沈麗艷，楊玉婷，高 歡，冉津銘，張春勇，安清聰，曹振輝，潘洪彬

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201；2.達(dá)州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 經(jīng)濟(jì)管理系，四川 達(dá)州 635000)

中國(guó)是家禽養(yǎng)殖大國(guó)，肉雞產(chǎn)業(yè)是中國(guó)畜牧業(yè)中現(xiàn)代化、規(guī)?；?、集約化、組織化和市場(chǎng)化程度最高的產(chǎn)業(yè)之一[1]。環(huán)境溫度是影響肉雞生長(zhǎng)發(fā)育的因素之一，據(jù)報(bào)道，熱應(yīng)激降低肉雞采食量、平均日增質(zhì)量及飼料轉(zhuǎn)化效率，而冷應(yīng)激增加肉雞采食量和死亡率，降低肉雞機(jī)體細(xì)胞免疫性能，引起肉仔雞腹水癥和疾病發(fā)病率的增加[2]。腸道菌群作為機(jī)體的重要組成部分，參與家禽的生長(zhǎng)發(fā)育、消化吸收、營(yíng)養(yǎng)免疫、生物拮抗及其各種功能和結(jié)構(gòu)的發(fā)生、發(fā)展及衰退的全過(guò)程[3-4]。其中，回腸是吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要部位，以兼性和微嗜氧性細(xì)菌為主，以乳酸桿菌科最為豐富[5]。研究發(fā)現(xiàn)：環(huán)境溫度是影響家禽腸道菌群的重要因素之一，隨著環(huán)境溫度的改變，家禽腸道正常菌群也會(huì)受到影響[6]。WANG 等[7]發(fā)現(xiàn)：高溫顯著影響肉雞回腸菌群的α 和β 多樣性，主要增加回腸微生物的物種豐富度；BURKHOLDER 等[8]使用變性梯度凝膠電泳法發(fā)現(xiàn)：高溫下肉雞腸道微生物群落結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。SHI等[9]發(fā)現(xiàn)：熱應(yīng)激導(dǎo)致盲腸厚壁菌門的豐度增加，擬桿菌門的豐度降低。CHEVALIER 等[10]研究發(fā)現(xiàn)：小鼠長(zhǎng)期暴露于寒冷環(huán)境(6 ℃)會(huì)明顯改變腸道中細(xì)菌的組成。然而，目前研究多集中在短期環(huán)境溫度變化(急性冷、熱應(yīng)激)對(duì)肉雞腸道微生物組成的影響，而長(zhǎng)期的相對(duì)環(huán)境溫度變化對(duì)肉雞腸道微生物的影響則鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過(guò)研究長(zhǎng)期相對(duì)高溫和相對(duì)低溫環(huán)境對(duì)肉雞回腸微生物多樣性的影響，以期為環(huán)境溫度通過(guò)腸道微生物影響肉雞健康提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)與管理

1.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

300 只1 日齡健康艾維茵肉仔雞(湖南順成養(yǎng)雞專業(yè)合作社)隨機(jī)分為3 組，每組100 只，NRC無(wú)抗日糧兩階段飼喂至42 d，以北京畜禽育種公司推薦的AV500 肉雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)的溫度控制參數(shù)為對(duì)照，分為高溫組(HI 組)、對(duì)照組(CI組)和低溫組(LI 組)，各組的初始溫度分別為36.5、33.5 和30.5 ℃，溫度隨日齡平行遞減。與對(duì)照組相比，高、低溫組每天溫差均為3 ℃，至42 d 各組分別降至22、19 和16 ℃，其他飼養(yǎng)條件一致。各組實(shí)際控制溫度變化見(jiàn)表1。

