楊 佳，劉舒媛，王瑩瑩，李盈甫，馬千里，李 玙，王永蓉，李傳印，譚 芳

1.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所，云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點實驗室，云南 昆明 650118；

2.昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院干部醫(yī)療科，云南 昆明 650032；

3.昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院胸外科，云南 昆明 650118

肺癌是全球發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤。國家癌癥中心發(fā)布的中國最新癌癥統(tǒng)計報告數(shù)據(jù)顯示，2015年中國男性肺癌發(fā)病率為20.30%，是男性發(fā)病率第1位的惡性腫瘤；女性肺癌發(fā)病率為15.02%，是女性發(fā)病率第2位的惡性腫瘤［1］。2015年中國因肺癌死亡約63.1萬例，占全國惡性腫瘤死亡人數(shù)的26.99%，死亡率在男性和女性惡性腫瘤患者中均排在第1位［1］。肺癌的病因多樣，至今尚不完全明確。持續(xù)的慢性炎癥在多種腫瘤（肺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌等）的發(fā)生、發(fā)展以及癌癥患者的生存中具有重要作用［2］。腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是一種重要的多功能炎癥因子，最早因其能夠使多種腫瘤發(fā)生出血性壞死而被發(fā)現(xiàn)并命名［3］，TNF-α在腫瘤微環(huán)境中的促腫瘤作用已被廣泛研究，TNF-α是炎癥與惡性腫瘤相互作用的關鍵介質(zhì)之一［4］。在體內(nèi)，TNF-α主要由活化的單核-巨噬細胞分泌，其通過與腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor，TNFR）結(jié)合而進行信號轉(zhuǎn)導并發(fā)揮效應。研究［3］發(fā)現(xiàn)，TNF-α不僅可以誘導一些炎癥因子和蛋白酶對腫瘤產(chǎn)生直接的殺傷作用，還可以由腫瘤自身產(chǎn)生，作為一種內(nèi)源性生長因子促進腫瘤細胞增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移。因此，TNF-α可能作用于腫瘤發(fā)生、發(fā)展的各個階段，與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展均具有相關性［3，5］。在健康人血清中一般檢測不到TNF-α，然而在多種癌癥如乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌等患者血清中卻?？蓹z測到很高的TNF-α水平［6］。腫瘤患者特別是預后較差的進展性腫瘤患者血清中TNF-α水平明顯升高。Karayiannakis等［7］的研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌患者中有明顯轉(zhuǎn)移的患者血清中TNF-α水平顯著高于無轉(zhuǎn)移的患者。Yoshida等［8］的研究發(fā)現(xiàn)，腎癌患者血清中TNF-α水平與腎癌的轉(zhuǎn)移也具有相關性，有明顯轉(zhuǎn)移的腎癌患者血清中TNF-α水平顯著高于無轉(zhuǎn)移的患者及健康對照者?；颊哐逯蠺NF-α水平與腫瘤大小也具有相關性。另外，TNF-α對非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的發(fā)生、發(fā)展及耐藥也起著十分重要的作用。Shang等［9］研究發(fā)現(xiàn)，血清高TNF-α水平與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移呈正相關。另有研究［10］發(fā)現(xiàn)，TNF-α可增強肺癌細胞對離子輻射的敏感性，抑制細胞遷移，肺癌患者中高TNF-α水平與肺癌進展呈負相關。TNF-α基因位于人類6號染色體主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex，MHC）基因的第三類基因區(qū)域，TNF-α基因啟動子區(qū)域存在大量的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）位點，例如-308G>A、-238G>A等，這些SNP位點可能會因堿基序列的改變影響轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合從而導致TNF-α基因表達量的變化，最終可能會影響腫瘤的易感性和嚴重程度。Xie等［11］的一項meta分析發(fā)現(xiàn)，TNF-α基因-308G>A與亞洲人群的肺癌患病風險的增加相關，F(xiàn)lego等［12］研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α-238G>A的GG基因型可顯著促進NSCLC的進程。本研究通過比較TNF-α基因中啟動子區(qū)域rs1799964（-1031T>C）、rs1800630（-863C>A）、rs1799724（-857C>T）、rs1800629（-308G>A）和rs361525（-238G>A）5個SNP位點在云南省漢族肺癌患者和健康對照者中的頻率差異，探討云南省漢族人群TNF-α基因SNP與肺癌的相關性。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2011—2019年在昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院和昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院確診為NSCLC的云南戶籍患者425例作為病例組，根據(jù)世界衛(wèi)生組織肺癌組織類型劃分標準，病例組按病理學類型分為鱗癌、腺癌、腺鱗癌及其他類型肺癌；另外，采用國際肺癌臨床分期系統(tǒng)進行臨床分期，病例組臨床分期分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ期。病例組的納入標準為：戶籍地為云南省的新確診肺癌病例，未接受過放化療等抗腫瘤治療，未患有其他惡性腫瘤，無其他系統(tǒng)性疾病。選取同期在昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院和昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院進行體檢的438名健康體檢者作為對照組。對照組的納入標準為：戶籍地為云南省的個體，影像學檢查未發(fā)現(xiàn)肺部占位性病變，無刺激性干咳、血痰、胸痛等癥狀，未患其他惡性腫瘤，無其他系統(tǒng)性疾病。所有研究對象均為彼此無血緣關系的漢族個體，年齡15～88歲。本研究的研究方案和實驗方法已獲昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院倫理委員會和昆明醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院倫理委員會的批準，所有參與本研究的個體均已知曉并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集及基因組DNA提取

