吳大春，諶雁冰

上海市松江區(qū)中心醫(yī)院，上海 201600

結(jié)腸癌（colon cancer，CC）是常見的發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤，好發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處［1］。流行病學(xué)資料顯示，全球每年約有120萬(wàn)新發(fā)結(jié)直腸癌患者，發(fā)病率男性為16.6/10萬(wàn)，女性為14.7/10萬(wàn)，而我國(guó)結(jié)直腸癌發(fā)病率占全世界的18.6%左右［2］，并且隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變等表現(xiàn)出逐年增加和年輕化的趨勢(shì)［3］，受到醫(yī)學(xué)界的重視。結(jié)腸癌一般呈息肉狀、潰瘍型等，可沿腸管蔓延、深層浸潤(rùn)、腹腔種植等，出現(xiàn)擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。結(jié)腸癌漏診率較高，確診時(shí)多屬于中晚期，除外科手術(shù)外，化學(xué)藥物是治療結(jié)腸癌的重要手段。目前。5-氟尿嘧啶占據(jù)結(jié)腸癌化療的主導(dǎo)地位，也常與其他藥物聯(lián)合使用以提高治療效果，但療效并不理想，因此，尋找更為安全有效的藥物對(duì)于結(jié)腸癌的治療尤為重要。青藤堿是從中藥青風(fēng)藤中提取的生物堿成分，藥理活性廣泛。陳偉毅等［4］研究認(rèn)為，其能抑制多種惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，但關(guān)于其對(duì)于結(jié)腸癌影響的研究較少。故本研究，主要探討青藤堿對(duì)SW480結(jié)腸癌細(xì)胞活性抑制作用及對(duì)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase，ERK）/絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞SW480 人結(jié)腸癌細(xì)胞株，品牌：ATCC，細(xì)胞活力：90%（上海素爾生物科技有限公司）。

1.2 試藥與試劑青藤堿（上海寶曼生物科技有限公司，純度：HPLC≥98%，CAS 號(hào)：115-53-7，貨號(hào)：D0116，規(guī)格：20 mg/支），使用時(shí)用磷酸鹽緩沖液（PBS）溶解，細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成濃度為2、4、8、16、20 mmol/L的青藤堿溶液；RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液、RPMI-1640 完全培養(yǎng)液（含10%胎牛血清+青霉素100 U/mL+鏈霉素100 μg/mL）（常州貝源鑫生物科技有限公司，批號(hào)：20190313、20190221）；PBS、磷酸鹽吐溫緩沖液（PBST）、TBST 緩沖液、0.25%胰蛋白酶溶液（上海聯(lián)邁生物工程有限公司，批號(hào)：20190405、20190311、20190325、20190209）；細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)（CCK-8）試劑盒（天津泰澤興業(yè)生物科技有限公司，批號(hào)：20190116）；藻紅蛋白標(biāo)記的磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V-PE）法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（南京科佰生物科技有限公司，批號(hào)：20190530）；RIPA 裂解液（含苯甲基磺酰氟）（北京君諾德生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20190422）；二喹啉甲酸（BCA）試劑盒（上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司，批號(hào)：20190302）；十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨（SDS-PAGE）凝膠配制試劑盒（長(zhǎng)沙達(dá)爾鋒生物科技有限公司，批號(hào)：20190322）；超敏電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)：20190508）；鼠抗人B 淋巴細(xì)胞瘤2（B lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bcl-2 related X protein，Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cysteine-containing aspartic acid proteolytic enzymes-3，Caspase-3）、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinase 1/2，ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（phosphorylated ERK1/2，p-ERK1/2）單克隆抗體、鼠抗人肌動(dòng)蛋白（anti-beta-actin，βactin）多克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗鼠免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）（廈門慧嘉生物科技有限公司，批號(hào)：20190117、20190209、20190106、20190426、20190218、20190310、20190413）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器Thermo Forma 3110 型二氧化碳（CO2）細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）；ROTOFIX32A 型離心機(jī)（德國(guó)Hettich 公司）；SuPerMax 3000AL 型酶標(biāo)儀（上海閃譜生物科技有限公司）；Guava EasyCyte 型流式細(xì)胞儀（美國(guó)MILLPORE 公司）；Powerpac Universal 型電泳儀（美國(guó)Bio-rad 公司）；MG6000 型凝膠成像分析儀（北京托摩根生物科技有限公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代［5］取出37℃保存的SW480 細(xì)胞，置于含有RPMI-1640 完全培養(yǎng)液的無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，混勻制成細(xì)胞懸液，采用CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5%CO2）進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)融合＞90%時(shí)（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期），倒掉培養(yǎng)液，采用0.25%胰蛋白酶消化液1 mL 處理細(xì)胞，3 min 后加入RPMI-1640 完全培養(yǎng)液5 mL 終止消化，吹打制成單細(xì)胞懸液，離心半徑：10.5 cm，1500 r/min，離心5 min，細(xì)胞沉淀中加入RPMI-1640 完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，之后接種于新的培養(yǎng)瓶進(jìn)行傳代，繼續(xù)培養(yǎng)。

