洪照微，王沛，彭慧鳳，杜子成，魏文如，陳小慶

（江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，江西南昌330045）

隨著生活水平的提高，人們對畜禽類產(chǎn)品要求也逐漸提高，愈發(fā)追求于綠色、安全、健康的畜禽產(chǎn)品，土雞、土雞蛋也因此越來越受人們的喜愛[1]。散養(yǎng)家禽更容易感染寄生蟲，因為散養(yǎng)模式使家禽接觸寄生蟲病原的機會更大，而且養(yǎng)殖戶缺乏專業(yè)養(yǎng)殖技術，對疾病預防意識較差[2]。家禽被寄生蟲感染所引起的疾病大多呈慢性經(jīng)過且臨床體征不明顯，容易被養(yǎng)殖戶忽略[3]。雞感染寄生蟲尤其是腸道寄生蟲會導致雞食欲下降、腹瀉、生長緩慢、產(chǎn)蛋量下降等一系列癥狀，嚴重影響雞群的健康狀況，同時給養(yǎng)禽業(yè)也帶來巨大的經(jīng)濟損失[4～5]。本實驗采用糞便檢查技術和動物蠕蟲學完全剖檢技術等檢查方法對散養(yǎng)雞體內(nèi)外寄生蟲感染情況進行調(diào)查，收集散養(yǎng)雞體內(nèi)蠕蟲并進行計數(shù)和鑒定，為南昌地區(qū)散養(yǎng)雞體內(nèi)外寄生蟲病的流行情況、寄生蟲病防治提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 實驗材料

1.1.1 實驗器材。剪刀、手術刀、手術剪、搪瓷方盤、搪瓷杯、平皿、顯微鏡、放大鏡、載玻片、膠頭滴管、生理鹽水、75%酒精、DH5α感受態(tài)細胞、T載體、瓊脂粉、酵母粉、胰蛋白胨、氯化鈉、PCR儀、電泳儀、DNA提取試劑盒。

1.1.2 試驗動物。5只農(nóng)戶散養(yǎng)雞，購自南昌市青山湖區(qū)某農(nóng)貿(mào)市場。

1.2 實驗方法

1.2.1 體表寄生蟲檢查。取散養(yǎng)雞的羽毛，先肉眼結(jié)合放大鏡仔細觀察，將疑似有蟲體的毛發(fā)置于載玻片上，滴加兩滴生理鹽水后置于低倍顯微鏡下觀察，若發(fā)現(xiàn)蟲體可用鑷子采集并浸泡于75%酒精中。

1.2.2 動物蠕蟲學完全剖檢技術。將家禽處死后解剖，觀察內(nèi)臟器官表面有無寄生蟲和病變，再逐一取其內(nèi)臟器官放于不同的搪瓷杯中進行檢查。最后將在體內(nèi)各器官臟器中收集到的蟲體置于生理鹽水中簡單沖洗后于無水乙醇中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 糞便寄生蟲檢查。取散養(yǎng)雞的直腸新鮮糞便，采用直接涂片法和飽和鹽水漂浮法進行寄生蟲檢查。

1.2.4 分子生物學鑒定。對所收集的蠕蟲用組織DNA提取試劑盒進行蟲體總DNA提取，將提取的DNA作為模板，分別用線蟲、絳蟲ITS基因通用引物NCf、NCr[6]，BDf、BDr[7]進行PCR擴增，對PCR產(chǎn)物進行凝膠電泳檢測。再將PCR擴增產(chǎn)物進行膠回收，將膠回收產(chǎn)物進行克隆測序，將測得序列提交至NCBI網(wǎng)站進行比對分析，并上傳序列至Gen-Bank數(shù)據(jù)庫。

表1 線蟲和絳蟲的ITS引物序列

2 結(jié)果

2.1 體表寄生蟲檢查結(jié)果

通過對家禽體表毛發(fā)以及皮膚的寄生蟲檢查，發(fā)現(xiàn)5只被檢雞的羽毛上都存在很多羽虱和皮刺螨，感染率為100%，具體蟲體形態(tài)如圖1所示。

圖1 體外寄生蟲

2.2 體內(nèi)寄生蟲檢查結(jié)果

通過對5只雞的內(nèi)臟器官進行檢查，在5只雞的消化道（以小腸和盲腸居多）中均發(fā)現(xiàn)大量線蟲和絳蟲，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)線蟲28條，絳蟲27條，如圖2所示。

圖2 消化道寄生蟲

2.3 糞便寄生蟲卵檢查結(jié)果

通過直接涂片法和飽和鹽水漂浮法對5只雞的直腸糞便進行檢查，結(jié)果在5只雞的直腸糞便中發(fā)現(xiàn)了球蟲卵囊、蛔蟲卵、禽毛細線蟲卵、異刺線蟲卵、四棱線蟲卵及絳蟲卵，如圖3所示。

圖3 糞便寄生蟲蟲卵

2.4 分子生物學鑒定結(jié)果

本實驗共收集到55條蠕蟲，其中禽毛細線蟲是通過腸黏膜刮片觀察到的，通過蟲體內(nèi)部蟲卵形態(tài)判斷為禽毛細線蟲，并未收集蟲體。使用組織總DNA提取試劑盒對55條蠕蟲提取DNA，再使用ITS基因通用引物進行PCR擴增和凝膠電泳檢測，可觀察到1 000bp及1 800bp左右的目的條帶，無非特異性條帶，與預期結(jié)果相符。將PCR產(chǎn)物膠回收并克隆測序，將測序結(jié)果進行對比分析并上傳序列至GenBank。55條蠕蟲經(jīng)測序分析比對分析后發(fā)現(xiàn)，有24條屬于雞蛔蟲（上傳的GenBank登錄號為MW218962-MW218965）、4條為異刺線蟲（上傳的GenBank登錄號為MW403874）、有24條為有輪賴利絳蟲（上傳的GenBank登錄號為MW291960-MW291962）、1條為縮小膜殼絳蟲、1條為四角瑞利絳蟲（上傳的GenBank登錄號為MW291975），1條為棘溝賴利絳蟲。