采集空腹靜脈血5 mL，用乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）或肝素抗凝，使用全血基因組DNA提取試劑盒（QIAamp DNA Blood Mini Kit，德國QIAGEN公司）提取DNA。用超微量紫外可見分光光度計（NanoDrop 2000，美國Thermo Fisher Scientific公司）檢測DNA的濃度和純度。

1.2.2 基因分型

本研究采用TaqMan探針分型法對TNF-α基因的5個SNP位點進行基因分型。TaqMan探針（TaqMan SNP Genotyping Assays）和基于實時熒光定量聚合酶鏈反應（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQPCR）的SNP分型試劑（TaqPath? ProAmp?Master Mix）購自美國Applied Biosystems公司，其中SNP位點rs1799964（分析序列號：C_7514871_10）、rs1799724（分析序列號：C_11918223_10）、rs1800629（分析序列號：C_7514879_10）、rs361525（分析序列號：C_2215707_10）為美國Applied Biosystems公司預設探針。SNP位點rs1800630為美國Applied Biosystems公司訂制探針，正向引物序列為5’-GGGCTATGGAAGTCGAGTATGG-3’，反向引物序列為5’-CCCTCTACATGGCCCTGTCT-3’。ⅤIC探針序列為ACCCCCACTTAACG，F(xiàn)AM探針序列為ACCCCCCCTTAACG（序列中字體帶下劃線標記的堿基為rs1800630位點等位基因?qū)膲A基）。使用美國Applied Biosystems公司QuantStudio 6 Flex RTFQ-PCR儀進行SNP分型檢測。反應體系為5.00 μL，包含SNP分型試劑2.50 μL、TaqMan探針0.25 μL、樣品DNA 1.00 μL、水1.25 μL。反應程序為：60 ℃ 30 s預讀板，95 ℃ 10 min預變性，95 ℃ 15 s變性，60 ℃ 1 min退火延伸，共40個循環(huán)。每次實驗均設置陰性對照（以水代替DNA模板樣本）。使用基因分型軟件TaqMan Genotyper Software進行結(jié)果分析。同時，每個位點隨機挑取10個樣本進行擴增并測序，通過分型結(jié)果和測序結(jié)果的對比來判斷分型結(jié)果的準確性。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用t檢驗分析病例組和對照組的年齡差異，用χ2檢驗分析病例組和對照組的性別差異。使用Plink軟件（v1.07）［13］計算病例組和對照組中每個位點的基因型、等位基因頻率及哈迪-溫伯格平衡，并用χ2檢驗比較病例組和對照組間等位基因和基因型頻率的差異。使用在線軟件SNPStats［14］對5個SNP位點進行5種遺傳模式的分析：共顯性模式、顯性模式、隱性模式、超顯性模式和邏輯加性模式，根據(jù)赤池信息量準則（Akaike Information Criterion，AIC）和貝葉斯信息準則（Bayesian Information Criterion，BIC）的數(shù)值來確定每個位點的最優(yōu)遺傳模式，即AIC和BIC數(shù)值最小的遺傳模式為最優(yōu)的遺傳模式。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。使用在線軟件SHEsis［15］計算各SNP位點間的連鎖不平衡情況，用D’表示，D’=0時，表示SNP位點連鎖完全平衡，D’=1時，表示SNP位點連鎖完全不平衡，通常認為D’＞0.8時，SNP位點間存在強連鎖。構(gòu)建D’>0.8的SNP位點的單倍型，并用χ2檢驗比較病例組和對照組間單倍型頻率的差異。

