王 鵬

（浙江國邦藥業(yè)有限公司 浙江·紹興 312369）

膠囊是臨床中常用的固體劑類型，膠囊實際由兩部分組成，分別是膠囊外衣和內(nèi)部填充物，內(nèi)部填充物為藥物和輔助填充物的混合物，其中內(nèi)部填充物是膠囊藥理活性的來源，膠囊外衣則是膠囊制劑的外部包裝物，一般不具備藥理作用，是為了維持內(nèi)部填充物混合狀態(tài)或?qū)⑺幬锼椭撂囟ú课坏乃幬镙d體。

膠囊外衣通常由明膠和輔助料制作而成，分為帽和體兩部分，內(nèi)部具有一定的容納空間，可以將活性物質(zhì)填充在內(nèi)，內(nèi)部填充物可以為固體、晶體、粉末、藥片、半固體等物質(zhì)。膠囊外衣一般無藥理活性，主要負(fù)責(zé)輸送內(nèi)部活性物質(zhì)，是一種較為穩(wěn)定的、可靠的藥物包裝、藥物載體。一方面，膠囊外衣能夠?qū)⑻囟ㄙ|(zhì)量的活性物質(zhì)容納在內(nèi)，實現(xiàn)藥品的定量、定容制備，便于藥物的出售和服用，另一方面則是相較于無外衣的藥片、粉末而言，膠囊更容易通過水送服，藥物通過食道的過程中不會對患者上消化道產(chǎn)生刺激。此外通過調(diào)整膠囊外衣成分可以控制外衣崩解部位和崩解時間，從而實現(xiàn)高效用藥。

大部分藥品對保存條件有特殊要求，其中避光保存是較為常見的藥物保存條件，因此大部分膠囊在制作時會加入人工合成色素成分以提高膠囊的遮光能力，從而避免內(nèi)部活性成分在光照下發(fā)生分解，最大化保留藥效。但膠囊畢竟會通過口服的方式進入人體消化系統(tǒng)，人工色素的少量攝入不會對健康造成影響，但大量的攝入可引起代謝不足導(dǎo)致人工色素在人體內(nèi)的堆積，從而對人體健康造成不利影響。因此我們要做好膠囊外衣人工色素的檢驗與測定工作，完善膠囊的合格檢驗與鑒定，實現(xiàn)藥品安全。

基于上述背景，本文采用高效液相色譜法對膠囊人工合成色素含量進行檢驗和測定，以期為相關(guān)藥物研究、藥品制備和藥品管理工作提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與試劑

1.1 材料

從醫(yī)院藥品庫中抽調(diào)一批藥用明膠空心膠囊外衣為本次研究的研究材料。應(yīng)用于研究前該批空心膠囊均處于正常保存狀態(tài)下，外包裝密封良好，確保研究時為首次拆封。

1.2 試劑

色素試劑準(zhǔn)備如下：檸檬黃，純度90；誘惑紅，純度83；胭脂紅，純度70；亮藍(lán)，純度97.3；赤蘚紅，純度91.6；莧菜紅，純度93.6；色素試劑均為藥用膠囊人工合成常用色素標(biāo)準(zhǔn)品，試劑均為首次拆封。同時準(zhǔn)備色譜研究用甲醇。所有試劑均在分析提純后備用。

1.3 儀器設(shè)備

液相色譜儀型號：SupersilODS-B；色譜柱：4.6mm*250mm（5m）；流動相：0.02mmol/L；A相：乙酸銨溶液；B相：甲醇；梯度洗脫：0min，90%A 相、10%B相；4min，80%A相、20%B 相；5min，65%A相、35%B相；15min，2%A相、98%B相；波長：254nm；柱溫：35；流速：1.0ml/min；進樣量 10l。

1.4 溶液制備

1.4.1 對照溶液

對照品制備，稱取各類型色素試劑樣品5mg，使用10ml容量瓶盛放，加水稀釋至刻度線并搖勻，取上層溶液，加水稀釋成50g/ml的對照樣品，備用。

1.4.2 供試溶液

精確稱取空心明膠膠囊0.5g，加入10ml清水，使用檸檬酸鈉稀釋為6pH溶液，60℃恒溫水浴。同時精確稱取2g聚酰胺粉，加入10ml清水調(diào)成粥狀后與水浴樣品進行混合，漏斗過濾后69℃溫水沖洗，然后依次使用甲酸甲醇溶液（4:6）進行10ml、5ml、5ml沖洗，加入清水調(diào)節(jié)為pH7溶液，再使用乙醇-氨水-水（7:2:1）進行洗滌，最后收集清洗液并蒸發(fā)至近干，加入適當(dāng)水振蕩溶解后擴容至10ml，呈于容量瓶后搖勻，備用。

2 實驗方法

2.1 專屬實驗

以水為對照溶液，掃描對照溶液進行對比對照觀察，波長范圍設(shè)定值在200-400nm，直接觀察人工色素對紫外吸收情況；同時取10ml對照溶液和10l明膠溶液進行對比對照觀察，波長設(shè)定為200-400nm，通過觀察和對比分析明膠對色譜測定結(jié)果的影響。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

取6種不同人工色素對照溶液分別稀釋為1、5、10、25、50、75、100g/ml的溶液，取10l進行液相色譜檢測，根據(jù)檢測結(jié)果建立主藥峰面積與濃度的線性回歸圖像并依據(jù)圖像繪制相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中采用3倍噪聲極限作為標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 回收率實驗

