秦 艷，陶佳佳，沈 赟，陳 喆，葉巖榮 （復旦大學附屬中山醫(yī)院藥劑科，上海 200032）

補體系統(tǒng)是人體重要的免疫防御系統(tǒng)之一，是由30 多種廣泛存在于血清、組織液和細胞膜表面的蛋白質(zhì)組成的，具有精密調(diào)控機制的蛋白質(zhì)反應(yīng)系統(tǒng)，其主要通過3 種途徑激活：經(jīng)典途徑、旁路途徑和甘露糖結(jié)合凝集素途徑。補體系統(tǒng)正常激活，可在靶細胞上形成膜攻擊復合物，導致靶細胞的溶解，補體的這一功能在機體的免疫系統(tǒng)中起重要的防御和免疫監(jiān)視作用，對抵御外來微生物的入侵和維持機體平衡有重要的作用。然而該系統(tǒng)的過度激活將釋放炎性過敏毒素C3a 和C5a，具有化學誘導作用的C5a 能趨化嗜中性粒細胞、中核細胞和嗜酸性粒細胞，這些細胞釋放蛋白酶和具有趨化作用細胞因子，進一步聚集T、B 淋巴細胞和其他炎性細胞，從而促進炎癥反應(yīng)的發(fā)生，引起系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化、腎小球腎炎等[1-2]。近年來已有研究表明[3]，補體系統(tǒng)的激活是類風濕性關(guān)節(jié)炎中慢性滑膜炎的發(fā)病因素之一。因此，抑制補體系統(tǒng)的過度激活可能是治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的重要機制之一。

三色片為復旦大學附屬中山醫(yī)院的院內(nèi)制劑，由雷公藤、黃芪和丹參三味藥材按1∶1∶1 的比例配伍組成，在臨床上用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病和濕疹等結(jié)締組織疾病。我院臨床醫(yī)生在長期的醫(yī)療實踐中總結(jié)出來的經(jīng)驗方，效果顯著[4]。組方中雷公藤，性味辛寒，有大毒，歸肝、腎經(jīng)，具有清熱解毒、活血化瘀、通絡(luò)止痛、殺蟲止癢等功效?，F(xiàn)代研究表明，雷公藤內(nèi)酯醇對大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)注射β-淀粉酶后補體C1q 和C3 的表達有抑制作用，表明雷公藤對補體系統(tǒng)有抑制作用，目前臨床上廣泛用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病和濕疹等結(jié)締組織疾病[5]。組方中的黃芪用于脾肺氣血或中氣下陷之癥、衛(wèi)氣虛所致表虛自汗、氣虛血滯導致的肢體麻木、關(guān)節(jié)痹痛等癥，可聯(lián)合治療類風濕性關(guān)節(jié)炎[6]。黃芪在治療2 型糖尿病大鼠的研究中發(fā)現(xiàn)其能降低補體C3 的水平，表明其對補體系統(tǒng)具有一定的調(diào)節(jié)作用[7-8]。丹參是最常用的活血化瘀中藥之一，具有祛瘀止痛，養(yǎng)血安神的功效，現(xiàn)代藥理學研究表明其還具有保護肝臟的功能[9]，可拮抗雷公藤的肝毒性。本研究通過經(jīng)典途徑抗補體活性測定方法篩選出三色片醇提物的乙酸乙酯部位抗補體活性最佳，并采用UPLC-Q-TOF-MS 法對該部位的化學成分進行結(jié)構(gòu)表征，為三色片抗補體活性藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及治療補體過度激活相關(guān)疾病提供科學依據(jù)。

1 儀器、試劑與材料

Tripie TOF5600+型四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀，配備電噴霧電離源和CDS 自動校正系統(tǒng)（美國Applied Biosystems 公司）；Peak view2.2 和Master view1.1 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國Applied Biosystems 公司）；LC-30A 超高效液相色譜儀，包括高壓輸液泵，自動進樣器，柱溫箱和在線脫氣機（日本島津公司）；KQ5200E 型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；甲醇、乙腈（色譜純，德國Merck 公司）；甲酸（色譜純，美國Sigma-Aldrich 公司）; 蒸餾水（娃哈哈集團）；三色片提取物由作者自制，現(xiàn)樣品存放于復旦大學附屬中山醫(yī)院藥劑科（SSP2018）；補體、溶血素（自制）；毛蕊異黃酮（批號：ST088101），雷公藤甲素（批號：ST020501），雷公藤內(nèi)酯酮（批號：ST049901），丹參酮II A（ST014601）、黃芪甲苷（ST001601）（純度≥ 98%，均購自上海斯丹德生物技術(shù)有限公司）。

