饒清琳，錢(qián)發(fā)聰，張廷金，閆春麗，付玲芳，李秀軍，李夢(mèng)嬌*

(1.云南省煙草公司昆明市公司 尋甸分公司，云南 尋甸 655299；2.云南省煙草公司昆明市公司 嵩明分公司，云南 嵩明 651700；3.云南綠戎生物產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)股份有限公司，云南 昆明 650000；4.昆明保騰生化技術(shù)有限公司，云南 昆明 650106)

煙草黑脛病(Tobacco black shank)是由土傳性病原真菌煙草疫霉菌(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)引起的毀滅性根莖部病害[1]，1896年，文獻(xiàn)[2]報(bào)道發(fā)現(xiàn)該病原菌并命名．由于煙草在整個(gè)生育期均會(huì)受煙草疫霉菌的侵害，其中，苗期受害較輕，大田期受害較嚴(yán)重[3-4]．田間發(fā)病株率通常為15%～30%，嚴(yán)重田塊可達(dá)80%以上，甚至絕收[5]．

木霉菌通過(guò)空間競(jìng)爭(zhēng)、營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)、重寄生、分泌抗菌物質(zhì)等途徑抑制或殺滅病原菌[3,6-7]，現(xiàn)已成為煙草黑脛病主要的生防真菌[8-15]，而哈茨木霉(Trichodermaharzianum)是報(bào)道[3]最多的一種生防真菌，其中哈茨木霉LTR-2具有較高的酶活性，可用于植物抗生素的制備及土傳植物病害的生物防治制劑的配制，該菌株起初命名為綠色木霉LTR-2，由山東省科學(xué)院中日友好生物技術(shù)研究中心楊合同等人從濟(jì)南蔬菜田植物根系土壤中篩選獲得，經(jīng)PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，可快速生長(zhǎng)，形成較厚的菌絲層，初期為白色，后期產(chǎn)生分生孢子而呈深綠色，產(chǎn)孢區(qū)常排列成同心輪紋狀[16]．

為驗(yàn)證哈茨木霉菌LTR-2對(duì)煙草黑脛病的田間防治效果，擬在有煙草黑脛病病史的煙田開(kāi)展田間藥效試驗(yàn)，旨在為煙草黑脛病的防治提供參考．

1 材料與方法

1.1 材料

供試品種為紅花大金元．供試藥劑為2億孢子/克哈茨木霉菌(LTR-2)可濕性粉劑(昆明農(nóng)藥有限公司)；化學(xué)對(duì)照藥劑為72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑(利民化工股份有限公司)；生物對(duì)照藥劑為10億/g枯草芽孢桿菌粉劑(云南星耀生物制品有限公司)．試驗(yàn)地塊位于云南省昆明市尋甸縣倘甸鎮(zhèn)海子村，東經(jīng)102.91°，北緯25.78°，海拔2 120 m．

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理，包括哈茨木霉菌處理(A)、化學(xué)對(duì)照藥劑處理(CK1)、生物對(duì)照藥劑處理(CK2)和清水對(duì)照(CK0)．各處理均設(shè)4次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列，各小區(qū)面積50 m2，四周保護(hù)行面積50 m2．其他栽培措施按照當(dāng)?shù)乜緹熒a(chǎn)管理規(guī)范進(jìn)行．

1.2.2 施藥方法

各藥劑均施用3次，第1次于移栽時(shí)施用，第2次于移栽后10 d施用，第3次于移栽后20 d施用，各藥劑施用量見(jiàn)表1．施藥時(shí)按小區(qū)用藥量將藥劑稀釋成4 L，對(duì)煙株全株進(jìn)行噴霧，重點(diǎn)噴淋莖基部，使藥液沿莖基部流滲到根際周?chē)谋硗晾铮?/p>

表1 各處理藥劑施用量

1.2.3 調(diào)查項(xiàng)目

每次施藥后觀察各藥劑處理是否出現(xiàn)藥害，并分別調(diào)查各小區(qū)黑脛病發(fā)病率、病情指數(shù)，記錄烤煙采烤后的煙葉產(chǎn)量、等級(jí)和價(jià)格．

