鐘舒潔 陳曉嘉 周芳梅 羅小寶 陳茹 馮志強(qiáng)

摘 要：以市場隨機(jī)購買的普洱茶為研究對象，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、高效液相色譜-熒光檢測法（HPLC-FLD）、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-MS/MS）對普洱茶茶葉進(jìn)行黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2檢測，分析3種方法檢測普洱茶中黃曲霉毒素的適用性以及茶葉中黃曲霉毒素含量情況。結(jié)果表明，ELISA法測得結(jié)果為8.94～588μg/kg，HPLC法測得結(jié)果為0.318～0.677μg/kg，UPLC-MS/MS法結(jié)果均為未檢出。UPLC-MS/MS法具有選擇性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、穩(wěn)定性高的特點(diǎn)，對普洱茶茶葉這種基質(zhì)復(fù)雜的樣品進(jìn)行測定，能減少雜質(zhì)干擾，有效避免假陽性結(jié)果，更適用于檢測茶葉中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量。

關(guān)鍵詞：普洱茶;黃曲霉毒素;酶聯(lián)免疫法;高效液相色譜法;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法

中圖分類號 TS272.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A文章編號 1007-7731（2021）16-0015-05

Determination of Aflatoxin in Pu-erh Tea by UPLC-MS/MS， HPLC and ELISA

ZHONG Shujie1，3 et al.

（1Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station， Guangzhou 511442， China; 3Guangdong Provincial Food Industry Public Laboratory， Guangzhou 511442， China）

Abstract： In this paper， Pu-erh tea was purchased in the market as the main experimental object， using enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）， high performance liquid chromatography fluorescence detection （HPLC-FLD）， ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS） for the determination of aflatoxin B1， B2， G1 and G2 in Pu-erh tea. Studied the three methods detection of aflatoxin in Pu-erh tea， applicability and aflatoxin content in tea. The result of ELISA method was 8.94-588μg/kg，the result of HPLC method was 0.318-0.677μg/kg， and the result of UPLC-MS/MS method was not detected. The UPLC-MS/MS method has the characteristics of strong selectivity， good reproducibility and high stability. It can reduce the interference of impurities and avoid false positive results. It is more suitable for the detection of the content of aflatoxin B1， B2， G1 and G2 in tea.

Key words： Pu-erh; Aflatoxin; Enzyme linked immunosorbent assay; High performance liquid chromatography; Ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry

普洱茶[1]是以云南大葉種曬青茶為原料，采用特定的加工工藝制成具有獨(dú)特品質(zhì)特征的茶葉，具有抗腫瘤、抗氧化、抗疲勞、抗輻射、抑菌、預(yù)防心腦血管疾病、增強(qiáng)免疫力、降脂減肥、降血糖、緩解煙毒危害等功效[2-4]。當(dāng)前，普洱茶的質(zhì)量安全問題倍受社會關(guān)注，近年來流傳的“普洱茶致癌說”將質(zhì)量安全問題推到了風(fēng)口浪尖，是普洱茶生產(chǎn)、流通領(lǐng)域的重大挑戰(zhàn)。黃曲霉毒素（aflatoxins）是自然界中已知的理化性質(zhì)最穩(wěn)定的一類真菌毒素，具有強(qiáng)毒性、致癌性、致突變性和致畸毒性，其中黃曲霉毒素B1的毒性最大[5-7]，被世界衛(wèi)生組織（WHO）癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為一類致癌物，是世界公認(rèn)的三大強(qiáng)致癌物質(zhì)之一[8-10]。

目前，黃曲霉毒素的檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）[11-12]，色譜法如薄層色譜法（TLC）[13]、高效液相色譜-熒光檢測法（HPLC-FLD）[14-16]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）[17-23]和毛細(xì)管電泳法[24]等。茶葉基質(zhì)復(fù)雜（含有多達(dá)數(shù)百種化學(xué)成分），雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，進(jìn)行真菌毒素檢測時(shí)容易出現(xiàn)假陽性，研究茶葉中真菌毒素含量是食品安全檢測技術(shù)研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)[25]。陳若恒等[26]采用免疫親和柱凈化-酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法對荔灣區(qū)茶葉批發(fā)市場140份普洱茶AFTB1污染狀況進(jìn)行檢測，陽性率為5.71%，檢出值范圍在2.03～4.29μg/kg。陳建玲等[27]采用免疫親和柱凈化-液相色譜法（HPLC）對抽取的70份濕倉儲存普洱茶樣本，檢得黃曲霉毒素B1檢出值范圍在0.021～8.164μg/kg。李亞莉[28]采用多功能凈化柱-超高效液相色譜質(zhì)譜法（LC-MS/MS）對收集的30份發(fā)酵階段樣的普洱茶、市售普洱茶及受污染普洱茶進(jìn)行黃曲霉毒素檢測，均未檢測到黃曲霉毒素。

