向卓亞 夏陳 鄧俊琳 朱永清 陳建 鄭安平 劉新 趙旭珠 林長(zhǎng)彬

摘 要：目的：采用熱風(fēng)干燥法干燥刺梨鮮果，分析干燥前后對(duì)刺梨主要活性成分（維生素C、總多酚、總黃酮、沒(méi)食子酸、兒茶素和鞣花酸）的影響，以及測(cè)定其有害重金屬含量。結(jié)果：刺梨鮮果經(jīng)60 ℃熱風(fēng)干燥后，總黃酮含量基本不變，總多酚和維生素C含量有減少;多酚類(lèi)化合物兒茶素含量減少，沒(méi)食子酸和鞣花酸含量則增加;刺梨干果中維生素C含量仍然高（7.2%）;干果中總多酚96.18 mg/g、總黃酮1.97 mg/g、兒茶素4.94 mg/g、沒(méi)食子酸0.30 mg/g、鞣花酸1.70 mg/g。有害重金屬限量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2762—2017的規(guī)定。結(jié)論：熱風(fēng)干燥的工藝方法使刺梨中活性成分含量變化，但不影響干刺梨的應(yīng)用品質(zhì)，是加工干燥刺梨鮮果的方便、快捷、性價(jià)比合適的方式，適合規(guī)?；瘧?yīng)用。

關(guān)鍵詞：刺梨;熱風(fēng)干燥;活性成分

刺梨（Rosa roxburghii）為薔薇科薔薇屬多年生落葉小灌木，刺梨果實(shí)中富含各類(lèi)活性物質(zhì)，主要包括超氧化物歧化酶（SOD），原兒茶酸、兒茶素、鞣花酸等多酚類(lèi)活性物質(zhì)，以及刺梨苷和黃酮類(lèi)活性物質(zhì)[1-4]，具有提高機(jī)體免疫、抗癌防癌等多種藥理作用[5-7]。刺梨采收主要集中在8—9月，該季節(jié)溫度和相對(duì)濕度較高，采收后刺梨鮮果易腐爛變質(zhì)[8]。為了延長(zhǎng)貯藏期，目前各刺梨精深加工工廠主要利用熱風(fēng)干燥方式將其脫水制成干果。因此干燥方法對(duì)刺梨品質(zhì)的影響值得探討。劉丹等[9]研究了不同干燥方式對(duì)刺梨中多酚的影響，發(fā)現(xiàn)冷凍干燥和40 ℃減壓干燥效果相對(duì)較佳。孫紅艷等[10]研究發(fā)現(xiàn)，冷凍干燥后刺梨黃酮含量保存較好，可達(dá)到1.998%。然而目前未見(jiàn)熱風(fēng)干燥前后刺梨活性成分比較全面的分析報(bào)道，特別對(duì)干燥后多酚類(lèi)化合物的定量分析的報(bào)道。本研究對(duì)刺梨鮮果和熱風(fēng)干燥后的干果中活性成分進(jìn)行測(cè)試，并用高效液相色譜（HPLC）定量分析其中多酚類(lèi)化合物，以探討熱風(fēng)干燥法對(duì)刺梨的活性成分的影響，為刺梨產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供科技支撐。

1 材料與方法

刺梨鮮果，由樂(lè)山市沐川縣四川山珍果農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司提供，產(chǎn)于沐川縣黃丹鎮(zhèn)山田村。本研究組對(duì)樣品做了植物種屬確認(rèn)并存樣。

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試劑 甲酸、福林酚試劑、三氯化鈣、維生素C、乙醇、鹽酸、氯化鉀：分析純，成都市科龍化工試劑廠;沒(méi)食子酸、兒茶素和鞣花酸（純度≥98%）：色譜純，北京索萊寶科技有限公司;乙腈、甲醇：色譜純，美國(guó)Mreda公司。

1.1.2 儀器設(shè)備 A2104型電子天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;FW-100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，北京科偉永興儀器有限公司;TD-4Z型臺(tái)式低速離心機(jī)，四川蜀科儀器有限公司;KH2200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司;ELX-800型號(hào)酶標(biāo)儀，美國(guó)伯騰儀器有限公司;1260型高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent公司;UV-6100型號(hào)紫外分光光度計(jì)，上海元析儀器有限公司;DHG-9075A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥機(jī)，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司;FDU-2110型冷凍干燥機(jī)，東京理化器械株式會(huì)社;AA-220原子吸收光譜儀，美國(guó)瓦里安。