2 方法

2.1 三色片醇提物及各極性部位的制備

雷公藤、黃芪和丹參三味藥材按1∶1∶1 配伍，其中，黃芪和丹參加6 倍量的水浸泡2 h 后，煎煮2 次，第一次1.5 h，第二次加水4 倍量煎煮1 h，煎液濾過，合并濾液并濃縮至相對密度為1.10～1.20（70 ℃），加入2 倍量的乙醇，靜置沉淀24 h，取上清液備用。雷公藤分別加4 倍量的乙醇加熱回流2 次，每次1.5 h，合并提取液，濾過，加入上述備用藥液，混勻，回收乙醇至無醇味，濃縮后即得三色片醇提物，經(jīng)現(xiàn)有的質(zhì)量標準檢驗為制備三色片制劑合格的提取物。精密稱取三色片醇提物2.0 g，置于100 ml 萃取瓶中，加25 ml 蒸餾水溶解后，用等量的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，濃縮干燥后，放冷至室溫，得到三色片醇提物的石油醚部位0.36 g，乙酸乙酯部位0.42 g，正丁醇部位0.56 g 和水溶性部位。

2.2 經(jīng)典途徑的抗補體活性測定

取各極性部位樣品2 mg 溶于DMSO，采用BBS 緩沖液稀釋成不同濃度的樣品，并加入臨界濃度的補體（1∶80 稀釋的豚鼠血清），溶血素和2%綿羊紅細胞（SRBC）。37 ℃水浴30 min，離心后取上清液在405 nm 波長下測定吸光度（A）值。同時設(shè)置中藥對照組（將等量的中藥提取物加入BBS緩沖液中，用于測定中藥本底A值）、補體組（取臨界濃度的補體直接加入適量的BBS 緩沖液、溶血素和2%SRBC，用于測定臨界濃度補體所造成紅細胞溶血的A值）和全溶血組（將2%SRBC 加入水中使之全溶血，用于觀察補體組是否達到或接近全溶血水平），并以肝素作為陽性對照組，計算溶血抑制率。以供試品濃度為橫坐標（X），溶血抑制率為縱坐標（Y），計算CH50（經(jīng)典途徑50%抑制溶血所需供試品濃度）。溶血抑制率=1?（A中藥?A中藥對照）/A全溶血。

2.3 不同濃度的樣品色譜與質(zhì)譜條件

2.3.1 色譜條件

色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動相0.1%甲酸和水溶液（A）?乙腈（B）；梯度洗脫：0～9 min，10%～23% B；9～13 min，23% B；13～28 min，23%～40% B；28～32 min，40%～50% B；32～37 min，50%～100% B；37～42 min，100% B；42～42.1 min，10%B；42.1～50 min，10%B；流速為0.25 ml/min，柱溫為35 ℃；進樣量為2 μl。

2.3.2 質(zhì)譜條件

在正/負離子模式，離子源選擇電噴霧離子化源（ESI）；使用m/z50～1 250 掃描范圍；碰撞能量35 eV，碰撞能量疊加（35±15）eV；噴霧電壓5 500 V；霧化氣溫度550 ℃；去簇電壓100 V；霧化氣和輔助氣均為50 psi；氣簾氣25 psi；數(shù)據(jù)采集時間50 min；采用母離子觸發(fā)的子離子（TOF-MS-IDA-MS/MS）掃描方式；多重質(zhì)量虧損和動態(tài)背景扣除為觸發(fā)二級的條件，滿足該條件進行二級掃描。

2.4 對照品溶液的制備

精密稱取毛蕊異黃酮、雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯酮、丹參酮Ⅱ A 和黃芪甲苷對照品1.0 mg，加甲醇2 ml，溶解，搖勻，即得各對照品溶液。