本研究以市場隨機(jī)購買的普洱茶為試驗(yàn)對象，采用酶聯(lián)免疫法、液相色譜法和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對普洱茶中的黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2（AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2）進(jìn)行檢測，旨在探尋3種不同檢測方法之間的差異性，以便在實(shí)際工作中合理選擇適用的方法，提高結(jié)果準(zhǔn)確性，同時(shí)為普洱茶質(zhì)量安全及飲用安全提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器 Waters H-class（UPLC）超高效液相色譜儀（美國Waters公司）串聯(lián)Triple Quad 3500超高液相質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國AB SCIEX公司）;Agilent 1200（FLD檢測器）高效液相色譜儀（美國Agilent公司）;Vector PCX柱后衍生器（美國Pickering公司）;RT-6000酶標(biāo)儀（德國IFP公司）;Turbo Vap LV 50位自動氮吹濃縮儀（瑞典Biotage公司）;AG204電子分析天平（瑞士Mettler Toledo）。

1.2 試劑與耗材 黃曲霉毒素混標(biāo)（純度98%，美國O2SI公司）、乙腈（色譜純，默克）、碘（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）、氯化鈉（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）、十二水磷酸氫二鈉（分析純，天津市化學(xué)試劑一廠）、磷酸二氫鉀（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）、氯化鉀（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）、吐溫-20（分析純，阿法埃莎（天津）化學(xué)有限公司）、甲醇（分析純，天津市化學(xué)試劑一廠）、氫氧化鈉（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）、黃曲霉毒素ELISA試劑盒（美國Romer Labs公司）、特異性免疫親和柱（美國Romer Labs公司）。

1.3 樣品采集 于2017年7—10月份隨機(jī)抽取廣州某茶葉市場共86批次普洱茶樣品，其中生茶46批次，熟茶40批次。取一定量的茶樣，經(jīng)高速粉碎機(jī)磨細(xì)后過20目篩備測。

1.4 方法

1.4.1 酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA法） 參照ELISA檢測試劑盒所提供的方法。主要檢測步驟為：取5.0g待測樣品加入25mL70%甲醇水溶液進(jìn)行提取，超聲30min，提取液用分析緩沖液按照1∶2比例進(jìn)行稀釋后，每個(gè)ELISA稀釋孔中加入100μL樣品、200μL酶連偶合物，充分混合后移取100μL混合液至有抗體包被的微孔中，同時(shí)設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)品系列和對照反應(yīng)孔，混合后于室溫下孵育15min，再用蒸餾水或去離子水洗板5次后加入反應(yīng)底物100μL，置室溫下孵育5min后用終止液終止ELISA反應(yīng)，在450nm波長下測定吸光度OD值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲品系列濃度以及相關(guān)的OD值，繪出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)的含量值。

1.4.2 高效液相色譜-熒光檢測法（HPLC-FLD法）

1.4.2.1 前處理過程 取5.0g待測樣品加入25mL70%甲醇水溶液進(jìn)行提取，超聲30min，取2mL提取液加入18mL吐溫溶液，全部過免疫性親和柱，先用5mL PBS溶液和5mL水活化親和柱后，上樣，用2mL甲醇洗脫，抽干親和柱，收集全部洗脫液至試管中，在50℃下用氮?dú)鈱⑾疵撘捍抵两?，?0%甲醇水定容至1.0mL，旋渦1min復(fù)溶，過0.22μm有機(jī)濾膜壓濾上機(jī)。

1.4.2.2 儀器條件 液相色譜條件：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相：水-甲醇-乙腈（56+22+22）;等度洗脫;流速1.0mL/min;進(jìn)樣量50μL;柱溫40℃;激發(fā)波長360nm;發(fā)射波長440nm;柱后衍生器系統(tǒng)：衍生溶液：0.005% 碘液;衍生溶液流速0.3mL/min;衍生反應(yīng)管溫度90℃;激發(fā)波長360nm;發(fā)射波長440nm。