1.2 方法

1.2.1 刺梨的干燥 稱(chēng)取500 g刺梨鮮果于烘箱中60 ℃熱風(fēng)干燥30 h后，粉碎、過(guò)60目篩密封保存。

1.2.2 刺梨中維生素C、水分及毒害重金屬的測(cè)定 刺梨中維生素C的含量參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB 5009.86—2016測(cè)定;水分的測(cè)定參照GB 5009.3—2016方法;鉛的測(cè)定參照GB 5009.12—2017第一法;總砷參照GB 5009.11—2014第二法;鎘參照GB 5009.15—2014;汞參照GB 5009.17—2014第一法。

1.2.3 刺梨總多酚和總黃酮的提取 將刺梨鮮果冷凍干燥并粉碎后過(guò)60目，稱(chēng)取1.00 g刺梨粉，用8 mL 80%甲醇40 ℃超聲提取40 min，6 000 r/min離心10 min，收集上清液，殘?jiān)僦貜?fù)提取2次，合并上清液，定容至25 mL，此為待測(cè)液，保存?zhèn)溆?。?.3.1制備的刺梨干果，按上述同樣方法制備提取液并保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 刺梨總黃酮的測(cè)定 參照陳克克等[11]報(bào)道的方法，分別取以上1.3.3的鮮果凍干粉提取待測(cè)液、烘干干果提取待測(cè)液及對(duì)照品蘆丁溶液于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值，并做計(jì)算。以蘆丁溶液濃度值（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、吸光值為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。蘆丁線性回歸方程為：y =5.208x+0.041，R2=0.999。

1.2.5 刺梨總多酚的測(cè)定 參照Chu等[12]報(bào)道的方法，在10 mL試管中加入10 μL適當(dāng)稀釋后的刺梨提取待測(cè)液，加入20 μL福林酚試劑，混合均勻。放置5 min后，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的Na2CO3溶液0.16 mL。混合液在室溫下避光反應(yīng)60 min后，于765 nm波長(zhǎng)下測(cè)定混合液吸光值，并做計(jì)算。以沒(méi)食子酸為對(duì)照品，其溶液濃度值（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、吸光值為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒(méi)食子酸線性回歸方程為：y=0.004x+0.082，R2=0.999。

1.2.6 刺梨多酚類(lèi)化合物含量的HPLC測(cè)定 本研究采用HPLC方法對(duì)刺梨中沒(méi)食子酸、兒茶素、鞣花酸3種多酚類(lèi)化合物做定量測(cè)定。色譜柱：Poroshell 120 PFP柱（4.6×100 mm，2.7 μm）;DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：254、280 nm;柱溫30 ℃;流速：0.8 mL/min;進(jìn)樣量5 μL;流動(dòng)相：1%的甲酸水溶液（A）+乙腈（B）。梯度洗脫：0～10 min、B 5%～10%;10～20 min、B 10%～20%;20～35 min、B 20%～40%。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：沒(méi)食子酸、兒茶素、鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，分別用甲醇溶解并定容至10 mL作為標(biāo)準(zhǔn)品母液。以二倍稀釋法用甲醇將各標(biāo)準(zhǔn)品母液配制成一系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用HPLC法測(cè)試各標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別以沒(méi)食子酸、兒茶素、鞣花酸的質(zhì)量濃度值（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、HPLC峰面積為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并統(tǒng)計(jì)線性回歸方程式，并試驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)其相關(guān)因子（R2）和線性范圍。分別取以上1.3.3的刺梨鮮果凍干粉提取待測(cè)液、烘干干果提取待測(cè)液按以上HPLC方法做測(cè)試并根據(jù)線性回歸方程式計(jì)算三個(gè)多酚化合物的含量。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 刺梨干燥前后水分、維生素C、總多酚及總黃酮的含量