1.4.2 CCK-8 法檢測(cè)青藤堿對(duì)SW480 細(xì)胞增殖的抑制作用［5］取貼壁生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SW480細(xì)胞，倒掉培養(yǎng)液，采用0.25%胰蛋白酶消化液1 mL 處理細(xì)胞，3 min 后加入RPMI-1640 完全培養(yǎng)液5 mL 終止消化，吹打制成單細(xì)胞懸液，采用RPMI-1640 完全培養(yǎng)液將細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為2×105個(gè)/mL。取96 孔板，每孔接種SW480 細(xì)胞懸液100 μL，采用CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5%CO2）進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后，棄掉孔內(nèi)上清液，分別加入2、4、8、16、20 mmol/L 的青藤堿溶液100 μL，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)平行復(fù)孔。設(shè)對(duì)照組（加入0 mmol/L青藤堿溶液100 μL）和空白組（無(wú)細(xì)胞，僅RPMI-1640 完全培養(yǎng)液100 μL）；采用CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5%CO2）繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，分別于培養(yǎng)24、48、72 h 后，按照試劑盒說(shuō)明，除去含藥培養(yǎng)液，每孔加入CCK-8 工作液10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h；采用Su-PerMax 3000AL 型酶標(biāo)儀，在450 nm～600 nm 波長(zhǎng)處，檢測(cè)各孔吸光度A值。之后計(jì)算各組SW480細(xì)胞增殖抑制率。

細(xì)胞增殖抑制率（%）=（對(duì)照組吸光度A 值平均值-實(shí)驗(yàn)組吸光度A值平均值）/對(duì)照組吸光度A值平均值×100%

1.4.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組SW480 細(xì)胞凋亡情況［6］取貼壁生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SW480細(xì)胞，倒掉培養(yǎng)液，采用0.25%胰蛋白酶消化液1 mL 處理細(xì)胞，3 min 后加入RPMI-1640 完全培養(yǎng)液5 mL 終止消化，吹打制成單細(xì)胞懸液，采用RPMI-1640 完全培養(yǎng)液將細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為1.5×106個(gè)/mL；取6 孔板，每孔接種SW480 細(xì)胞懸液200 μL，采用CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5%CO2）進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；24 h后，分別加入0（對(duì)照組）、4、8、16 mmol/L的青藤堿溶液100 μL，每組設(shè)6 個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)24 h 后，滴加0.25%胰蛋白酶消化液1 mL 消化細(xì)胞3 min，以離心半徑10.5 cm，1500 r/min，離心5 min，棄上清，細(xì)胞沉淀用預(yù)冷的PBS 洗滌2 次后重懸；取細(xì)胞懸液100 μL，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，加入Annexin V-PE 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑100 μL，于避光處培養(yǎng)20 min；上機(jī)，采用Guava EasyCyte 型流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組SW480細(xì)胞凋亡率。