圖4 蟲體ITS序列PCR擴增電泳圖

2.5 寄生蟲感染情況分析

在體表寄生蟲檢查中，5只雞體表均發(fā)現(xiàn)皮刺螨和羽虱，感染率為100%。體內(nèi)寄生蟲檢查，發(fā)現(xiàn)5只雞體內(nèi)均存在數(shù)量不等的線蟲、絳蟲，其中蛔蟲、絳蟲感染率為100%，異刺線蟲感染率為80%，禽毛細線蟲感染率為20%。通過糞便寄生蟲卵檢查發(fā)現(xiàn)，5只實驗雞糞便中均存在蛔蟲卵、異次線蟲卵、絳蟲卵及球蟲卵囊，感染率為100%；3只雞糞便中發(fā)現(xiàn)禽毛細線蟲卵，感染率為60%；1只雞糞便中發(fā)現(xiàn)四棱線蟲卵，感染率為20%。比較體內(nèi)寄生蟲檢查結(jié)果與糞便寄生蟲卵檢查結(jié)果，可以看出結(jié)果大體上是一致的，但也稍有不同，這可能與體內(nèi)感染的蟲體數(shù)量等相關。

表2 雞體內(nèi)外寄生蟲感染情況

表3 雞體內(nèi)寄生蟲蟲卵情況

3 討論

散養(yǎng)雞對蛔蟲及絳蟲等消化道寄生蟲普遍易感。李新春等對陜西榆林市散養(yǎng)雞寄生蟲進行調(diào)查[8]，發(fā)現(xiàn)該地區(qū)散養(yǎng)雞主要感染異刺線蟲、蛔蟲、絳蟲及羽虱。朱瑞平等調(diào)查福建上杭縣散養(yǎng)雞寄生蟲感染情況也顯示該地區(qū)散養(yǎng)雞羽虱、蛔蟲、絳蟲的感染率高[9]，這些調(diào)查結(jié)果與本研究結(jié)果接近。揚州地區(qū)散養(yǎng)雞寄生蟲感染情況的調(diào)查結(jié)果顯示主要感染寄生蟲為螨蟲和球蟲[10]。云南無量山散養(yǎng)雞腸道寄生蟲檢查結(jié)果顯示，主要感染寄生蟲為球蟲和蛔蟲[11]。這些研究結(jié)果表明，各地區(qū)散養(yǎng)雞感染的體外寄生蟲大多為羽虱、螨蟲；體內(nèi)寄生蟲主要為線蟲、絳蟲、球蟲等，但不同地區(qū)其優(yōu)勢蟲種不同，這可能與所調(diào)查的地區(qū)、氣候、品種、飼養(yǎng)管理等因素有關。

針對線蟲及絳蟲，現(xiàn)如今國內(nèi)較為常用的治療方案是使用左旋咪唑、阿苯達唑等藥物拌料口服，同時會在飲水中添加電解多維等增強動物免疫力[12～13]。而歐洲許多國家由于對抗生素類藥物使用管理嚴格，只有苯丙咪唑類藥物可用于蛋雞線蟲感染的治療，農(nóng)場普遍使用合成驅(qū)蟲劑（主要成分為甲苯達唑等苯丙咪唑類藥物）對寄生蟲病進行一定的預防。目前較前沿的防治線蟲的方法為靶向治療[14]，也有相關研究表明通過靶向治療策略的應用，可以獲得更好的生產(chǎn)性能[15]。

羽虱、皮刺螨等體表寄生蟲是散養(yǎng)雞中感染率較高的寄生蟲，多發(fā)于夏季[16]，尤其是陰暗、潮濕的飼養(yǎng)環(huán)境下的雞最易感染。若引起大規(guī)模感染，嚴重可造成雞群大面積死亡，給養(yǎng)殖戶帶來較大的經(jīng)濟損失[17]。近些年有研究發(fā)現(xiàn)惰性粉塵與真菌白僵菌的干燥分生孢子對皮刺螨具有潛在的防治作用[18]，植物精油如香芹酚和百里香酚對螨蟲也有一定毒性作用[19～20]。這些天然成分藥物效果好，不易產(chǎn)生耐藥，但成本高，尚未普及。防控體表寄生蟲，更重要的在雞群的日常飼養(yǎng)管理。養(yǎng)殖戶應當做好日常雞舍的消毒和清理工作，注意養(yǎng)殖場周圍環(huán)境問題，防止因雞舍環(huán)境問題造成雞群體表寄生蟲大規(guī)模感染[21]。養(yǎng)殖戶還應當定期對雞群進行驅(qū)蟲。針對體表寄生蟲，可以用溴氰菊酯等噴灑雞舍進行預防，也可噴灑在雞群身上，與環(huán)境同時進行殺蟲。對于患病雞可用0.1%敵百蟲等藥物噴灑在患部，能達到很好的治療效果[22]。

綜上所述，南昌地區(qū)五只散養(yǎng)雞在體表、體內(nèi)均存在寄生蟲感染，其中羽虱、皮刺螨、蛔蟲、絳蟲、球蟲的感染率為100%；異刺線蟲感染率為80%；毛細線蟲感染率為60%；四棱線蟲的感染率為20%。由此可見南昌地區(qū)散養(yǎng)雞寄生蟲感染情況較為嚴重，應重點加強對體表寄生蟲（羽虱、皮刺螨等）、球蟲、線蟲以及絳蟲的防治。