2 結(jié)果

2.1 研究對象的基本特征

本研究共納入NSCLC患者425例，平均年齡（55.81±10.69）歲，男性293例，女性132例。病例組按病理學類型分為鱗癌患者153例，腺癌患者249例，腺鱗癌及其他類型肺癌患者23例；按臨床分期分為Ⅰ+Ⅱ期患者134例，Ⅲ+Ⅳ期患者291例。對照組438例，平均年齡（55.52±19.26）歲，男性312例，女性126例。病例組和對照組間的年齡和性別分布差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2 TNF-α基因5個SNP位點的等位基因及基因型頻率分析

本研究除rs1800630位點外，其余SNP位點的基因型在總病例組和對照組中的分布均符合哈迪-溫伯格平衡定律（P＞0.05），說明本研究的樣本是具有群體代表性的隨機樣本。

TNF-α基因啟動子5個SNP位點的等位基因和基因型頻率在NSCLC病例組和對照組間的比較見表1。結(jié)果顯示，TNF-α基因啟動子5個SNP位點的等位基因和基因型頻率在NSCLC病例組和對照組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。將病例組進一步按病理學類型分為鱗癌組、腺癌組、腺鱗癌及其他類型肺癌組，按臨床分期分為Ⅰ+Ⅱ期組和Ⅲ+Ⅳ期組，分別分析各病例亞組與對照組間的等位基因和基因型頻率差異，結(jié)果見表2（部分差異無統(tǒng)計學意義的結(jié)果未展示）。rs1799724位點的T等位基因在腺癌組中的頻率顯著高于對照組（P=0.010，OR=1.56，95%CI：1.11～2.19），其基因型頻率在腺癌病例組與對照組間差異也有統(tǒng)計學意義（P=0.026）。rs1800630（-863C>A）位點的A等位基因在腺鱗癌及其他類型肺癌組中的頻率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.013，OR=2.15，95%CI：1.16～3.96）。其余位點在病例分層分析比較中差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

表1 TNF-α基因啟動子5個SNP位點的等位基因和基因型頻率在NSCLC病例組和對照組間的比較Tab.1 The distribution of the 5 SNP sites in TNF-α gene promoter in NSCLC group and control group

表2 NSCLC病例分層分析TNF-α基因啟動子5個SNP位點與肺癌的相關性Tab.2 The stratified analysis of the association between the 5 SNP sites in TNF-α gene and NSCLC

2.3 遺傳模式分析TNF-α基因SNP位點與NSCLC的相關性

在NSCLC病例組和對照組的分析中發(fā)現(xiàn)，rs1799964位點的最優(yōu)遺傳模式為隱性模式，rs1800630位點的最優(yōu)遺傳模式為超顯性模式，rs1799724位點的最優(yōu)遺傳模式為顯性模式，rs1800629位點的最優(yōu)遺傳模式為隱性模式，rs361525位點因為只有2個基因型所以不能進行遺傳模式分析。在上述最優(yōu)遺傳模式中，NSCLC病例組和對照組之間的基因型頻率差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05，表3）。

表3 SNP位點在總NSCLC病例組和對照組中的遺傳模式分析Tab.3 The inheritance analysis of the SNP sites between total NSCLC group and control group