1.4.4 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）法檢測(cè)各組SW480 細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、ERK1/2、p-ERK1/2 蛋白表達(dá)水平［7］按照“1.2.3”項(xiàng)中的方法培養(yǎng)SW480 細(xì)胞，并分組采用相應(yīng)藥物處理，采用CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5%CO2）培養(yǎng)24 h 后取出，以離心半徑10.5 cm，1500 r/min，離心5 min，棄上清，細(xì)胞沉淀用PBS 洗滌3 次；加入RIPA 裂解液（含苯甲基磺酰氟）300 μL，4℃裂解30 min 后，以離心半徑8.5 cm，13 000 r/min，離心10 min，上清液中即含有抽提的細(xì)胞總蛋白；按照BCA 試劑盒說(shuō)明書操作進(jìn)行蛋白定量；加入上樣緩沖液（5×）75 μL，沸水浴5 min 使蛋白變性；配制SDSPAGE 凝膠灌注于電泳儀上，上樣，采用電泳儀分離目的蛋白至溴酚蘭跑出分離膠；將目的蛋白轉(zhuǎn)膜至硝酸纖維素膜上，用麗春紅S 溶液復(fù)染，PBST洗滌硝酸纖維素膜至脫色；TBST 緩沖液（含5%脫脂奶粉）室溫封閉硝酸纖維素膜1 h，之后TBST 緩沖液洗滌；將硝酸纖維素膜分別放入1：1000 稀釋的Bcl-2、Bax、Caspase-3、ERK1/2、p-ERK1/2 及內(nèi)參β-actin 一抗，4℃孵育過(guò)夜；取出硝酸纖維素膜，采用TBST 緩沖液洗膜10 min×3 次，之后置于1∶12 000稀釋的HRP標(biāo)記的羊抗小鼠IgG溶液內(nèi)，室溫孵育1 h，之后TBST 洗滌10 min×3 次；在暗室內(nèi)，用超敏電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒處理硝酸纖維素膜，X 光片曝光、顯影、定影，自來(lái)水沖洗、晾干。MG6000 型凝膠成像分析儀對(duì)目的蛋白條帶進(jìn)行拍照，Quantity one 軟件分析各蛋白條帶灰度值，計(jì)算各組細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、ERK1/2、p-ERK1/2 蛋白灰度值與β-actin 灰度值的比值，獲得各目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用表示，多組間資料比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SW480 細(xì)胞增殖抑制率藥物處理24、48、72 h 后，與對(duì)照組比較，青藤堿4、8、16、20 mmol/L組SW480細(xì)胞增殖抑制率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且同一時(shí)間青藤堿4 mmol/L組＜8 mmol/L組＜16 mmol/L 組及20 mmol/L 組；一定范圍內(nèi)，青藤堿濃度相同時(shí)，處理時(shí)間越長(zhǎng)，SW480 細(xì)胞增殖抑制率越高，表現(xiàn)為劑量、時(shí)間依賴性。而青藤堿2 mmol/L 組SW480 細(xì)胞增殖抑制率與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；青藤堿20 mmol/L組SW480細(xì)胞增殖抑制率與青藤堿16 mmol/L組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，選用4、8、16 mmol/L 濃度青藤堿進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。見表1。

表1 各組SW480細(xì)胞增殖抑制率比較（） %

表1 各組SW480細(xì)胞增殖抑制率比較（） %

注：*表示與對(duì)照組比較，P＜0.05；▲表示與青藤堿2 mmol/L組比較，P＜0.05；#表示與青藤堿4 mmol/L組比較，P＜0.05；△表示與青藤堿8 mmol/L組比較，P＜0.05

2.2 SW480 細(xì)胞凋亡率流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，青藤堿4、8、16 mmol/L 組SW480 細(xì)胞凋亡率較高，且青藤堿4 mmol/L 組＜8 mmol/L 組＜16 mmol/L 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 各組SW480細(xì)胞凋亡率比較（） %