1.2.4 藥害調(diào)查方法

分別于施藥后第1，3，5 d觀察各藥劑處理是否出現(xiàn)藥害．并采取各藥劑處理與清水對(duì)照相比較來(lái)評(píng)價(jià)藥害程度，藥害輕重程度分為5級(jí)：1)無(wú)藥害；2)輕度藥害；3)明顯藥害；4)高度藥害；5)重度藥害．

1.2.5 黑脛病調(diào)查方法

分別于第2、第3次用藥前和第3次用藥后10，20 d調(diào)查黑脛病發(fā)病率和病情指數(shù)．每個(gè)小區(qū)所有煙株都進(jìn)行調(diào)查，同時(shí)記錄小區(qū)總株數(shù)及各級(jí)病株數(shù)，黑脛病病株分級(jí)按照《煙草病蟲(chóng)害分級(jí)及調(diào)查方法》(GB/T 23222—2008)進(jìn)行．黑脛病病株分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為(以株為單位)：全株無(wú)病記為0級(jí)；基部病斑不超過(guò)莖圍的1/3，或1/3以下葉片凋萎記為1級(jí)；莖部病斑環(huán)繞莖圍的1/3～1/2，或1/3～1/2葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑記為3級(jí)；莖部病斑超過(guò)莖圍的1/2，但未全部環(huán)繞莖圍，或1/2～2/3葉片凋萎記為5級(jí)；莖部病斑全部環(huán)繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎記為7級(jí)；病株基本枯死記為9級(jí)．

1.2.6 黑脛病田間鑒別方法

黑脛病田間鑒別方法[17]為：1)下部葉片突然萎蔫下垂，幾天后葉片變黃枯萎，或在葉片上形成“黑膏藥”圓形大病斑；2)莖基部出現(xiàn)黑色凹陷的病斑，隨后向上和橫向擴(kuò)展，導(dǎo)致莖基部逐漸變黑腐爛；3)當(dāng)黑色病斑擴(kuò)展到煙株莖稈1/3以上時(shí)，煙葉已無(wú)經(jīng)濟(jì)價(jià)值，可縱向剖開(kāi)莖基部，若髓部干縮成褐色碟片狀可確定為黑脛病侵染．

1.2.7 相對(duì)防效計(jì)算

病情指數(shù)用(1)式計(jì)算，施藥前有病情指數(shù)基數(shù)的防治效果用(2)式計(jì)算，無(wú)病情指數(shù)基數(shù)的用(3)式計(jì)算．用Duncan新復(fù)極差法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)．

病情指數(shù)=[∑(各級(jí)病株數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值)/調(diào)查總株數(shù)×9] ×100；

(1)

相對(duì)防效=[1-(CK0×PT1)/(CK1×PT0)]×100%；

(2)

相對(duì)防效=[(對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/對(duì)照區(qū)病情指數(shù)]×100%.

(3)

(2)式中：CK0和CK1分別為對(duì)照區(qū)藥前、藥后病情指數(shù)；PT0和PT1分別為藥劑處理區(qū)藥前、藥后病情指數(shù)．

2 結(jié)果分析

2.1 藥害觀察結(jié)果

試驗(yàn)過(guò)程中各小區(qū)均未發(fā)現(xiàn)藥害，說(shuō)明各藥劑對(duì)煙草安全．

2.2 各處理黑脛病病情比較

由表2可見(jiàn)，各處理移栽10 d后均未發(fā)現(xiàn)黑脛病病株，移栽20 d后開(kāi)始零星出現(xiàn)黑脛病病株，各處理的黑脛病病情指數(shù)均隨時(shí)間推移而增長(zhǎng)，移栽60 d后，各處理黑脛病病情從低到高依次為：72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑(7.89)<2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑(9.30)<10億/g枯草芽孢桿菌粉劑(11.78)<清水對(duì)照(20.56)．