精密吸取對照品溶液和供試品溶液2 μl，采用“2.1”項下的色譜與質(zhì)譜條件對樣品進行分析，通過正、負離子全掃描，獲得正、負離子模式下的總離子流圖，見圖1。

圖1 三色片提取物UPLC-Q-TOF-MS 正和負離子模式下的總離子流圖

2.5 供試品溶液的制備

取三色片醇提物的乙酸乙酯部位樣品0.2 g，置于10 ml 量瓶中，加入70%甲醇5 ml，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷至室溫，70%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.6 三色片中化學成分數(shù)據(jù)庫的建立

根據(jù)三色片中各藥材化學成分研究文獻，收集3 種藥材所含化合物成分的基本信息，包括化合物名稱、分子式、精確分子量、準分子離子峰和碎片離子峰。通過精確分子量匹配，對照品的保留時間，二級譜所得到的離子碎片與文獻報道進行比對，最終確定化合物的結(jié)構(gòu)。

3 結(jié)果與分析

3.1 三色片醇提物各極性部位的抗補體活性

分別對三色片醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位進行經(jīng)典途徑的抗補體活性測定，以肝素為對照品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯部位的抗補體活性最好，其抗補體活性略低于肝素鈉，其次是正丁醇部位，結(jié)果見表1。

表1 三色片提取物不同部位抗補體活性測定

3.2 三色片醇提物乙酸乙酯部位的UPLC-Q-TOFMS 分析

通過與對照品比對，分子離子峰質(zhì)譜數(shù)據(jù)解析，與參考文獻比對，共鑒定出三色片醇提物乙酸乙酯部位42 個化合物，結(jié)果見表2。

表2 三色片提取物中各成分主要碎片離子及譜峰歸屬

(續(xù)表2)

3.2.1 黃酮類化合物結(jié)構(gòu)解析

在乙酸乙酯部位中共鑒定出6 個黃酮類化合物，其中4 個黃酮苷元和2 個黃酮苷，苷元為黃酮、異黃酮和紫檀烷，該類化合物在正離子模式下具有較好的響應(yīng)。二級質(zhì)譜中黃酮苷元易發(fā)生中性丟失，形成[M+H-H2O]+、[M+H-CO]+、[M+H-CH3]+等碎片離子，如在化合物8 的二級質(zhì)譜中可見m/z270.053 4 和m/z253.050 3，則為m/z285.077 4 分別脫去-CH3和CH3OH 形成的[M+H-CH3]+和[M+H-CH3OH]+碎片離子峰，m/z225.055 3 是m/z253.050 3 脫去1 分子的CO 形成的碎片離子峰，通過對照品的保留時間和參考文獻[12]質(zhì)譜數(shù)據(jù)比對確定化合物8 為毛蕊異黃酮，m/z137.023 5 的碎片離子峰為異黃酮母核C 環(huán)發(fā)生RDA 裂解所產(chǎn)生。黃酮苷類易脫去糖基形成較強的分子離子峰，如化合物3（m/z447.130 4）的二級質(zhì)譜脫去糖基形成m/z285.077 5 的分子離子峰，并與化合物8（m/z285.077 4）的二級質(zhì)譜圖非常相似，說明化合物3 和化合物8 在結(jié)構(gòu)上是相似的，但化合物3 的分子量多了162（C6H10O5），通過數(shù)據(jù)庫比對和參考文獻[12]推測化合物3 則為毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。化合物9（m/z301.109 0）通過數(shù)據(jù)庫比對發(fā)現(xiàn)兩種候選化合物分別為astrapterocarpan 和astraisoflavan，二級質(zhì)譜中主要碎片離子峰為C 環(huán)裂解產(chǎn)生的含A 環(huán)和B 環(huán)片段的碎片離子，其中，m/z167.070 8 為含B 環(huán)的碎片離子峰且為基峰，進一步脫甲基形成m/z152.047 3，m/z123.043 3 為含A 環(huán)的碎片離子峰，進一步脫水形成m/z105.034 0，m/z147.043 2 為母離子m/z301.109 0 脫去B 環(huán)形成的碎片離子峰，根據(jù)m/z167.070 8 的碎片離子峰為基峰和含有m/z147.043 2 的碎片離子峰這兩個特征，結(jié)合參考文獻[12]的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，推測該化合物為astrapterocarpan，其相關(guān)裂解途徑見圖2。

