宋韶錦，鞏騰飛，孟慶山，張 羽

（威海市食品藥品檢驗檢測研究院，山東威海 264200）

西青果又稱“藏青果”，為使君子科植物訶子（Terminalia chebulaRetz.）的干燥幼果，在中醫(yī)臨床中作為清熱解毒藥用于復方配伍治療肺炎、喉炎、扁桃體炎、咽炎、細菌性痢疾等癥[1]。西青果中鞣質(zhì)與酚酸類成分含量豐富，主要化學成分為訶子酸、訶黎勒酸及沒食子酸等[2-3]。西青果顆粒是由西青果水提醇沉物經(jīng)制劑化制備的中成藥顆粒，在臨床用于治療咽喉干痛、慢性扁桃體炎等疾病[4]。進行中藥顆粒制劑的體外溶出度評價研究是有效的制劑質(zhì)量控制手段，有利于指導制劑的處方優(yōu)化與制劑質(zhì)量標準的建立[5]。本文旨在比較不同溶出度測試方法對西青果顆粒溶出行為評價的影響差異，考察西青果顆粒在不同溶出條件下的溶出行為適應(yīng)性及進行溶出機制分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

島津LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；Hypersil C18色 譜 柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；MS105DU電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；RCZ-8B溶出試驗儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；UV-2550紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

甲醇（色譜純，默克）；磷酸（天津市科密歐化學試劑有限公司）；水為自制重蒸水；其他試劑未經(jīng)說明均為分析純。沒食子酸標準品（中國藥品食品檢定研究所，批號110831-201605，含量90.8%）；西青果顆粒（廣西天天樂藥業(yè)股份有限公司，15 g×10袋）。

1.2 沒食子酸含量分析方法建立

1.2.1 色譜條件

Hypersil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；SPD-10A型二極管陣列檢測器；柱溫25 ℃；流動相為以甲醇-0.5%磷酸水溶液（15∶85)；流速0.8 mL/min；檢測波長215 nm，進樣量 20 μL。

1.2.2 供試品溶液制備

取樣品10袋，研細，精密稱定一定量的細粉約0.3 g，平行兩份于具塞錐形瓶中，分別以50%甲醇、水和0.1 mol/L鹽酸為溶劑，精密加入溶劑25 mL后稱定重量，超聲處理20 min（功率250 W，頻率40 kHz)，超聲的過程中要不斷的變換瓶子的相對位置，以便于超聲均勻，再用對應(yīng)的溶劑補足失重后，搖勻，用0.45 μm的濾膜過濾，采用HPLC法測定。

1.2.3 對照品溶液制備

精密稱定沒食子酸對照品11.36 mg，置于100 mL容量瓶，50%甲醇溶液溶解定容，微孔濾膜（0.45 μm）過濾，制備得濃度為103.15 μg/mL沒食子酸對照品原始液，備用。

1.2.4 標準曲線制備

50%甲醇溶液對濃度為103.15 μg/mL沒食子酸對照品原始液進行梯度稀釋，得到濃度為1.031 5 μg/mL、10.315 μg/mL、20.63 μg/mL、41.26 μg/mL、61.89 μg/mL、82.52 μg/mL和103.15 μg/mL的系列濃度溶液。HPLC進樣20 μL測定后以峰面積（Y）對濃度（x）擬合回歸方程。

1.2.5 精密度考察

移取沒食子酸對照品原始液,重復進樣6次，記錄峰面積。

1.2.6 穩(wěn)定性考察

移取新配制的沒食子酸對照品溶液，于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h和48 h時間點分別進樣測定。

1.2.7 重復性考察

分別以50%甲醇溶液、蒸餾水、0.1 mol/L鹽酸溶液為溶劑溶解定容沒食子酸對照品，所得樣品溶液分別于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h和48 h時間點分別進樣測定。