2.3 各處理對(duì)黑脛病的相對(duì)防效比較

從表3可以看出，各藥劑處理移栽50，60 d后，對(duì)黑脛病的相對(duì)防效差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相對(duì)防效均隨時(shí)間推移而下降．移栽20，30，40 d后，72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑對(duì)黑脛病的相對(duì)防效均極顯著高于2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑和10億/g枯草芽孢桿菌粉劑，而這兩個(gè)生物藥劑對(duì)黑脛病的相對(duì)防效差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；移栽50 d后，72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑對(duì)黑脛病的相對(duì)防效極顯著高于兩個(gè)生物藥劑，2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑對(duì)黑脛病的相對(duì)防效顯著高于10億/g枯草芽孢桿菌粉劑；移栽60 d后，72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑對(duì)黑脛病的相對(duì)防效極顯著高于10億/g枯草芽孢桿菌粉劑，以及顯著高于2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑；2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑極顯著高于10億/g枯草芽孢桿菌粉劑．

表2 各處理黑脛病病情指數(shù)

表3 各處理對(duì)黑脛病的相對(duì)防效 %

2.4 各處理煙葉主要經(jīng)濟(jì)性狀比較

從表4可以看出，3個(gè)藥劑處理煙葉產(chǎn)量、均價(jià)、產(chǎn)值、中上等煙比例均極顯著高于清水對(duì)照．其中：3個(gè)藥劑處理的產(chǎn)量從高到低順序?yàn)椋?2%甲霜·錳鋅可濕性粉劑>10億/g枯草芽孢桿菌粉劑>2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑，且差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3個(gè)藥劑處理均價(jià)、產(chǎn)值和中上等煙比例從高到低的順序均為：2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑>10億/g枯草芽孢桿菌粉劑>72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑；2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑和10億/g枯草芽孢桿菌粉劑中上等煙比例均極顯著高于72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑，但是，這兩個(gè)生物藥劑處理的中上等煙比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

表4 各處理煙葉主要經(jīng)濟(jì)性狀比較

3 結(jié)論與討論

兩個(gè)生物藥劑對(duì)煙草黑脛病的相對(duì)防效在移栽20，30，40 d后，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；移栽50 d后，2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑對(duì)煙草黑脛病的相對(duì)防效顯著高于10億/g枯草芽孢桿菌粉劑；移栽60 d后，2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑對(duì)煙草黑脛病的相對(duì)防效極顯著高于10億/g枯草芽孢桿菌粉劑．說(shuō)明2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑前期對(duì)煙草黑脛病的防效與生物對(duì)照藥劑10億/g枯草芽孢桿菌粉劑接近，后期的持續(xù)防效顯著優(yōu)于生物對(duì)照藥劑，但是，在栽后60 d內(nèi)其相對(duì)防效均不如化學(xué)對(duì)照藥劑72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑．

72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑處理的煙葉產(chǎn)量略高于兩個(gè)生物藥劑，說(shuō)明在較好的煙草黑脛病相對(duì)防效下，該處理煙株、煙葉的損失低于兩個(gè)生物藥劑．化學(xué)對(duì)照藥劑處理的煙葉均價(jià)、產(chǎn)值均略低于兩個(gè)生物藥劑，中上等煙比例極顯著低于兩個(gè)生物藥劑，說(shuō)明施用生物藥劑不僅具有防治煙草黑脛病的良好效果，還能在一定程度上提高中上等煙比例．此外，2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑提高中上等煙比例的作用略優(yōu)于10億/g枯草芽孢桿菌粉劑．

綜上所述，2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑前期對(duì)煙草黑脛病的防治效果與生物對(duì)照藥劑10億/g枯草芽孢桿菌粉劑接近，而后期的持續(xù)防效顯著優(yōu)于后者．此外，該處理提高中上等煙比例的作用略優(yōu)于10億/g枯草芽孢桿菌粉劑，極顯著優(yōu)于化學(xué)對(duì)照藥劑72%甲霜·錳鋅可濕性粉劑，因此，2億孢子/克哈茨木霉菌可濕性粉劑是一種較為理想的煙草黑脛病生物防治藥劑．