表1 雞舍實(shí)際溫度變化Tab.1 Change of temperature in chicken breeding ℃

1.1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院畜禽環(huán)境研究所家禽實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行，雞舍為7.20 m×3.50 m×3.50 m，共3 棟，稻殼墊料地面平養(yǎng)，每棟雞舍均為自動(dòng)控溫和通風(fēng)，并配有4 個(gè)槽式給料器和4 個(gè)自動(dòng)供水器，飼養(yǎng)過(guò)程中光照時(shí)間管理為：第1 天為24 h 光照；第2～8 天為23～18 h 光照；第9～21 天為12 h 光照；第22～35 天為18 h 光照；第36～42 天為18～23 h，當(dāng)體質(zhì)量＜160 g(1～8 d)時(shí)，光照強(qiáng)度為30～60 lx；當(dāng)體質(zhì)量≥160 g(9～42 d)時(shí)，光照強(qiáng)度為5～10 lx。相對(duì)濕度管理為：第1～7 天為30%～50%，第8～21 天為40%～60%，第22～42 天為50%～70%。肉仔雞按常規(guī)管理，自由采食、自由飲水。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集

飼養(yǎng)至第42 天，隨機(jī)選取肉雞36 只(12 只/組)屠宰。迅速采集回腸食糜，凍存管液氮保存，用于微生物總DNA 提取和PCR 擴(kuò)增。

1.2.2 回腸微生物總DNA 的提取和PCR 擴(kuò)增

每只雞取回腸食糜樣本(100±1) mg，采用QIAamp?Fast DNA Stool Mini Kit 方法提取細(xì)菌總DNA。用核酸濃度檢測(cè)儀檢測(cè)DNA 濃度后，于-80 ℃保存。

1.3 生物信息學(xué)分析

1.3.1 OTU 聚類

在97%相似度下利用Usearch 序列分析軟件對(duì)Clean Reads 進(jìn)行OTU 聚類分析，根據(jù)每個(gè)回腸食糜樣品中聚類獲得的OTU 在該樣品的豐度，計(jì)算出3 組間共有和特有的OTU 數(shù)量。

1.3.2 α 多樣性分析

α 多樣性包括Chao1、Observed species、PDwhole tree、Shannon 和Simpson 指數(shù)，利用QIIME[11-12]軟件計(jì)算樣品的α 多樣性指數(shù)的值，并作出相應(yīng)的稀釋曲線。根據(jù)1 組n值(一般為1 組小于總序列數(shù)的等差數(shù)列)與其相對(duì)應(yīng)的α 多樣性指數(shù)的期望值作出曲線，并作出各樣品α 多樣性指數(shù)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表[13]。

1.3.3 β 多樣性分析

β 多樣性是用來(lái)比較1 對(duì)樣品在物種多樣性方面存在的差異大小。unifrac 是通過(guò)利unifrac是通過(guò)利用系統(tǒng)進(jìn)化的信息來(lái)比較樣品間的物種群落差異，分為加權(quán)unifrac (weighted unifrac)與非加權(quán)unifrac (unweighted unifrac)兩種；其中，加權(quán)unifrac 考慮了序列的豐度，非加權(quán) unifrac不考慮序列豐度。MRPP 組間差異分析是用于分析組間微生物群落結(jié)構(gòu)的差異是否顯著的一種分析方法[14]。相似性Anosim 分析是一種非參數(shù)檢驗(yàn)，用來(lái)檢驗(yàn)組間(兩組或多組)的差異是否顯著大于組內(nèi)差異，從而判斷分組是否有意義[15]。

1.3.4 物種豐度與分類統(tǒng)計(jì)

從各個(gè)OTU 中挑選出豐度最高的1 條序列，作為該OTU 的代表序列；將該代表序列與已知物種的16S 數(shù)據(jù)庫(kù)(RDP，http://rdp.cme.msu.edu)進(jìn)行比對(duì)，從而對(duì)每個(gè)OTU 進(jìn)行物種歸類。根據(jù)物種注釋情況，統(tǒng)計(jì)每個(gè)樣品注釋到各分類水平(門、綱、目、科和屬)上的序列數(shù)量。根據(jù)物種注釋結(jié)果，分別在各分類水平上對(duì)各個(gè)樣品作物種profiling 相應(yīng)的柱狀圖。