1.2.8 加樣回收率考察

分別精密量取1.2.2項3種溶劑的樣品溶液1 mL，置于50 mL容量瓶中，分別加入1.2.3項下沒食子酸對照品溶液1 mL，再分別用相對應(yīng)的溶劑稀釋定容至刻線，0.45 μm的濾膜過濾，HPLC法測定。

1.3 溶出度測定

1.3.1 漿法

西青果顆粒1袋，采用2015年版《中國藥典》附錄溶出度測定第二法漿法，溶出介質(zhì)體積為800 mL，于不同設(shè)置轉(zhuǎn)速下在（37±0.5）℃下進行西青果顆粒劑的溶出測定。在設(shè)置取樣時間點（10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min、70 min、80 min、90 min、100 min、110 min 和120 min）利用自動取樣系統(tǒng)取樣5 mL，并及時補充等溫等量溶出介質(zhì)。為保證取樣準確性與自動取樣系統(tǒng)的運行穩(wěn)定性，取樣針配制0.45 μm濾頭以防止取樣未溶解細小顆粒。

1.3.2 小杯法

基于小杯法測定西青果顆粒溶出的測試方法除溶出介質(zhì)體積設(shè)置為200 mL利用自動取樣系統(tǒng)取樣1 mL，并及時補充等溫等量溶出介質(zhì)，向取樣管中精密加4 mL的溶出介質(zhì)混勻制成樣品，其他參數(shù)與1.3.1項下漿法參數(shù)一致。

1.4 西青果顆粒在不同測試條件下溶出曲線繪制

西青果顆粒1袋，參照1.3.1項下漿法與1.3.2項下小杯法溶出度測定方法，在不同溶出介質(zhì)（蒸餾水、0.1 mol/L鹽酸溶液）和攪拌速度（50 r/min、75 r/min、100 r/min）組合條件下進行西青果顆粒的溶出測試，溶出樣品經(jīng)HPLC進行含量測定，繪制溶出曲線。

1.5 西青果顆粒溶出機制分析

利用Origin數(shù)據(jù)分析軟件對西青果顆粒小杯法測定溶出曲線分別進行零級動力學、一級動力學、Higuchi方程以及Korsmeyer- peppas方程動力學方程擬合，尋找最佳描述和預測西青果顆粒溶出行為的數(shù)學模型。

2 結(jié)果與分析

2.1 沒食子酸含量分析方法建立

沒食子酸回歸方程為Y=105 934x-1 465.3，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，結(jié)果表明沒食子酸在1.0315～103.15 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。精密度考察峰面積的RSD為0.45%（n=6），表明方法精密度良好。穩(wěn)定性考察沒食子酸峰面積的RSD為1.49%（n=7），表明沒食子酸對照品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性考察（n=7）和加樣回收率（n=3）的結(jié)果見表1，通過數(shù)據(jù)可以表明，沒食子酸在不同溶液之間的重復性良好，且加樣回收率符合定量測定要求。

表1 重復性考察和加樣回收的結(jié)果比較

2.2 不同溶劑的含量結(jié)果比對

通過數(shù)據(jù)比較可以得出，不同溶劑之間含量測定的比對結(jié)果顯示，蒸餾水、50%甲醇溶液、0.1 mol/L鹽酸溶液的含量測定結(jié)果偏差較小。實驗數(shù)據(jù)結(jié)果見表2。