圖2 化合物astrapterocarpan 的質(zhì)譜裂解規(guī)律

3.2.2 三萜皂苷類化合物結(jié)構(gòu)解析

在乙酸乙酯部位中鑒定出7 個三萜皂苷類化合物，在負離子模式下均具有較好的響應(yīng)，一級質(zhì)譜中產(chǎn)生[M+COOH]?的準分子離子峰，二級質(zhì)譜中產(chǎn)生較強的[M-H]-碎片離子峰和脫去糖基的較弱的分子離子峰?；衔?9 在負離子模式下產(chǎn)生的準分子離子峰為[M+COOH]?（m/z829.458 0），二級質(zhì)譜中產(chǎn)生m/z783.457 9[M-H]?峰，脫去1 分子六碳糖（C6H10O6）形成m/z621.404 3 的碎片離子峰，m/z489.357 2 則為m/z621.404 3 進一步脫去1 分子五碳糖（C5H6O5）后形成的苷元碎片離子峰，推測其苷元為9,19-環(huán)阿爾廷烷，通過對照品的保留時間，參考文獻[13]的離子碎片比對確定該化合物為黃芪甲苷。

3.2.3 生物堿類化合物結(jié)構(gòu)解析

三色片提取物中共鑒定出16 個生物堿類化合物，均來自雷公藤藥材，在正離子模式下具有較好的響應(yīng)，一級質(zhì)譜中產(chǎn)生[M+H]+的準分子離子峰，二級質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)該類型的化合物容易脫去H2O、CO 和CH3COOH 等中性小分子而產(chǎn)生碎片離子峰，多數(shù)生物堿含有吡啶二羧酸部位的碎片離子峰。如化合物23 在正離子模式下產(chǎn)生m/z874.278 5的準分子離子峰，二級質(zhì)譜中產(chǎn)生脫去1 分子CO 的m/z846.282 9 的基峰，脫去1 分子H2O 的m/z856.269 2 的碎片離子峰和脫去1 分子HCOOH的m/z828.272 3 的碎片離子峰，m/z674.245 1 峰為m/z846.282 9 脫去C5H4O3側(cè)鏈和CH3COOH形成的碎片離子峰，m/z204.065 6 峰為大環(huán)開裂產(chǎn)生的吡啶二羧酸部分脫水產(chǎn)生的碎片離子，該離子進一步脫羧形成m/z176.070 7 的碎片離子，通過數(shù)據(jù)庫和參考文獻[11]質(zhì)譜數(shù)據(jù)的比對，推測化合物23 為雷公藤春堿。化合物31 在正離子模式下產(chǎn)生m/z858.285 4 的準分子離子峰，二級質(zhì)譜中產(chǎn)生脫去1 分子H2O 的m/z840.275 7 的碎片離子峰，準分子離子峰脫去1 分子CH3COOH 形成較強的m/z798.263 8 峰，在進一步脫去1 分子CH3COOH形成738.243 5 峰，準分子離子峰m/z858.285 4 脫去FuOH（C5H4O3）側(cè)鏈形成的m/z746.269 1 的碎片離子峰，再進一步脫去1 分子CH3COOH，形成m/z686.248 0 的碎片離子，m/z206.082 5 峰為大環(huán)開裂產(chǎn)生的吡啶二羧酸部分脫水產(chǎn)生的碎片離子，該離子進一步脫羧形成m/z178.087 1 的碎片離子，通過數(shù)據(jù)庫和參考文獻[20]質(zhì)譜數(shù)據(jù)的比對，推測化合物31 為雷公藤晉堿。雷公藤晉堿中吡啶二羧酸部分較雷公藤春堿中少一個羥基，故其易產(chǎn)生m/z206.082 5 的碎片離子峰，并通過脫羧產(chǎn)生m/z178.087 1 峰。兩種化合物的質(zhì)譜圖見圖3。以雷公藤晉堿為例，解析此類化合物的裂解規(guī)律，見圖4。因此得出吡啶二羧酸部分含有羥基的生物堿會產(chǎn)生m/z204 系列的特征碎片離子峰，不含羥基的生物堿則產(chǎn)生m/z206 系列的特征碎片離子峰。