1.3.5 LDA Effect Size 分析

LDA Effect Sizee (LEfSe)分析[16]采用線性判別分析估算每個(gè)組分(物種)豐度對(duì)差異效果影響的大小，找出對(duì)樣品劃分產(chǎn)生顯著性差異影響的群落或物種。

1.3.6 功能注釋與差異表達(dá)分析

(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)京都基因和基因組百科全書(shū)，http://www.genome.jp/kegg)是基因組破譯方面的公共數(shù)據(jù)庫(kù)[17]。該數(shù)據(jù)庫(kù)是系統(tǒng)分析基因功能、聯(lián)系基因組信息和功能信息的大型知識(shí)庫(kù)。利用16S rRNA 基因和參考序列數(shù)據(jù)庫(kù)，應(yīng)用PICRUSt 軟件預(yù)測(cè)微生物群落功能[18]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2019 進(jìn)行整理，使用SPSS 22.0 軟件，對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)α 多樣性和微生物區(qū)系豐度進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。對(duì)于厚壁菌門/擬桿菌門(F/B)的比值，根據(jù)厚壁菌門和擬桿菌門在各組每個(gè)生物學(xué)個(gè)體中的相對(duì)豐度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

為評(píng)估優(yōu)勢(shì)屬與KEGG 途徑之間的相關(guān)性，在GraphPad Prism 7.0 中執(zhí)行Spearman 分析[19]，P＜0.05 被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=12)。

2 結(jié)果與分析

2.1 OTU 聚類分析

如圖1 所示：HI、CI 和LI 組分別獲得968、968 和1 241 個(gè)OTU；3 組共有的OTU 數(shù)量為543 個(gè)，其占比分別為56.10%、56.10%和43.76%；各組特有的OTU 數(shù)量分別為192、139 和429 個(gè)，各占19.83%、14.36%和34.57%。

圖1 組間OTU 分布Venn 圖)Fig.1 Venn diagram of OTU distribution between groups

2.2 α 多樣性分析

如表2 所示：與CI 組相比，HI 組Observed species、Shannon 和Simpson 指數(shù)顯著升高，LI組Shannon 和Simpson 指數(shù)顯著升高(P＜0.05)。

表2 α 多樣性分析Tab.2 α diversity analysis

2.3 β 多樣性分析

如表3 和圖2 所示：基于UniFrac 分析利用系統(tǒng)進(jìn)化的信息比較組間的物種群落差異，在考慮物種豐度的情況下，A=0.096，δe=0.46＞δo=0.42，R=0.188，P=0.001，組間微生物群落結(jié)構(gòu)差異顯著；在不考慮物種豐度的情況下，A=0.041，δe=0.62＞δo=0.60，R=0.163，P=0.002，組間微生物群落結(jié)構(gòu)差異顯著。這表明組間差異顯著大于組內(nèi)差異，分組有意義。

圖2 回腸微生物16S rRNA 樣品的組間Anosim 相似性指數(shù)分析圖)Fig.2 Analysis of Anosim similarity index between groups of ileum microube 16S rRNA

表3 物種MRPP 組間差異分析Tab.3 Analysis of differences between species MRPP groups

2.4 回腸食糜微生物物種豐度與分類統(tǒng)計(jì)

如表4 所示：與CI 組相比，HI 組厚壁菌門和藍(lán)細(xì)菌/葉綠體的相對(duì)豐度分別增加29.47%和0.81%，F(xiàn)/B的比值增加7.8%，擬桿菌門的相對(duì)豐度降低27.82% (P＜0.05)；LI 組厚壁菌門的相對(duì)豐度增加11.16%，F(xiàn)/B的比值降低0.11% (P＞0.05)。

表4 肉雞回腸微生物門水平組成及差異分析Tab.4 Composition and difference analysis of ileum microbial at phylum levels in broilers