表2 不同溶劑含量測定的結(jié)果比對

2.3 西青果顆粒在不同測試條件下溶出曲線繪制

由表3、表4可知，西青果顆粒漿法測定，在不同溶出介質(zhì)、不同攪拌速度的組合測試條件下，在10 min的累計溶出率均高于80%，溶出迅速，符合顆粒劑快速溶出的制劑要求。以漿法作為測試方法，以蒸餾水作為溶出介質(zhì)時，西青果顆粒在攪拌速度分別為50 r/min、75 r/min、100 r/min條件下，10 min時的累計溶出率分別為84.44%、91.63%、91.06%，溶出達平臺期時間分別為20 min、10 min、10 min，說明攪拌速度可影響溶出藥物的擴散速率從而影響制劑溶出。溶出曲線測定時攪拌速度的設(shè)定應(yīng)模擬體內(nèi)生理環(huán)境。為了在體外制劑研究時更好控制制劑質(zhì)量，確保制劑在多種體內(nèi)環(huán)境均有較好溶出適應(yīng)性，應(yīng)考察制劑在低攪拌速度（50 r/min）下的溶出曲線，以預測制劑在患者體虛狀態(tài)胃腸蠕動功能低下時的溶出性能。西青果顆粒在50 r/min攪拌條件下在蒸餾水和0.1 mol/L鹽酸溶液兩種溶出介質(zhì)中均可快速溶出，顆粒在不同攪拌速度下的溶出適應(yīng)性較好。漿法測定西青果顆粒溶出時，在不同攪拌條件下，顆粒劑在蒸餾水和0.1 mol/L鹽酸溶液中的溶出曲線較為相似，顆粒劑在不同溶出介質(zhì)中的溶出適應(yīng)性較好。

表3 西青果顆粒漿法測定溶出率（n=6）

表4 西青果顆粒小杯法溶出測定溶出率（n=6）

小杯法與漿法相比，是在更小體積的溶出介質(zhì)中進行的固體制劑溶出測試。以小杯法作為測試方法測定西青果顆粒的溶出曲線，在相同溶出介質(zhì)中，攪拌速度影響西青果顆粒劑的溶出，這與漿法測定結(jié)果一致。當溶出介質(zhì)相同，所選擇的轉(zhuǎn)速不同時，其相同時間段內(nèi)表現(xiàn)出來的累計溶出率之間存在著一定的差異，具體數(shù)據(jù)可以參見表2。以上結(jié)果說明西青果顆粒在小杯法中的溶出慢于漿法測定，其原因可能為由于溶出介質(zhì)體積差異導致的剪切速率與沒食子酸擴散速率的差異。

2.4 西青果顆粒溶出機制分析

擬合結(jié)果表明，西青果顆粒在各種溶出條件下小杯法測定溶出曲線對一級動力學的擬合相關(guān)性系數(shù)均高于0.99。在低攪拌速度（50 r/min）對一級動力學方程與Higuchi方程擬合較好，擬合相關(guān)系數(shù)均高于0.99，表明西青果顆粒的溶出機制為Fick擴散，顆粒溶蝕對其溶出存在一定影響。在高攪拌速度（100 r/min）對一級動力學方程擬合較好，Higuchi方程擬合相關(guān)性降低，西青果顆粒溶出機制只為Fick擴散。其原因是由于在低攪拌速度下顆粒的溶蝕過程影響藥物溶出，在高攪拌速度下顆?？焖偃艹?，顆粒快速完成溶蝕過程。結(jié)果見表5。

表5 西青果顆粒小杯法測定溶出機制

3 討論

依托HPLC法，結(jié)合沒食子酸在不同溶液之間溶出度的含量變化，有利于進一步分析中成藥之間化學成分的溶出行為[6]。進行中藥固體制劑的體外溶出研究是制劑質(zhì)量控制與預測體內(nèi)釋藥行為的有效手段，溶出條件的設(shè)置應(yīng)模擬制劑在體內(nèi)釋藥部位的生理環(huán)境。制劑在多種溶出環(huán)境中均能保持穩(wěn)定可控的溶出特性是保證制劑在體內(nèi)多種生理環(huán)境中良好溶出并保證生物利用度的前提[7]。不同的溶出測定方法會影響制劑的溶出曲線，小杯法在少量固體制劑的溶出測定中可提高溶出液的濃度以保證樣品溶液滿足檢測限要求[8]。進行溶出曲線的溶出動力學分析可預測制劑在體內(nèi)的溶出特性，并對溶出曲線進行精確控制。