3.2.4 萜類化合物結(jié)構(gòu)解析

本研究共鑒定出8 種萜類化合物，其中源于丹參藥材中的5 種萜類成分，丹參中的萜類化合物因其結(jié)構(gòu)中主要含有羥基，羰基等取代基，所以質(zhì)譜碰撞中主要丟失H2O，CO 和-CH3等中性分子，產(chǎn)生一系列的碎片離子峰?；衔?1 在正離子模式下產(chǎn)生m/z295.134 9 的[M+H]+準分子離子峰，二級質(zhì)譜中產(chǎn)生脫去1 分子甲基形成的m/z280.109 9的碎片離子峰，在此基礎(chǔ)上有丟失1 分子水形成m/z262.097 7 峰，準分子離子峰脫去1 分子H2O 或脫去1 個-CHO 形成m/z277.124 3 峰或m/z266.095 3峰，m/z249.127 5 峰是m/z277.124 3 脫去1 分子H2O 形成的碎片峰，通過對照品的保留時間和參考文獻[10,18,23]數(shù)據(jù)比對，鑒定該化合物為丹參酮Ⅱ A，其質(zhì)譜裂解規(guī)律見圖5。

來源于雷公藤藥材中的3 種二萜類成分，該類化合物的二級質(zhì)譜中出現(xiàn)一系列的脫水、脫CO 和異丙基等碎片離子峰?；衔?1 在正離子模式下產(chǎn)生m/z361.166 5 的準分子離子峰，脫去2 分子H2O 和2 分子CO 形成m/z269.154 3 的碎片離子峰，m/z227.108 3 為m/z269.154 3 脫去1 分子CH2CHCH3形成的碎片離子，其進一步脫1 分子H2O 和HCHO 形成m/z185.096 9 的碎片離子，通過對照品比對和參考文獻[14-15]的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，確定化合物10 為雷公藤甲素?；衔?8 在正離子模式下產(chǎn)生m/z359.148 9 的準分子離子峰，脫去2 分子H2O 和2 分子CO 形成m/z267.138 0 的碎片離子峰，m/z225.019 5 為m/z267.138 0 脫去1 分子CH2CHCH3形成的碎片離子，其進一步脫1 分子H2O 和HCHO 形成m/z183.079 9 的碎片離子，通過對照品比對和參考文獻[19]的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，確定化合物16 為雷公藤內(nèi)酯酮?；衔?9 在負離子模式下產(chǎn)生m/z299.199 6 的準分子離子峰，二級質(zhì)譜中產(chǎn)生m/z283.168 2 的碎片離子, 提示為丟失1 個-CH3后形成雙鍵產(chǎn)生的碎片離子峰，A 環(huán)發(fā)生RDA 裂解產(chǎn)生m/z213.090 8 的碎片離子峰，通過數(shù)據(jù)庫比對和參考文獻[22]的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，推測化合物39 為雷酚萜。