1.4.3 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS法）

1.4.3.1 前處理過程 取5.0g待測樣品加入25mL70%甲醇水溶液進(jìn)行提取，超聲30min，取2mL提取液加入18mL吐溫溶液，全部過免疫性親和柱，先用5mL PBS溶液和5mL水洗滌，再用2mL甲醇洗脫，抽干親和柱，收集全部洗脫液至試管中，在50℃下用氮?dú)鈱⑾疵撘捍抵两?，?0%甲醇水定容至1.0mL，旋渦1min復(fù)溶，壓濾上機(jī)。

1.4.3.2 儀器條件 液相色譜條件：Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色譜柱（2.1mm×50mm，1.7μm），流動相：0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水，流速為0.5mL/min;進(jìn)樣量10.0μL;柱溫40℃;梯度洗脫，見表1。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI+），正離子掃描方式，多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），電噴霧電壓為5500V，離子源溫度為550℃，氣簾氣（CUR），壓力為38psi，霧化氣壓力（GAS1）為55psi，輔助加熱氣壓力（GAS2）為60psi。黃曲霉毒素AFTB1、AFTB2、AFTG1、AFTG2的其他相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 ELISA法測定結(jié)果 在隨機(jī)抽取的86份茶葉樣品中，采用ELISA法檢測時(shí)，黃曲霉毒素全部呈陽性，最高檢測含量為588μg/kg，檢出率為100%（見表3）。ELISA法檢測結(jié)果顯示，所測茶葉中黃曲霉毒素均有檢出。ELISA方法原理為酶標(biāo)記抗體與載體上的抗原或抗體結(jié)合發(fā)生顯色發(fā)應(yīng)進(jìn)行定性定量。ELISA法具有操作快速、簡單并且成本低等優(yōu)點(diǎn)，但對基質(zhì)復(fù)雜的樣品特異性不強(qiáng)，容易受基質(zhì)干擾產(chǎn)生假陽性。茶葉中的酚類物質(zhì)對抗原抗體反應(yīng)有著嚴(yán)重的干擾，需要去除酚類物質(zhì)的干擾才會得到準(zhǔn)確的結(jié)論。

2.2 HPLC-FLD法測定結(jié)果 在隨機(jī)抽取的86份茶葉樣品中，采用HPLC-FLD法檢測，結(jié)果顯示，普洱茶生茶中有5份樣品中黃曲霉毒素呈陽性，檢出率為4.5%，陽性樣品最高檢測含量為0.677μg/kg（見表4）。液相色譜見圖1、圖2。

HPLC-FLD檢測結(jié)果顯示，5批次普洱茶生茶中檢出AFTB2。HPLC-FLD法采用特異性免疫親和柱進(jìn)行凈化，對目標(biāo)物進(jìn)行柱后衍生后進(jìn)入熒光檢測器進(jìn)行分析檢測，該方法相對ELISA法特異性更強(qiáng)，有效降低干擾。HPLC-FLD法原理是以分析物的保留時(shí)間作定性依據(jù)，由于實(shí)際樣品測定時(shí)基質(zhì)比較復(fù)雜，基質(zhì)中的組分與分析物極性相似，從而保留時(shí)間相似，導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性情況，使結(jié)果誤判。而茶葉基質(zhì)復(fù)雜（含有多達(dá)數(shù)百種化學(xué)成分），在液相色譜分析中容易在同一出峰時(shí)間產(chǎn)生雜峰，干擾影響定性結(jié)果。

2.3 UPLC-MS/MS法測定結(jié)果 在隨機(jī)抽取的86份茶葉樣品中，采用UPLC-MS/MS法檢測，結(jié)果顯示，全部樣品檢測結(jié)果均呈陰性，檢出率為0（見表5）。質(zhì)譜MRM離子見圖3。

UPLC-MS/MS法具有選擇性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、穩(wěn)定性高的特點(diǎn)，根據(jù)分子量信息及其特征離子進(jìn)行定性定量分析檢測，在串聯(lián)四級桿多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式下，所選的定量離子和定性離子具有很高的特異性，各目標(biāo)物質(zhì)分析時(shí)均不存在干擾。對茶葉這種基質(zhì)復(fù)雜的樣品能有效對目標(biāo)離子進(jìn)行準(zhǔn)確定性，屏蔽雜質(zhì)干擾，進(jìn)而有效地避免假陽性或者假陰性結(jié)果。