回收率=（實測量/加入量）*100%。具體操作如下：取適量人工合成色素對照品按照供試溶液配置方法配置成 1、50、100g/ml溶液，分別于不同濃度取樣品，高效液相色譜檢測合成色素回收水平。

2.4 精密度實驗

2.5 穩(wěn)定性實驗

在精密度實驗的基礎(chǔ)上，分別于配置后0h、12h、24h、48進樣，分別進行高效液相色譜檢測，評價色素溶液的穩(wěn)定性。

3 結(jié)果

3.1 色譜條件和波長

以水為對照，掃描常用人工合成色素溶液波長，于200-400nm進行掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本實驗中所選的常用的六種要用人工合成色素在254nm左右的信號響應(yīng)值最佳，因此研究中色譜柱波長鎖定為254nm。

同時就所選波長進行檢驗，取對照溶液和供試溶液，結(jié)果顯示人工合成色素分離度較高，分離度均在1.5以上，滿足研究所需。

3.2 線性范圍

根據(jù)主藥峰面積和濃度的線性回歸關(guān)系，提示人工合成色素在1-100g/ml內(nèi)線性良好，因此研究色譜柱線性范圍選定為1-100g/ml，同時就檢出限進行觀察，結(jié)果提示人工色素的檢出限為0.05g/ml。

3.3 回收率

根據(jù)回收率實驗設(shè)計，分別配置了低中高三種濃度供試溶液，根據(jù)液相色譜儀檢測結(jié)果，提示三種濃度供試溶液中人工色素的回收率均在99%以上，RSD小于5%，提示該法回收情況良好，符合研究需求。

3.4 精密度檢驗

根據(jù)反復(fù)檢驗和評價，液相色譜儀結(jié)果提示通過高效液相色譜法檢測膠囊人工色素水平準(zhǔn)確率較高，標(biāo)準(zhǔn)偏差值均在2%以內(nèi)，提示該法測定膠囊人工色素精密度較高，符合研究需求。

3.5 穩(wěn)定性

分別就3種不同的濃度溶液在不同時間內(nèi)的穩(wěn)定性進行色譜分析，結(jié)果顯示人工合成色素溶液在48h內(nèi)的穩(wěn)定性均較良好，符合研究需求。

3.6 測定結(jié)果

根據(jù)測定結(jié)果，明膠空心膠囊中有明顯的色素殘留，各種色素殘留情況如表1所示，其中赤蘚紅是最容易殘留的人工合成色素，莧菜紅則是殘留濃度最高的人工合成色素。

表1：膠囊中不同人工合成色素含量

4 討論

膠囊制劑是臨床中使用頻率最高的藥物類型，膠囊的外衣既是膠囊的包裝物也是保護膠囊內(nèi)藥物活性的保護材料，在藥物藥效發(fā)揮、藥物保存中均有著重要作用。我國臨床中所用膠囊大多為明膠膠囊，明膠是一種天然的可食用分子增稠劑，因此口服后無毒副作用，被廣泛應(yīng)用于藥品外衣。但膠囊外衣不僅僅有明膠一種成分，通常還會添加人工合成色素賦予膠囊顏色以遮蔽光照達到避光保存藥物的目的。但是人工合成色素中很大一部分并不能被人體吸收或代謝，持續(xù)攝入可對人體健康造成不利影響，因此膠囊人工色素殘留殘留問題一直是食品藥品監(jiān)督部門關(guān)注的重點。

人工色素屬于化工產(chǎn)品，其是經(jīng)過一系列復(fù)雜的鹵化反應(yīng)、硝化反應(yīng)等一系列郵寄化合反應(yīng)制作而來，其不僅僅能夠為食藥品添加顏色，還具有表層保護的功能，是品種最常用的添加劑類型。但是人工合成色素與天然色素相比，其進入人體循環(huán)后容易發(fā)生雜質(zhì)殘留，難以被人體吸收和代謝，會隨著時間推移逐漸累積，當(dāng)人工合成色素在人體中累積到一定程度時就會對人體正常代謝產(chǎn)生不利影響，長時間服用還可成為心腦血管疾病的誘發(fā)因素。

本研究旨在通過高效液相色譜法對膠囊人工合成色素殘留情況進行測定，一方面是檢測常見藥用空心膠囊色素殘留情況，為膠囊制劑制備和藥品管理工作提供數(shù)據(jù)參考，另一方面則是評價高效液相色譜法在膠囊人工合成色素殘留檢測中的有效性和可靠性，為藥用膠囊人工合成色素檢測工作提供經(jīng)驗參考，以促進我國食品藥品監(jiān)督工作質(zhì)量提升。在研究中，應(yīng)用清水、色素對比液和膠囊供試液進行高效色譜分析，在進行供試液色譜分析前先就高效液相色譜法對人工合成色素的監(jiān)測情況進行評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高效液相色譜法在人工合成色素檢測中的精確度、回收率、線性范圍、穩(wěn)定性均較好，符合研究需要。最后就空心明膠膠囊的色素殘留進行檢測，結(jié)果提示膠囊色素殘留中赤蘚紅是最容易殘留的人工合成色素，莧菜紅則是殘留濃度最高的人工合成色素。

本研究證明了，高效液相色譜法在藥用膠囊人工合成色素測定中應(yīng)用效果良好，操作簡單、高效便捷、準(zhǔn)確有效，測定結(jié)果可信度、準(zhǔn)確度均較高。