3.2.5 酚酸類化合物結(jié)構(gòu)解析

在正負離子模式下共鑒定出乙酸乙酯部位中5 種酚酸類成分，均來自于丹參藥材，參考文獻[18]報道的丹參中酚酸類成分的裂解規(guī)律發(fā)現(xiàn)，酚酸類化合物主要含有羰基、羧基和羥基，所以在質(zhì)譜碰撞中易丟失CO、H2O 和CO2的中性碎片；丹參素和咖啡酸作為基本母核而其他的水溶性酚酸類化合物大多數(shù)為這兩者的聚合或縮合產(chǎn)物，主要為縮酚酸類的成分，在質(zhì)譜碰撞中易丟失[M-H-180]?和[M-H-198]?中性碎片；含有羧基的單體化合物在負離子模式下會產(chǎn)生135[C8H7O2]?和179[C9H7O4]?的特征性碎片?；衔? 中，在負離子模式下產(chǎn)生m/z197.044 7 的[M-H]?準分子離子峰，二級質(zhì)譜進一步產(chǎn)生丟失1 分子H2O 和1 分子CO2，形成的m/z179.038 3 和m/z135.044 3 的碎片離子峰，推測出結(jié)構(gòu)中含有羧基，結(jié)合其精確分子量和參考文獻[10]質(zhì)譜數(shù)據(jù)，推測該化合物為丹參素。化合物12 中，負離子模式下產(chǎn)生m/z491.097 0 的[M-H]?準分子離子峰，二級質(zhì)譜中產(chǎn)生m/z311.054 9 和m/z293.044 6 的碎片離子峰，分別為[M-H-180]?和[M-H-198]?,m/z267.064 6 峰為m/z311.054 9 脫去1 分子CO2所產(chǎn)生，根據(jù)m/z135.044 7 峰推測結(jié)構(gòu)中含有羧基，結(jié)合其精確分子量和參考文獻[18]質(zhì)譜數(shù)據(jù)的比較，推測該化合物為丹酚酸C?；衔? 中，正離子模式下給出m/z139.039 4 的[M+H]+準分子離子峰，脫去1 分子H2O 形成m/z121.028 7的碎片離子峰，通過數(shù)據(jù)庫比對和參考文獻[10]，推測該化合物1 為原兒茶醛?；衔?3 中，在正離子模式下產(chǎn)生m/z341.066 9 的[M+H]+準分子離子峰，脫去1 分子CO2形成m/z295.060 7 的碎片離子峰，m/z277.050 9 和m/z249.056 0 的碎片離子峰是m/z295.060 7 峰分別脫去1 分子H2O 和1 分子CO2形成的，通過數(shù)據(jù)庫比對和參考文獻[17]質(zhì)譜數(shù)據(jù)，推測該化合物為丹酚酸G。

4 討論

4.1 色譜與質(zhì)譜條件考察

本實驗流動相考察了乙腈-水系統(tǒng)和甲醇-水系統(tǒng)，結(jié)果乙腈-水系統(tǒng)中化合物的分離度較好，加入甲酸可以改善峰形，有助于化合物的離子化，提高質(zhì)譜的響應(yīng)，最終選擇乙腈-0.1%甲酸水系統(tǒng)作為本次研究的流動相。

4.2 化學成分的定性分析

據(jù)以往文獻中三色片各化學成分的研究報道，收集各藥材的主要化學成分的精確分子量，碎片離子峰等信息，建立相應(yīng)的化學成分數(shù)據(jù)庫。通過數(shù)據(jù)庫比對，對照品保留時間及參考文獻中質(zhì)譜數(shù)據(jù)鑒定三色片醇提物乙酸乙酯部位的化學成分。本研究共鑒定出42 個化合物，其中5 個是通過對照品鑒定得出，對無對照品的化合物，通過質(zhì)譜的裂解特征及參考文獻進行結(jié)構(gòu)表征，對同分異構(gòu)體應(yīng)結(jié)合其在液相色譜中化合物的保留時間及質(zhì)譜行為，綜合對其定性鑒別。

三色片醇提物的乙酸乙酯部位具有較強的抗補體活性，本研究采用UPLC-Q-TOF-MS 法對其中的化學成分進行結(jié)構(gòu)表征，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該部位主要含有生物堿類，萜類，黃酮和酚酸類等化學成分。其中以來源于雷公藤藥材中極性中等的生物堿類成分含量較多，這與三色片提取物的制備工藝有關(guān)，三色片中雷公藤藥材采用乙醇加熱回流提取的方式，而黃芪和丹參藥材采用水提取醇沉淀的方式。此外，先前的研究發(fā)現(xiàn)廣藿香中的黃酮和萜類化合物對旁路途徑的補體激活具有明顯的抑制作用，紫花地丁中的生物堿類成分對旁路途徑也有抑制作用（AP50=0.22～0.50 g/L）, 牡丹皮和毛七公的抗補體活性成分研究中發(fā)現(xiàn)酚羥基決定抗補體活性的存在與否，沒食子?；筛纳瓶寡a體活性，甲基則對抗補體活性不利[25-27]。通過本次研究對三色片醇提物的乙酸乙酯部位的化學成分進行了初步表征，為闡明三色片的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考依據(jù)。研究的不足之處在于，仍有部分化學成分尚未定性鑒定，含量較高的單體成分未進行體外抗補體活性的測定，未來將通過中藥化學的方法獲得含量較高的單體成分，并進行結(jié)構(gòu)鑒定和抗補體活性測定。