另外，對不同病例分層組與對照組間5個SNP的基因型頻率差異進行遺傳模式分析，在腺癌組和對照組的比較分析中，rs1799724的最優(yōu)遺傳模式為顯性模式，在顯性模式下攜帶T等位基因的個體（TT+CT）患肺腺癌的風險顯著升高（P=0.007，OR=1.66，95% CI：1.146～2.417，表4）。在其他類型肺癌組和對照組的比較分析中，rs1800630的最優(yōu)遺傳模式為邏輯加性模式。在邏輯加性模式下，其他類型肺癌組和對照組之間的基因型頻率差異有統(tǒng)計學意義（P=0.036，OR=1.818，95% CI：1.064～3.125，表5）。基因型2A/A-A/C可能與其他類型肺癌發(fā)生風險的增加有關。

表4 rs1799724在腺癌病例和對照組中的遺傳模式分析Tab.4 The inheritance analysis of rs1799724 between adenocarcinoma group and control group

表5 rs1800630在其他類型肺癌癥病例和對照組中的遺傳模式分析Tab.5 The inheritance analysis of rs1800630 between other pathological types and control group

2.4 TNF-α基因SNP位點連鎖不平衡分析

通過在線軟件SHEsis分析5個SNP位點在對照組中的連鎖不平衡，結(jié)果顯示，rs1799964分別與rs1799724、rs1800629、rs361525位點間存在連鎖不平衡，連鎖不平衡D’值分別為0.997、0.991、1.000。另外rs1799724與rs1800629位點間也存在連鎖不平衡，D’值為0.989（圖1）。

圖1 5個SNP位點在研究群體中的連鎖不平衡情況Fig.1 The linkage disequilibrium analysis of the 5 SNP sites

分別構(gòu)建單倍型rs1799964-rs1799724、rs1799964-rs1800629、rs1799964-rs361525、rs1799724-rs1800629，分別比較各單倍型（單倍型頻率>0.03）在總NSCLC病例組和對照組間的分布差異，結(jié)果顯示，各單倍型頻率在總NSCLC病例組和對照組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05，表6）。另外，分層分析不同病例亞組與對照組及不同病例亞組之間各單倍型的頻率差異，部分結(jié)果見表7，單倍型rs1799964Trs1800629G在Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組中的頻率顯著高于對照組（P=0.02，OR=1.46，95%CI：1.06～2.02）和Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組（P=0.038，OR=0.7，95% CI：0.50～0.98），而該單倍型頻率在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組和對照組間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；單倍型rs1799964C-rs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC 病例組中的頻率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組（P=0.047，OR=1.45，95%CI：1.00～2.09），而單倍型rs1799964Trs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組中的頻率顯著低于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組（P=0.047，OR=0.69，95% CI：0.48～1.00）；單倍型rs1799724T-rs1800629G頻率在腺癌組和對照組間的差異有統(tǒng)計學意義（P=0.048，OR=1.42，95% CI：1.00～2.01）。

表6 NSCLC病例組和對照組間的單倍型分布差異Tab.6 The haplotype analysis between NSCLC group and control group

表7 不同分期和不同類型的肺癌病例中的單倍型頻率比較（部分）Tab.7 The haplotype analysis between different clinical stages and pathological types and control groups (patial)