表2 各組SW480細(xì)胞凋亡率比較（） %

注：*表示與對(duì)照組比較，P＜0.05；#表示與青藤堿4 mmol/L組比較，P＜0.05；△表示與青藤堿8 mmol/L組比較，P＜0.05

2.3 SW480 細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較，青藤堿4、8、16 mmol/L組BcL-2 蛋白表達(dá)水平較低，且4 mmol/L 組＞8 mmol/L組＞16 mmol/L 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與對(duì)照組比較，青藤堿4、8、16 mmol/L 組Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)水平較高，且4 mmol/L 組＜8 mmol/L 組＜16 mmol/L 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3，圖1。

圖1 Western Blot法檢測(cè)SW480細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)水平

表3 各組SW480細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)水平比較（）

表3 各組SW480細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)水平比較（）

注：*表示與對(duì)照組比較，P＜0.05；#表示與青藤堿4 mmol/L組比較，P＜0.05；△表示與青藤堿8 mmol/L組比較，P＜0.05

2.4 SW480 細(xì)胞ERK1/2、p-ERK1/2 蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較，青藤堿4、8、16 mmol/L 組p-ERK1/2 蛋白表達(dá)水平較低，且青藤堿4 mmol/L組＞8 mmol/L 組＞16 mmol/L 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)照組與青藤堿4、8、16 mmol/L 組ERK1/2 蛋白表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4，圖2。

圖2 Western Blot法檢測(cè)SW480細(xì)胞ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平

表4 各組SW480細(xì)胞ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平比較（）

表4 各組SW480細(xì)胞ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平比較（）

注：*表示與對(duì)照組比較，P＜0.05；#表示與青藤堿4 mmol/L組比較，P＜0.05；△表示與青藤堿8 mmol/L 組比較，P＜0.05

3 討論

結(jié)腸癌起源于腸黏膜，其發(fā)生主要受到高脂肪及低纖維素飲食的影響，還與家族腫瘤遺傳史、吸煙、飲酒、體力活動(dòng)不足、紅肉攝入過(guò)多、肥胖等危險(xiǎn)因素有關(guān)［8］。結(jié)腸癌發(fā)病率居于胃腸道腫瘤的第三位，其起病隱匿，確診時(shí)部分病例已失去手術(shù)根治時(shí)機(jī)，只能以全身化療為主要治療手段，但大多數(shù)化療藥物的毒副反應(yīng)明顯，療效也十分有限。近年來(lái)許多學(xué)者集中探索了在體外環(huán)境下中藥提取物對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)抑制、細(xì)胞周期調(diào)控作用［9］，為新型植物化療藥物的研發(fā)提供了思路，也指出了目前研究的方向。青藤堿是提取自中藥青風(fēng)藤的活性成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)與嗎啡類似。秦峰等［10］藥理研究顯示，青藤堿能夠調(diào)節(jié)免疫功能、抑制炎癥反應(yīng)，具有抗腫瘤、減輕臟器缺血再灌注損傷、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、降血壓等作用，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心律失常、腎小球腎炎等疾病的治療中均有較好的應(yīng)用。關(guān)于其抗腫瘤作用，姜宇懋等［11］研究認(rèn)為，青藤堿能夠通過(guò)阻滯細(xì)胞G1期，抑制細(xì)胞增殖，加速細(xì)胞凋亡，降低侵襲轉(zhuǎn)移能力，抑制腫瘤血管生成，調(diào)節(jié)腫瘤微炎癥環(huán)境，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性等控制腫瘤進(jìn)展，對(duì)于胃癌、肺癌、肝癌等多種腫瘤生長(zhǎng)抑制作用明顯。楊海波等［12］的體外研究發(fā)現(xiàn)，青藤堿能通過(guò)阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程來(lái)抑制人結(jié)腸癌SW480 細(xì)胞增殖，但具體的作用機(jī)制尚未完全明確。