由表1可知，刺梨鮮果含水81.8%，烘干后干果含10%水分（10 g/100 g）。刺梨鮮果中維生素C含量居蔬菜水果榜首，其含量為獼猴桃的10倍、柑橘的100倍。鮮果凍干干基維生素C含量為10.8×103 mg/100 g，高于烘干干果（7.2×103 mg/100 g），具有顯著差異（P<0.05）。維生素C具有氧化性且屬于水溶性維生素，因此干燥過(guò)程隨溫度的升高以及水分的蒸發(fā)而損失。雖然熱風(fēng)干燥過(guò)程會(huì)影響維生素C含量，但刺梨干果中維生素C含量仍然高達(dá)7.2%（7.2×103 mg/100 g），完全不影響干刺梨的應(yīng)用品質(zhì)。通過(guò)與近幾年文獻(xiàn)報(bào)道的刺梨中維生素C含量作對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)產(chǎn)地刺梨鮮果中維生素C含量存在差異。本次試驗(yàn)中沐川縣刺梨鮮果維生素C含量為1 960 mg/100 g，遠(yuǎn)高于李春榮等[13]報(bào)道的貴州省黔南山區(qū)鮮刺梨（775 mg/100 g），高于貴州花溪‘貴農(nóng)5號(hào)’刺梨鮮果[14]（1 192.85 mg/100 g），與貴州的龍里[15-16]、七星關(guān)區(qū)[17]和花溪[17]等地鮮果含量較為接近，較丁小艷[16]報(bào)道的貴州黔西的鮮刺梨中含量低（2 963.69 mg/100 g）。

刺梨中富含多酚類(lèi)化合物和黃酮類(lèi)化合物。鮮果凍干干基總多酚含量為112.61 mg/g，高于干果中含量96.18 mg/g（P<0.05），這可能是由于多酚在干燥過(guò)程中發(fā)生了氧化分解?？傸S酮含量基本沒(méi)有變化，凍干刺梨鮮果干基和干刺梨中分別是2.05、1.97 mg/g。不同產(chǎn)地刺梨總多酚、總黃酮含量差異較大，這可能是由土壤、氣候、品種等因素造成的。本研究中刺梨鮮果總多酚含量（112.61 mg/g）遠(yuǎn)高于貴州‘貴農(nóng)5號(hào)’[14]（1 359.64 mg/100 g）和丁小艷[16]報(bào)道的鮮刺梨（2 571.00 mg/100 g）。刺梨干果中總多酚含量略低于曾芳芳[18]報(bào)道的貴州栽培和野生成熟的干刺梨中（154.81、141.15 mg/g）總多酚的含量。本研究中刺梨鮮果總黃酮含量（2.05 mg/g）較丁小艷[16]報(bào)道的貴州黔西縣刺梨含量高（78.94 mg/100 g），略高于貴州花溪的‘貴農(nóng)5號(hào)’[19]，低于李達(dá)等[17]和曾芳芳[18]報(bào)道的貴州刺梨鮮果的含量（8.76～10.97 mg/g）。

2.2 刺梨多酚類(lèi)化合物沒(méi)食子酸、兒茶素和鞣花酸的含量

沒(méi)食子酸、兒茶素和鞣花酸三種標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜見(jiàn)圖1。統(tǒng)計(jì)得到三個(gè)線性方程式及其R2和線性范圍，即沒(méi)食子酸y=19.27x-37.92（280 nm），R2=0.999，線性范圍1.016～254 μg/mL;兒茶素y =3.744x-0.490（280 nm），R2=0.999，線性范圍3.64～116.5 μg/mL;鞣花酸y=25.84x-34.09（254 nm），R2=0.999，線性范圍9.8～78.4 μg/mL（表2）。多酚類(lèi)化合物含量計(jì)算公式為式（1）：

多酚單體含量（mg/g）=待測(cè)液中多酚單體濃度×稀釋倍數(shù)×樣品定容體積/提取質(zhì)量/1 000。（1）

作為植物中的一大類(lèi)次生代謝產(chǎn)物，多酚類(lèi)化合物主要在種子萌發(fā)、植物生長(zhǎng)和發(fā)育、細(xì)胞分裂、光合作用色素的合成、植物抗霜凍和防御病蟲(chóng)害等過(guò)程中均起到重要作用[20-21]。刺梨富含多酚，為了研究刺梨中主要的酚類(lèi)化合物在刺梨鮮果和干果中定量含量，本研究選取了沒(méi)食子酸、兒茶素、鞣花酸3種酚類(lèi)代表化合物進(jìn)行HPLC定量分析。表3結(jié)果顯示，刺梨鮮果熱風(fēng)烘干后兒茶素含量顯著降低（P<0.05），由刺梨鮮果凍干后干基中兒茶素6.91 mg/g減為烘干干果4.94 mg/g。這可能是兒茶素在烘干過(guò)程中發(fā)生了分解。但沒(méi)食子酸和鞣花酸則在干果中含量顯著提高（P<0.05），分別為0.30、1.70 mg/g。這可能是在熱風(fēng)干燥過(guò)程中糖苷型沒(méi)食子酸和糖苷型鞣花酸的糖苷鍵斷裂，釋放出游離沒(méi)食子酸和鞣花酸。Zheng等[19]利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定到刺梨中含有兒茶素和鞣花酸，且通過(guò)峰高和峰面積初步推斷鞣花酸衍生物、兒茶素類(lèi)化合物在刺梨中含量豐富，是刺梨中重要的植物化學(xué)成分，但并未對(duì)具體化合物做定量分析。譚登航等[22]發(fā)現(xiàn)，刺梨葉中鞣花酸含量最高，其次為刺梨果實(shí)。目前關(guān)于刺梨中的酚類(lèi)化合物深入研究較少，本研究對(duì)刺梨中多酚化合物做了定量研究。

