李靜

(南陽醫(yī)學高等?？茖W校第一附屬醫(yī)院 檢驗科，河南 南陽 473000)

結核病是由結核分枝桿菌引起的一種慢性全身性傳染病，其中肺結核最為常見，占結核病總病例的80% 以上，嚴重危害人類健康[1]。近年來，結核病人的不斷增加，引起了世界衛(wèi)生組織的高度關注。目前，痰涂片抗酸桿菌直接鏡檢結果仍是結核病診斷的重要依據(jù)，而抗酸染色法則是其主要方法之一[2]。為探尋一種可靠而操作較為簡單的檢測方法，以提高陽性檢出率，本研究對痰中抗酸桿菌用改良抗酸熱染法的檢測結果進行了分析，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

98 例標本均來源于2018年6月至2019年6月南陽醫(yī)學高等專科學校第一附屬醫(yī)院感染科肺結核住院患者送檢的合格痰標本。

1.2 儀器與試劑

抗酸染色液由珠海貝索生物技術有限公司提供，其中主要包括亞甲藍溶液、酸性酒精及石碳酸復紅溶液等；顯微鏡選自日本生產的奧林巴斯顯微鏡，型號為CX31RTSF；生物安全柜由濟南鑫貝西生物技術有限公司生產，型號為BSC-1500 ⅡA2-X。

1.3 制片方法

制片均在生物安全柜內進行，按照《中國結核病防治規(guī)劃實施指南》要求，制備痰涂片98 張(每份各2 張)，自然干燥后火焰固定，先使用鉛筆在每張玻片的磨砂面上編號分成兩組，再用接種環(huán)挑取痰標本的膿性部分大約0.05～0.1 mL，涂于無劃痕的載玻片右2/3 處，做螺旋狀軌跡均勻抹成2.0 cm×2.5 cm 大小的卵圓形膜，不要太厚，以透過染色前的痰膜可以隱約看到報紙上的字跡為宜，待干后火焰固定置于染色架上進行染色。

傳統(tǒng)抗酸冷染法：①將干燥固定后帶有編號的玻片置于染色架上進行染色，然后滴加石碳酸復紅溶液蓋滿玻片進行初染，室溫染色10min，流水沖去溶液，瀝干；②滴加酸性酒精溶液蓋滿玻片，進行脫色1～2 分鐘，至無紅色為止，然后用流水沖洗；③滴加亞甲藍染液30～60 s 進行復染，流水沖去染液，待干后油鏡觀察，在藍色背景下，抗酸桿菌(如結核桿菌)呈紅色，其他細菌及細胞呈藍色復染。

改良抗酸熱染法：①將干燥固定后帶有編號的玻片置于染色架上，加石碳酸復紅溶液均勻布滿片子。用棉簽蘸95% 的酒精，在酒精燈上點燃；②將帶火焰的棉簽在片子下方移動，均勻加熱每張片子,以微微冒出熱蒸汽為宜，此步驟為初染過程。③燃燒后的棉簽放入備有水的燒瓶中熄滅。在初染過程中區(qū)別于傳統(tǒng)抗酸冷染法加熱是最關鍵一步。其余步驟脫色、復染，其染色方法與傳統(tǒng)抗酸冷染法相同。

1.4 結果判讀

在油鏡下觀察，結果記錄及報告均按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行，抗酸桿菌陽性結果判讀方法：報告抗酸桿菌菌數(shù)為1～8 條抗酸桿菌/300 個視野?？顾釛U菌陽性“+”為3～9 條抗酸桿菌/100 個視野，“++”為1～9 條抗酸桿菌/10 個視野，“+++”為1～9 條抗酸桿菌/ 每個視野，“++++”為≥10 條抗酸桿菌/ 每個視野。

1.5 統(tǒng)計學處理

用SPSS 15.0 統(tǒng)計學軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析處理，配對計數(shù)資料采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

改良抗酸染色熱染法和傳統(tǒng)抗酸冷染法最大的區(qū)別，在于初染時加熱這一關鍵步驟。從表中兩種染色方法的陽性率可以看出：傳統(tǒng)抗酸桿菌冷染法中，陽性總數(shù)22例，陽性率為22.4%(22/98)；抗酸桿菌熱染法中，陽性總數(shù)39 例，陽性率為39.8%(39/98)，經檢驗，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.878，P＜0.01)；尤其在“+”陽性率的兩組結果對比中，改良抗酸染色熱染法中陽性數(shù)31 例，陽性率為15.3%(15/98)，傳統(tǒng)抗酸冷染法中，陽性數(shù)為15 例，陽性率為15.3%(15/98)，經檢驗，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.272，P＜0.01)，而“++”“+++”“++++”的陽性率之間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

由此可見，改良抗酸熱染法可大大提高陽性檢出率，尤其在菌體數(shù)量較少時更為顯著。其結果見表1。

表1 98例痰標本抗酸染色中抗酸桿菌陽性結果

3 討論

肺結核是由結核分枝桿菌感染所致的傳染病，會損傷患者肺部功能，影響患者正常生活甚至導致死亡，該病原菌可通過痰液和飛沫等形式進行傳播，因此傳染性極強。臨床通常采用痰涂片查找抗酸桿菌對患者病情進行判斷[3]，而典型的分枝桿菌菌體形態(tài)為微彎曲或直的桿菌，一旦著色后有抵抗鹽酸酒精脫色的性能，故稱為抗酸桿菌。分枝桿菌的細胞壁內含有大量的脂質，主要是磷脂、脂肪酸和蠟質三種成分[4]，分枝桿菌酸包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色。在常規(guī)工作中，多采用傳統(tǒng)抗酸冷染法進行染色，但由于抗酸桿菌的菌體含有一層蠟質，使染液難以進入，致使染色效果不佳，要經過加熱和延長染色時間來促其著色[5]。結合本研究結果分析，改良抗酸熱染法中提高染液的溫度可加速染液透過抗酸桿菌的細胞壁，并能縮短染色時間和提高染色效果，染出的菌體大而清晰，大大提高陽性檢出率，在菌體數(shù)量較少的痰標本中更具有明顯優(yōu)越性[6]，且此法操作簡便、快捷。因此，該方法值得在基層各實驗室中推廣應用，以減少漏檢率。