周丹，李惠貞，黃濤，張德明，谷大偉

（深圳市中醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518033）

0 引言

女性生殖道感染是常見(jiàn)婦科病，常因沙眼衣原體（CT）、淋病奈瑟菌（NG）、生殖支原體（MG）、解脲脲原體（UU）等病原微生物感染所致?？赏ㄟ^(guò)性行為、血源、母嬰等方式傳播，因女性生殖道較為脆弱，感染可致婦科腫瘤、流產(chǎn)、不孕不育、月經(jīng)不調(diào)等嚴(yán)重并發(fā)癥，危害女性健康[1]。實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（SAT）融合核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)，具備靈敏度高、特異性高、樣本被污染風(fēng)險(xiǎn)低等特點(diǎn)，可迅速、準(zhǔn)確地檢測(cè)各類(lèi)病原體[2]。本次研究通過(guò)對(duì)本院近一年女性生殖道感染患者進(jìn)行SAT 檢測(cè)，以觀察生殖道感染患者中CT、NG、MG、UU4 類(lèi)病原體感染情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019 年1 月至2020 年2 月我院就診的生殖道感染女性患者的宮頸分泌物或尿液標(biāo)本共95份?；颊?0～55 歲，平均（37.63±8.32）歲；病程4～17d，平均（8.74±1.36）d。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合生殖道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)者[3]；②伴有尿痛、腹痛、白帶異常增多等生殖道感染臨床癥狀；③經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理會(huì)批準(zhǔn)且患方簽署知情同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：近1周內(nèi)有性生活史者。

1.2 樣本采集方法

由婦科醫(yī)生采用酒精棉球于宮頸表面擦拭清潔消毒后，使用無(wú)菌棉棒伸入宮頸內(nèi)旋轉(zhuǎn)1 周并停留10s 后收集宮頸分泌物，放入生理鹽水中密封。尿液標(biāo)本由患者自行留取送檢。

1.3 試劑及儀器

CT、NG、MG、UU 核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒由上海朗賦實(shí)業(yè)有限公司提供[國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2014 第3400925 號(hào)]，采用羅氏cobas z480 熒光定量PCR 儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)方法

參照試劑盒說(shuō)明書(shū)設(shè)定陰性及陽(yáng)性對(duì)照，將樣本與核酸提取物混勻，保持溫度60℃放置5min，于室溫靜置10min 后放于磁珠分離器上5min，洗滌兩次后保留磁珠與RNA 結(jié)合體并加入核酸反應(yīng)液，并移至PCR 儀中，設(shè)定溫度60℃放置10min 后降溫至42℃放置5min，并添加42℃的SAT 酶液，保持溫度，實(shí)施恒溫?cái)U(kuò)增40min。選擇羧基熒光素作為熒光標(biāo)記，設(shè)定溫度42℃，每分鐘收集1 次熒光信號(hào)，依照實(shí)時(shí)獲得的熒光信號(hào)出現(xiàn)的時(shí)間及強(qiáng)度得到檢測(cè)的病原體結(jié)果。

1.5 觀察指標(biāo)

觀察以上4 種病原體陽(yáng)性檢出率及其混合感染率，并分析比較不同臨床診斷及不同年齡段患者中各病原體檢出率結(jié)果差異。

1.6 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

2.1 4 種病原體陽(yáng)性檢出率比較

95 例患者中，4 種病原體均有陽(yáng)性檢出率，單純一種病原體感染64 例（67.37%），其中UU29 例（30.53%），CT16 例（16.84%），NG11 例（11.58%），MG8 例（8.42%）；混合2 種或3 種病原體感染患者有31 例（32.63%）。

2.2 4 種病原體混合感染率比較

在31 例混合2 種或3 種病原體感染中，CT+UU混合感染占比最高，共計(jì)14 例（14.74%），詳見(jiàn)表1。

表1 4 種病原體混合感染率比較[n（%），n=95]

2.3 不同診斷患者中各病原體檢出率比較

在不同臨床診斷中，診斷為陰道炎患者中UU 檢出率顯著高于宮頸炎及盆腔炎，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），MG、NG 及CT 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同診斷患者中各病原體檢出率比較[n（%）]

