂化2 h時(shí)3S,3′S濃度由未皂化的2.41 μg/mL增加到13.83 μg/mL，3R,3′R也從低于檢出限增至5.66 μg/mL。皂化時(shí)間大于2 h，三種光學(xué)異構(gòu)體的濃度并未隨著皂化時(shí)間的延長(zhǎng)而快速增加。皂化至12 h時(shí)，3S,3′S、3S,3′R和3R,3′R濃度依次為16.65、12.47和8.63 μg/mL，與皂化2 h時(shí)相比仍有顯著性提高（P<0.05）。進(jìn)一步比較了三種光學(xué)異構(gòu)體間比例組成發(fā)現(xiàn)（圖6B）：皂化2 h時(shí)，3S,3′S、3S,3′R和3R,3′R的相對(duì)含量分別為49.27%±2.98%、30.54%±0.24%和20.19%±4.53%，即：3S,3′S:3S,3′R:3R,3′R的相對(duì)含量比為2.4:1.5:1.0。而皂化12 h時(shí)，3S,3′S:3S,3′R:3R,3′R相對(duì)含量比為2.4:1.7:1.0，表明皂化過(guò)程中游離型蝦青素三種光學(xué)異構(gòu)體間的相對(duì)含量比較為穩(wěn)定，并未隨著皂化時(shí)間的變化而發(fā)生明顯變化。

圖6 不同皂化時(shí)間蝦青素提取物中光學(xué)異構(gòu)體的濃度及相對(duì)含量比較Fig.6 Comparisons of Asta optical isomers concentrations and relative contents in the Asta extracts after saponification for different time

2.5 不同皂化時(shí)間下提取物中光學(xué)異構(gòu)體濃度與抗氧化能力相關(guān)性分析

蝦青素提取物經(jīng)過(guò)皂化，總蝦青素濃度、體外抗氧化能力及蝦青素組成均發(fā)生了改變（見(jiàn)圖1～圖6）。據(jù)報(bào)道蝦青素的三種光學(xué)異構(gòu)體表現(xiàn)出不同的抗氧化能力[31?32]，所以實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究了皂化處理后，提取物中蝦青素3S,3′S、3S,3′R和3R,3′R三種光學(xué)異構(gòu)體濃度與羥自由基清除能力關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖7 不同皂化時(shí)間下蝦青素提取物中三種光學(xué)異構(gòu)體濃度與羥自由基清除能力關(guān)系Fig.7 Relationships between the three Asta optical isomers concentrations and scavenging hydroxyl radicals of the Asta extracts after saponification for different time

圖7 結(jié)果表明，不同皂化時(shí)間下，蝦青素提取物的羥自由基清除能力與三種光學(xué)異構(gòu)體濃度有較為顯著的線性相關(guān)性（P<0.05），說(shuō)明蝦青素提取物的羥自由基清除能力與三種光學(xué)異構(gòu)體有明顯的劑量依賴性。當(dāng)清除羥自由基能力相近時(shí)，所需光學(xué)異構(gòu)體濃度越低，表示該異構(gòu)體的抗氧化能力越強(qiáng)，可以看出蝦青素提取物中蝦青素光學(xué)異構(gòu)體對(duì)羥自由基清除能力依次為：3R,3′R>3S,3′R>3S,3′S，即：皂化后中華管鞭蝦的蝦青素提取物中3R,3′R羥自由基清除能力強(qiáng)于另外兩種光學(xué)異構(gòu)體。張瑞蓮[32]報(bào)道蝦青素三種光學(xué)異構(gòu)體抑制亞油酸自動(dòng)氧化的能力為3S,3′S=3R,3′R>3S,3′R，說(shuō)明不同來(lái)源的蝦青素光學(xué)異構(gòu)體在不同抗氧化評(píng)價(jià)體系中會(huì)表現(xiàn)出不同的抗氧化能力。一般來(lái)講，外消旋型蝦青素（3S,3′S和3R,3′R）的抗氧化活性強(qiáng)于內(nèi)消旋型（3S,3′R）[27]，而本研究中蝦青素內(nèi)消旋體3S,3′R也表現(xiàn)出較強(qiáng)的羥自由基清除能力，推測(cè)可能與皂化物中三種光學(xué)異構(gòu)體之間的相互協(xié)同作用有關(guān)，具體還需后續(xù)實(shí)驗(yàn)深入研究。

3 結(jié)論

中華管鞭蝦的蝦青素提取物經(jīng)適當(dāng)皂化處理，可以明顯提高蝦青素濃度及體外抗氧化活性，其中皂化2～4 h，總蝦青素濃度在8.70 μg/mL左右，DPPH自由基清除能力在皂化2 h達(dá)到25.85%，而皂化6 h時(shí)蝦青素提取物的羥自由基和總抗氧化能力分別達(dá)到3.17 和0.62 U/μg。HPLC分析結(jié)果表明皂化前2 h時(shí)，酯型蝦青素快速轉(zhuǎn)化為游離型蝦青素，且3S,3′S、3S,3′R和3R,3′R三種光學(xué)異構(gòu)體生成速率高。中華管鞭蝦的蝦青素的光學(xué)異構(gòu)體以3S,3′S型為主，不同皂化時(shí)間下蝦青素提取物中3S,3′S:3S,3′R:3R,3′R的相對(duì)含量比保持在2.4:1.5～1.7:1.0 之間。研究發(fā)現(xiàn)中華管鞭蝦的蝦青素提取物中的三種光學(xué)異構(gòu)體與羥自由基清除表現(xiàn)出較強(qiáng)的線性相關(guān)性，且3R,3′R清除羥自由基能力最強(qiáng)。皂化后蝦青素各異構(gòu)體間相互作用，以及與生物活性關(guān)聯(lián)性有待于進(jìn)一步研究。