如表5 所示：與CI 組相比，HI 組乳酸菌屬和曲霉菌屬的相對(duì)豐度分別增加31.87%和1.59%；LI 組梭菌屬XI和志賀氏大腸桿菌屬的豐度分別降低28.7%和9.98%，貪噬菌屬和短波單胞菌屬的相對(duì)豐度分別增加3.69%和2.08% (P＜0.05)。

表5 肉雞回腸微生物屬水平組成及差異分析Tab.5 Composition and difference analysis of ileum microbial at genus levels in broilers

2.5 組間回腸食糜微生物顯著性差異分析

如圖3 所示：在門水平，LI 組中疣微菌門和螺旋體門顯著富集；HI 組中厚壁菌門、藍(lán)細(xì)菌/葉綠體顯著富集。在綱水平，疣微菌綱等2 個(gè)綱在LI 組中顯著富集；桿菌綱等4 個(gè)綱在HI 組中顯著富集。在目水平，疣微菌目等3 個(gè)目在LI 組中顯著富集；乳桿菌目等5 個(gè)目在HI 組中顯著富集。在科水平，CI 組中消化鏈球菌科顯著富集；伯克氏菌科等6 個(gè)科在LI 組中顯著富集；乳酸桿菌科等18 個(gè)科在HI 組中顯著富集。在屬水平，梭菌屬XI等3 個(gè)屬在CI 組中顯著富集；潘多拉菌屬等16 個(gè)屬在LI 組中顯著富集；乳酸菌屬等23 個(gè)屬在HI 組中顯著富集。

圖3 CI、HI 和LI 組回腸微生物L(fēng)DA 值分布柱狀圖)Fig.3 LDA value distribution map of CI,HI and LI groups ileum microbiota

2.6 回腸食糜微生物功能注釋及組間差異分析

如圖4 所示：CI 組在L3 層級(jí)顯著富集到的信號(hào)通路為轉(zhuǎn)錄機(jī)制。LI 組在L3 層級(jí)顯著富集到的信號(hào)通路分別為乙醛酸和二羧酸代謝、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、氧化磷酸化、萘降解、C5 支化二元酸代謝、過(guò)氧物酶體、脂質(zhì)生物合成蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)折疊和相關(guān)加工、PPAR 信號(hào)通路、多環(huán)芳烴降解、生物素代謝、脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路、細(xì)胞分裂。HI 組在L3 層級(jí)顯著富集到的信號(hào)通路分別為DNA 修復(fù)和重組蛋白、磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)PTS、嘌呤代謝、復(fù)制重組與修復(fù)蛋白、核糖體生物合成、染色體、氨基酰基tRNA 的生物合成、光合作用的蛋白質(zhì)、光合作用、丙酮酸代謝、堿基切除修復(fù)、四環(huán)素的生物合成、RNA 聚合酶、D-丙氨酸代謝、霍亂弧菌致病循環(huán)、結(jié)核病、核黃素代謝和二甲苯降解。

圖4 HI、CI 和LI 組在L3 層級(jí)(LDA＞2)富集信號(hào)通路的KEGG 分析)Fig.4 KEGG analysis of enriched signal pathways in the HI,CI and LI groups at L3 hierarchy (LDA＞2)

2.7 回腸差異微生物組成與代謝通路關(guān)聯(lián)分析

如圖5 所示：CI 組梭狀芽孢桿菌XVIII 與轉(zhuǎn)錄機(jī)制通路呈正相關(guān)(r=0.47，P=0.003 9)。HI 組乳酸菌屬與磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(r=0.50，P=0.001 8)、復(fù)制重組與修復(fù)蛋白(r=0.38，P=0.021)、四環(huán)素的生物合成 (r=0.33，P=0.047)、RNA 聚合酶(r=0.44，P=0.007 2)、D-丙氨酸代謝(r=0.60，P=0.000 1)、霍亂弧菌致病循環(huán)(r=0.37，P=0.028)、二甲苯降解 (r=0.47，P=0.003 7)通路呈正相關(guān)。腸球菌與磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng) (r=0.63，P＜0.001)、復(fù)制重組與修復(fù)蛋白 (r=0.38，P=0.023)、霍亂弧菌致病循環(huán) (r=0.42，P=0.011)通路呈正相關(guān)。志賀氏大腸桿菌屬與復(fù)制重組與修復(fù)蛋白 (r=0.38，P=0.023)、四環(huán)素的生物合成 (r=0.36，P=0.047)、霍亂弧菌致病循環(huán) (r=0.41，P=0.028)呈正相關(guān)。LI 組富集的乙醛酸和二羧酸代謝等12 個(gè)信號(hào)通路與潘多拉菌屬等16 個(gè)差異屬呈正相關(guān)(P＜0.05)。