2.3 刺梨中毒害重金屬含量

鉛、砷、鎘和汞為果蔬中常見(jiàn)的有害重金屬，其可能從污染的土地中帶入或者在加工過(guò)程中產(chǎn)生。表4結(jié)果表明，干燥后由于水分減少使得刺梨中重金屬百分含量有所升高，但全部符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2762—2017對(duì)食品中重金屬含量的限量要求。這說(shuō)明沐川刺梨不僅從環(huán)境帶入的重金屬污染程度小，通過(guò)熱風(fēng)干燥加工也未帶入上述污染物，可安全食用。

3 結(jié)論

采用熱風(fēng)干燥法干燥刺梨鮮果制備刺梨干果，經(jīng)60 ℃熱風(fēng)干燥后，總黃酮含量基本不變，總多酚和維生素C含量有減少;多酚類(lèi)化合物兒茶素含量減少，沒(méi)食子酸和鞣花酸含量則增加。刺梨干果中維生素C含量仍然很高（7.2%）;干果中總多酚96.18 mg/g、總黃酮1.97 mg/g、兒茶素4.94 mg/g、沒(méi)食子酸0.30 mg/g、鞣花酸1.70 mg/g。有害重金屬限量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2762—2017的規(guī)定。這些結(jié)果說(shuō)明熱風(fēng)干燥法不影響刺梨干果的應(yīng)用品質(zhì)，是干燥刺梨鮮果的方便、快捷、性價(jià)比合適的方式，適合規(guī)模化應(yīng)用。

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Effect of Hot Air Drying on Bioactive Substance in Rose roxburghii

XIANG Zhuo-ya1，XIA Chen1，DENG Jun-lin1，ZHU Yong-qing1，CHEN Jian1，ZHENG An-ping2，LIU Xin2，ZHAO Xu-zhu1，LIN Chang-bin1

（1Institute of Agro-products Processing Science and Technology，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Chengdu 610066，China;2 Sichuan Shanzhengguo Agricultural Development Co.LTD.，Leshan 614000，China）

Abstract：【Objective】 Rose roxburghii fresh fruit was dried using hot air drying method.The contents of main active substance（vitamin C，total polyphenols，total flavonoids t，gallic acid，catechin and ellagic acid）and heavy metals in the fresh and dried Rose roxburghii fruit were analyzed and compared.【Result】 The results showed that the content of total flavonoids had been remained unchanged while the contents of total polyphenols and vitaminC had been decreased after hot air drying at 60 ℃.The content of polyphenolic catechin had been decreased while the contents of gallic acid and ellagic acid had been increased.The content of vitaminC in the dried Rose roxburghii was still high（7.2%）.The contents of the active substance in the dried fruits were as follows：total polyphenols 96.18 mg/g，total flavonoids 1.97 mg/g，catechins 4.94 mg/g，gallic acid 0.30 mg/g，and ellagic acid 1.70 mg/g.The limit of harmful heavy metals shall comply with the provisions of the national standard GB 2762—2017.【Conclusion】 The hot air drying method may result in the content changes of the active ingredients in Rose roxburghii，but does not affect the application quality of the dried fruit.Hot air drying method is a convenient，fast，and cost-effective way to process fresh Rose roxburghii，which is suitable for large-scale application.

Keywords：Rose roxburghii;hot air drying;bioactive substance

基金項(xiàng)目：四川道地中藥材創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：SCCXTD-2020-19）;四川省科技廳“三區(qū)”人才支持計(jì)劃科技人員專(zhuān)項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目。

作者簡(jiǎn)介：向卓亞（1994— ），女，碩士，研究實(shí)習(xí)員，研究方向：功能食（藥）品。

通信作者：陳 建（1969— ），男，博士，研究員，研究方向：功能食（藥）品。