續(xù)表 7

3 討 論

慢性炎癥與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在相互作用，持續(xù)的慢性炎癥在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［2］。在一些類型的癌癥中，炎癥狀況先于惡性腫瘤的發(fā)展，在某些情況下，癌癥的發(fā)展驅(qū)動產(chǎn)生腫瘤促炎癥微環(huán)境［16］。腫瘤的炎癥微環(huán)境主要是由新生血管、淋巴細胞、成纖維細胞以及它們分泌產(chǎn)生的各種炎癥因子及細胞基質(zhì)等組成。腫瘤微環(huán)境中存在著大量的炎癥浸潤細胞，包括巨噬細胞、粒細胞、單核細胞和肥大細胞等。這些細胞分泌的炎癥因子是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，影響腫瘤的生物學進程。TNF-α是腫瘤炎癥微環(huán)境中一種重要的細胞因子，也是細胞因子調(diào)控網(wǎng)絡中的重要成員。研究［3］發(fā)現(xiàn)，TNF-α對腫瘤的作用有兩種截然不同的結(jié)局：不但可以殺傷腫瘤細胞，還可以促進腫瘤細胞的生長、浸潤，TNF-α不僅由巨噬細胞分泌，多種腫瘤細胞也會分泌，如B細胞淋巴瘤、卵巢上皮癌等。在腫瘤細胞中，TNF-α作為一種自分泌生長因子可誘導其他生長因子促進腫瘤細胞增殖、轉(zhuǎn)移、惡性轉(zhuǎn)化、血管生成等過程，從而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等過程中發(fā)揮重要作用［3，17］。早期研究［18］發(fā)現(xiàn)，TNF-α在體內(nèi)外均能直接殺傷腫瘤細胞或抑制腫瘤細胞的增殖，TNF與其受體TNFR1結(jié)合后進而結(jié)合TNFR相關死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（TNFR-associated death domain protein，TRADD）可誘導兩種完全不同的信號轉(zhuǎn)導途徑：①TNF與受體復合體識別并結(jié)合Fas相關死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（Fas-associated death domain protein，F(xiàn)ADD），從而激活Caspase 8和Caspase 3，誘導腫瘤細胞凋亡；② TNF與TNFR配體復合物可結(jié)合多種TNFR相關因子（TNFR-associated factor，TRAF），進而激活核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、Jun氨基末端激酶（Jun amino-terminal kinase，JNK）介導的信號通路，從而產(chǎn)生炎癥反應并促進細胞增殖。

崔力方等［4］研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α在腫瘤患者特別是預后較差的患者血清中含量明顯增高，并在多種癌癥組織中呈高表達。孫云暉等［19］發(fā)現(xiàn)，TNF-α在肺癌組織中的表達高于非肺癌組織，在Ⅲ～Ⅳ期中的表達高于Ⅰ～Ⅱ期，可能是因為癌癥患者持續(xù)的應激反應造成TNF-α表達量持續(xù)升高，然后又與巨噬細胞作用產(chǎn)生更多的TNF-α［20］。高表達的TNF-α又通過促進腫瘤血管生成和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達進而促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［4，21］。

本研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α基因啟動子區(qū)域5個SNP位點的等位基因頻率和基因型頻率在NSCLC組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學意義。進一步又對NSCLC病例組進行分層分析，結(jié)果顯示，腺癌組中rs1799724-T等位基因的頻率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.01，OR=1.56，95% CI：1.11～2.19），rs1799724的基因型頻率在腺癌組與對照組間差異也有統(tǒng)計學意義（P=0.026）。rs1800630-A等位基因在腺鱗癌及其他類型肺癌組中的頻率顯著高于對照組（P=0.013，OR=2.15，95% CI：1.16～3.96）。其余位點在病例分層分析比較中差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明同一基因中的多態(tài)性在不同病理學類型的同種疾病中發(fā)揮的作用不同。本研究還將強連鎖位點構(gòu)建了單倍型，并分析了不同單倍型在對照組與總NSCLC病例組、各病例亞組間的頻率差異。結(jié)果顯示，rs1799724Trs1800629G單倍型在腺癌組與對照組間的分差異有統(tǒng)計學意義（P=0.048，OR=1.42，95%CI：1.00～2.01），表明rs1799724-T可能是腺癌發(fā)生的風險性因素。另外，單倍型rs1799964Trs1800629G在Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組中的頻率顯著高于對照組（P=0.02，OR=1.46，95% CI：1.06～2.02）及Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組（P=0.038，OR=0.70，95% CI：0.50～0.98），而在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組和對照組間的差異無統(tǒng)計學意義。單倍型rs1799964C-rs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組中的頻率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組（P=0.047，OR=1.45，95% CI：1.00～2.09），而單倍型rs1799964T-rs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組中的頻率顯著低于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組（P=0.047，OR=0.69，95% CI：0.48～1.00），推測rs1799964T與其他位點的聯(lián)合作用可能與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展相關。