圖5 微生物變化與通路相關(guān)性的熱圖分析)Fig.5 Heatmap analysis of the correlation between microbial changes and pathways

3 討論

環(huán)境溫度是影響家禽生產(chǎn)的一個(gè)重要因素，急性、慢性熱應(yīng)激均會(huì)使肉雞腸道菌群發(fā)生改變。WANG 等[20]報(bào)道對(duì)肉雞進(jìn)行熱應(yīng)激處理(溫控組21 ℃±1 ℃、高溫組31 ℃±1 ℃)發(fā)現(xiàn)：高溫顯著影響回腸微生物區(qū)系的α 多樣性(Chao1，P=0.002；PD-whole tree，P=0.002)，表明高溫增加了回腸微生物區(qū)系的物種豐富度。ZHU 等[21]通過(guò)DGGE 圖譜分析表明：飼養(yǎng)溫度變化對(duì)肉雞盲腸微生物的組成有顯著影響。本研究結(jié)果顯示：高溫顯著增加了Shannon 和Simpson 指數(shù)，因此推測(cè)長(zhǎng)期相對(duì)高溫環(huán)境增加了回腸腸道菌群的多樣性。

雞腸道中主要以厚壁菌門為主，其次為變形菌門、擬桿菌門和放線菌門[22]。據(jù)報(bào)道，熱應(yīng)激(38 ℃)對(duì)腸道菌群影響較為明顯，腸道菌群改變可導(dǎo)致腸道的消化吸收功能發(fā)生改變[23]。與CI組相比，長(zhǎng)期相對(duì)高溫環(huán)境使肉雞厚壁菌門增加。這與之前的研究結(jié)果一致，即較高的環(huán)境溫度增加了厚壁菌門的豐度[20]。厚壁菌門是小鼠和人類腸道微生物中最大的群體[24]，且產(chǎn)生的內(nèi)孢子能抵抗惡劣環(huán)境[25]。擬桿菌門對(duì)胃腸道的正常發(fā)育有影響，可以降解蛋白質(zhì)和碳水化合物[26]。與CI 組相比，HI 組厚壁菌門/擬桿菌門的比值增加，LI 組厚壁菌門/擬桿菌門的比值降低。研究發(fā)現(xiàn)：厚壁菌門/擬桿菌門比值的增強(qiáng)與人的脂肪沉積和體質(zhì)量下降負(fù)相關(guān)[27-28]。據(jù)報(bào)道，厚壁菌門的增加和回腸變形菌門的降低有益于腸道健康，有助于提高肉雞的生長(zhǎng)性能[29]。因此，厚壁菌門在長(zhǎng)期相對(duì)高溫環(huán)境飼養(yǎng)條件下相對(duì)豐度的增加可能有助于肉雞適應(yīng)環(huán)境應(yīng)激。