2.4 不同年齡段患者中各病原體檢出率比較

在不同年齡段中，年齡段在36～45 歲之間女性生殖道感染者中UU 陽(yáng)性檢出率顯著高于其他年齡段（P<0.05），CT、NG 及MG 檢出率比較無(wú)明顯差異（P>0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同年齡段患者中各病原體檢出率比較[n（%）]

3 討論

女性生殖道感染可增加HPV 及HIV 入侵的風(fēng)險(xiǎn)，還將影響其生育能力，嚴(yán)重威脅女性生命安全及心理健康[4]。給予快速、精確的診斷以便于患者及時(shí)得到相關(guān)治療，是目前臨床工作重要目標(biāo)。

既往臨床檢測(cè)生殖道感染病原體常采取陰道分泌物或?qū)m頸分泌物直接涂片，但缺乏敏感度及特異性，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度較低[5]。微生物培養(yǎng)法作為感染性疾病診斷金標(biāo)準(zhǔn)雖具有較高敏感度及特異性，但耗時(shí)長(zhǎng)且成本高，不適宜臨床應(yīng)用[6]。聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)則是對(duì)病原體DNA 進(jìn)行檢測(cè)，但因DNA 穩(wěn)定性較高，在檢測(cè)時(shí)可出現(xiàn)假陽(yáng)性，影響臨床診斷[7]。SAT 技術(shù)將患者標(biāo)本放置于RNA 保存液中，可防止RNA 降解，通過(guò)磁珠提取病原體RNA，將具有活性的病原體RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 并與帶有熒光標(biāo)記的探針特異性結(jié)合，通過(guò)儀器可直觀檢測(cè)病原體RNA擴(kuò)增循環(huán)情況，通過(guò)陽(yáng)性及陰性對(duì)照，提高了檢測(cè)的靈敏度及特異性，可同時(shí)對(duì)CT、NG、MG、UU 進(jìn)行檢測(cè)，在減少污染的同時(shí)縮短檢測(cè)耗時(shí)[8]。

本次研究結(jié)果顯示95 例患者中，4 種病原體均有陽(yáng)性檢出率，單純一種病原體感染64 例（67.37%），其中UU29 例（30.53%），CT16 例（16.84%），NG11例（11.58%），MG8 例（8.42%）；混合2 種或3 種病原體感染患者有31 例（32.63%）；在31 例混合2種或3 種病原體感染中，CT+UU 混合感染占比最高，共計(jì)14 例（14.74%）；診斷為陰道炎患者中UU 檢出率顯著高于宮頸炎及盆腔炎，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，MG、NG 及CT 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說(shuō)明UU 是女性生殖道感染的主要病原體，且主要分布于患者陰道。分析原因認(rèn)為UU 依靠自身攜帶的尿素酶，依靠分解尿素為其提供代謝所需能源。由于女性生殖道生理特征，UU 更易高度定居于女性陰道，且感染者多因無(wú)自覺(jué)癥狀而延誤治療，導(dǎo)致女性生殖道感染患者中UU 陽(yáng)性檢出率較高[9]。本次研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)年齡段在36～45 歲之間女性生殖道感染者中UU 陽(yáng)性檢出率顯著高于其他年齡段，CT、NG及MG 檢出率比較無(wú)明顯差異。這表明36～45 歲女性是生殖道感染高危人群，這可能因此年齡段人群處于性活躍期，且因相關(guān)健康知識(shí)缺乏，不注重性生活前后生殖道的清潔，從而導(dǎo)致病原體侵入感染。因此，醫(yī)務(wù)工作者應(yīng)全面開(kāi)展女性生殖道感染健康宣教，此外女性也應(yīng)注意保持外陰清潔，性生活前后徹底清洗外陰，定期檢查，避免過(guò)早不潔性交[10-12]。

綜上所述，SAT 技術(shù)在女性生殖道感染中具有較好的應(yīng)用效果，耗時(shí)短、成本低、污染小，具有較高的臨床推廣價(jià)值。