Shih等［22］研究發(fā)現(xiàn)，在中國臺灣省人群中，rs1800629-AA/GA基因型的攜帶者較GG基因型攜帶者的NSCLC的患病風險顯著增高（OR=3.75，95% CI：2.38～5.92，P＜0.0001）而rs361525-AA/GA基因型攜帶者的NSCLC的患病風險顯著低于GG基因型攜帶者（OR=0.26，95%CI：0.13～0.50，P＜0.0001）。Flego等［12］研究發(fā)現(xiàn)，rs361525-G等位基因和GG基因型與NSCLC相關。Kaabachi等［23］研究發(fā)現(xiàn)，在突尼斯人群中，rs1800629和rs361525可能與NSCLC的患病風險增加相關。本研究未發(fā)現(xiàn)rs1800629及rs361525與NSCLC的關聯(lián)性，這可能是不同人群間遺傳背景的差異造成的。

有研究［24-25］顯示，TNF-α基因啟動子區(qū)域的一些SNP位點變異與TNF-α基因的轉(zhuǎn)錄起始相關，這些SNP位點的堿基差異可影響T N F-α 的表達水平改變。此外，有研究［26-27］顯示，rs1800629（-308G>A）和rs361525（-238G>A）堿基的改變與轉(zhuǎn)錄活性降低顯著相關。rs17999724（-857C>T）位點的C堿基變異為T堿基后，TNF-α基因啟動子區(qū)域可結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子OCT1從而導致TNF-α表達量的增加［28］。攜帶rs 17999724-T、rs1800630-A和rs1799964-C變異的TNF-α基因啟動子活性均高于原本的啟動子（rs1799724-C、rs1800630-C和rs1799964-T）活性［29］。另外，有研究［3，17］發(fā)現(xiàn)，這5個SNP位點與多種癌癥的發(fā)生有關聯(lián)，如乳腺癌、宮頸癌、口腔癌、肺癌及頭頸腫瘤等。還有研究［30］發(fā)現(xiàn)，rs1799724-T等位基因是宮頸癌發(fā)生的風險因素，rs1799724-TT基因型與胃癌的發(fā)生相關［31］；而Landi等［32］研究發(fā)現(xiàn)，rs1799724位點的多態(tài)性與結(jié)腸癌無關；Danforth等［33］研究發(fā)現(xiàn)，rs1799724位點的多態(tài)性與前列腺癌無關。Xu等［34］研究發(fā)現(xiàn)，rs1800629位點與中國人群胃癌相關；Dantas研究［35］發(fā)現(xiàn)，rs1800629與巴西人群胃癌相關，表明TNF-α基因啟動子區(qū)域的多態(tài)性位點與癌癥的關聯(lián)性在不同群體中具有很強的異質(zhì)性。

還有研究［36］發(fā)現(xiàn)，TNF-α基因rs1799724位點的T等位基因和MPO基因rs2333227位點的G等位基因單獨作用于人體時，可能與肺癌發(fā)生風險的增加有關，但它們相互作用時，這對“風險”組合與肺癌沒有產(chǎn)生關聯(lián)，可能是因為攜帶rs1799724位點T等位基因能表達較高的TNF-α，而攜帶rs2333227位點G等位基因會降低MPO基因的表達，因此，高產(chǎn)量的TNF-α可以抵消MPO高產(chǎn)的不利影響。另外，TNF-α基因1799724位點CT和TT基因型在吸煙人群中相比不吸煙人群有更高的肺癌患病風險［36］，證明肺癌的發(fā)生、發(fā)展是多種因素共同作用的結(jié)果，既與吸煙、環(huán)境等因素有關，也與自身遺傳因素有關。然而自身遺傳因素復雜多樣，并且在不同種族、不同人群中也不一樣。本研究選取的5個SNP位點位于TNF-α基因啟動子區(qū)域，啟動子區(qū)域的SNP位點可能會通過影響TNF-α基因轉(zhuǎn)錄中和轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控起到影響基因表達的作用，進而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。但本研究未能對研究對象的血清TNF-α水平進行檢測，從而分析TNF-α基因啟動子區(qū)域基因多態(tài)性與基因表達水平的關聯(lián)性，這是本研究的缺陷。今后要充分闡明TNF-α基因多態(tài)性位點與肺癌的相關性以及在肺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，還需要對基因多態(tài)性位點的功能進行驗證，并綜合不同人群樣本的研究結(jié)果及綜合多種影響因素進行系統(tǒng)性分析。