此次研究主要探討青藤堿對(duì)SW480 結(jié)腸癌細(xì)胞活性的抑制作用及對(duì)于ERK/MAPK 信號(hào)通路的影響。分別采用青藤堿2、4、8、16、20 mmol/L不同濃度的青藤堿處理SW480 細(xì)胞24、48、72 h，之后用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，CCK-8法是目前最具潛力和優(yōu)勢(shì)的細(xì)胞活性毒性檢測(cè)方法［13］，較MTT 法有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)周期短等優(yōu)勢(shì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，青藤堿4、8、16、20 mmol/L 青藤堿能夠不同程度的抑制SW480 細(xì)胞增殖，而且有劑量-時(shí)間依賴表現(xiàn)（P＜0.05），表明青藤堿能夠有效降低SW480結(jié)腸癌細(xì)胞增殖活性，而且藥物濃度越高、作用時(shí)間越長(zhǎng)，效果越明顯。

細(xì)胞凋亡異?？梢詫?dǎo)致細(xì)胞無(wú)限增殖，是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)，同時(shí)也是抗腫瘤治療中中藥的作用靶點(diǎn)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，在控制惡性腫瘤進(jìn)展方面有十分重要的意義。本次研究中，我們采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了不同濃度青藤堿對(duì)SW480 細(xì)胞凋亡情況的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，青藤堿4、8、16 mmol/L 組SW480 細(xì)胞凋亡率較高，且青藤堿濃度越高，SW480 細(xì)胞凋亡率也越高，提示青藤堿能有效加速SW480 細(xì)胞凋亡，降低腫瘤細(xì)胞活性。

MAPK 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以將細(xì)胞外信號(hào)傳導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，主要包括ERK1/2、c-jun 氨基末端激酶通路、p38 絲裂原活化蛋白激酶通路、ERK5 通路四條信號(hào)傳導(dǎo)途徑，其中以ERK1/2 最為保守。ERK1/2 被激活成為p-ERK1/2 后，一方面能夠促進(jìn)胞質(zhì)中細(xì)胞骨架纖維化，另一方面進(jìn)入細(xì)胞核磷酸化轉(zhuǎn)錄因子以調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化等，另外還能在胞質(zhì)轉(zhuǎn)紅停留并激活其他蛋白激酶，從而參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過(guò)程。殷亮等［14］研究認(rèn)為，ERK/MAPK 信號(hào)通路在結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)呈過(guò)度激活狀態(tài)，抑制其活性有助于誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Bcl-2、Bax、Caspase-3 凋亡相關(guān)蛋白，其中BcL-2 具有抑制細(xì)胞凋亡的作用，Bax 為凋亡抑制因子，Caspase-3 則是細(xì)胞凋亡過(guò)程中重要的終末剪切酶，屬于凋亡效應(yīng)因子［15］。Bcl-2、Bax、Caspase-3的表達(dá)均受到ERK/MAPK信號(hào)通路的調(diào)控，p-ERK1/2 進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)可上調(diào)Bcl-2 表達(dá)、下調(diào)Bax、Caspase-3 表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡［16］。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，青藤堿4、8、16 mmol/L 組SW480 細(xì)胞Bcl-2、p-ERK1/2 蛋白表達(dá)水平降低，Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)水平升高，而ERK1/2 蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化，而且青藤堿16 mmol/L組變化最明顯，表明青藤堿可能通過(guò)抑制ERK1/2磷酸化，降低ERK/MAPK信號(hào)通路活性，抑制下游Bcl-2蛋白表達(dá)，促進(jìn)Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)，來(lái)發(fā)揮促進(jìn)SW480 細(xì)胞凋亡的作用，作用效果與藥物濃度有關(guān)。

綜上所述，青藤堿能劑量依賴性抑制SW480結(jié)腸癌細(xì)胞增殖活性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其作用可能與抑制ERK/MAPK 信號(hào)通路活性，調(diào)節(jié)Bcl-2、Bax、Caspase-3等相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)有關(guān)。