乳酸桿菌是人類和其他哺乳動(dòng)物微生物群的重要組成部分，存在于呼吸道、胃腸道和生殖道[30]，可以通過(guò)利用碳水化合物產(chǎn)生乳酸。乳酸桿菌可以改善宿主胃腸道功能，降低腸道pH，恢復(fù)宿主腸道菌群平衡，抑制病原菌的生長(zhǎng)，還能定植于腸黏膜形成黏膜屏障，保護(hù)腸道健康[31]。乳酸桿菌也可以改善雞腸道微生物區(qū)系，提高有益菌數(shù)量，與腸道病原菌競(jìng)爭(zhēng)定植位點(diǎn)，平衡腸道微生態(tài)區(qū)系[32-33]。志賀氏菌屬是引起細(xì)菌性痢疾的病原菌[34]，志賀氏大腸桿菌屬的相對(duì)豐度降低可以促進(jìn)腸道健康[35]。本研究結(jié)果顯示：高溫使肉雞回腸乳酸桿菌屬的豐度顯著增加，大腸桿菌屬的豐度顯著降低，原因可能是高溫能影響肉雞回腸微生物優(yōu)勢(shì)菌群的組成，降低環(huán)境溫度應(yīng)激對(duì)肉雞的危害。因此，長(zhǎng)期相對(duì)高溫飼養(yǎng)環(huán)境下乳酸桿菌的增加、志賀氏大腸桿菌屬的降低可能有助于平衡腸道微生物，促進(jìn)肉雞健康生長(zhǎng)。

曲霉菌屬屬于厚壁菌門，具有生物轉(zhuǎn)化和生物降解作用[36]。本研究結(jié)果顯示：HI 組曲霉菌屬顯著增加。因此，長(zhǎng)期相對(duì)高溫環(huán)境飼養(yǎng)肉雞，可能會(huì)增加肉雞對(duì)有害物質(zhì)的降解，促進(jìn)肉雞健康生長(zhǎng)。潘多拉菌屬是一種革蘭氏陰性致病菌，屬于變形桿菌的β 亞類，參與抗外源性生物降解[37]，已證明能夠產(chǎn)生奧西林酶，該酶增加了對(duì)阿霉素和碳青霉烯的耐藥性[38]。貪噬菌屬屬于叢枝藻科和β-變形桿菌[39]，是一種普遍存在的β 蛋白細(xì)菌，參與植物的生長(zhǎng)促進(jìn)和外源物質(zhì)的降解[40]。本研究結(jié)果顯示：LI 組潘多拉菌屬和貪噬菌屬顯著增加。因此，長(zhǎng)期相對(duì)低溫環(huán)境飼養(yǎng)肉雞，可能會(huì)增加有害菌的生長(zhǎng)，不利于肉雞健康生長(zhǎng)。

磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(phosphotransferase system，PTS)最初在大腸桿菌(E.coli)中被發(fā)現(xiàn)，后來(lái)在許多其他細(xì)菌中被發(fā)現(xiàn)，是一種催化碳水化合物吸收和轉(zhuǎn)化為磷酸酯的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)[41]。本研究中，HI 組乳酸菌屬與PTS 通路呈正相關(guān)。因此，在長(zhǎng)期相對(duì)高溫環(huán)境下，可能通過(guò)乳酸菌屬影響磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)PTS 通路。乙醛酸和二羧酸代謝是碳水化合物代謝的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，它使細(xì)胞獲得能量，并以高能分子的形式暫時(shí)儲(chǔ)存釋放的能量，參與脂肪酸代謝[42]。苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成是胃食管癌潛在的生物標(biāo)記物[43]。本研究中，LI 組潘多拉菌屬與乙醛酸和二羧酸代謝通路呈正相關(guān)。因此，在長(zhǎng)期相對(duì)低溫環(huán)境下可能通過(guò)Pandoraea影響代謝通路。

4 結(jié)論

長(zhǎng)期相對(duì)高溫使肉雞回腸微生物多樣性增加，厚壁菌門和乳酸桿菌屬增加，擬桿菌門降低，嘌呤代謝和D-丙氨酸代謝等相關(guān)信號(hào)通路顯著富集；長(zhǎng)期相對(duì)低溫使肉雞回腸微生物多樣性增加，梭狀芽孢桿菌XI、志賀氏大腸桿菌屬降低，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、脂質(zhì)生物合成蛋白質(zhì)等相關(guān)信號(hào)通路顯著富集。