2.4 3種檢測方法的對比

2.4.1 檢出限、定量限、回收率與精密度 本試驗(yàn)考察了酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、高效液相色譜-熒光檢測方法（HPLC-FLD）與超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜法（UPLC-MS /MS）的相關(guān)系數(shù)、回收率、精密度、檢出限（LOD）和定量限（LOQ），其結(jié)果見表6。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線測試，ELISA法測4種黃曲霉毒素總量在0.1～40ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9985，LOD為1μg/kg，LOQ為3μg/kg;HPLC-FLD法在0.1～40ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9991～0.9996，LOD為0.1μg/kg，LOQ為0.5μg/kg;UPLC-MS/MS法在0.1～10ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9991～0.9997，LOD為0.03μg/kg，LOQ為0.1μg/kg。HPLC-FLD法進(jìn)行0.1μg/kg、0.3μg/kg和1.0μg/kg添加水平的測定，加標(biāo)回收率為48.3%～76.4%，譜圖顯示有明顯的基質(zhì)干擾，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.1%～5.8%;UPLC-MS/MS法進(jìn)行0.1μg/kg、0.3μg/kg和1.0μg/kg添加水平的測定，加標(biāo)回收率為71.9%～86.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.4%～3.6%。綜上所述，UPLC-MS/MS的靈敏度、回收率、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性都優(yōu)于另外2種方法。

2.4.2 檢測結(jié)果 從表7可以看出，ELISA法與HPLC法檢測茶葉中的黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2均出現(xiàn)陽性結(jié)果，UPLC-MS/MS均為陰性結(jié)果。HPLC-FLD方法原理是利用分析物的保留時(shí)間作定性依據(jù)，外標(biāo)物進(jìn)行定量，茶葉樣品基質(zhì)復(fù)雜，基質(zhì)中的組分與分析物極性等化學(xué)性質(zhì)相同情況下會造成相似或相同的保留時(shí)間影響定性結(jié)果從而導(dǎo)致誤判。UPLC-MS/MS方法原理采用分析物的保留時(shí)間和結(jié)構(gòu)離子碎片作為定性依據(jù)，定性結(jié)果更為準(zhǔn)確。在分析物定性方面，UPLC-MS/MS方法優(yōu)于HPLC-FLD方法，樣品經(jīng)過特異性免疫親和柱后，可有效去除茶葉的復(fù)雜基質(zhì)，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)物質(zhì)的凈化。在MRM掃描模式下，能準(zhǔn)確、快速地檢測茶葉中的黃曲霉毒素含量，有效地避免假陽性結(jié)果。免疫親和凈化-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等特點(diǎn)，有助于提高食品檢測實(shí)驗(yàn)室的分析效率，降低成本，從而為茶葉中的黃曲霉毒素含量的測定提供參考。

3 結(jié)論

本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、高效液相色譜法（HPLC）、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-MS/MS）法對普洱茶樣品進(jìn)行黃曲霉毒素分析檢測，分析3種方法檢測普洱茶中黃曲霉毒素的適用性及普洱茶中黃曲霉毒素的含量情況。結(jié)果表明，ELISA法測得結(jié)果為8.94～588μg/kg，HPLC法測得結(jié)果為0.318～0.677μg/kg，UPLC-MS/MS法結(jié)果均為未檢出。UPLC-MS/MS法具有選擇性較強(qiáng)、重現(xiàn)性好、穩(wěn)定性高、靈敏度高的特點(diǎn)，對茶葉這種基質(zhì)復(fù)雜的樣品能有效減少雜質(zhì)干擾，有效避免假陽性結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1]蔡新，張理珉，楊善禧，等.GB/T 22111—2008地理標(biāo)志產(chǎn)品普洱茶[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008：2.

[2]周紅杰.云南普洱茶[M].昆明：云南科技出版社，2004：114-124.

[3]龔加順，周紅杰.云南普洱茶化學(xué)[M].昆明：云南科技出版社，2011：244-251.

[4]周紅杰，龔加順.普洱茶與微生物[M].昆明：云南科技出版社，2012：183-197.

[5]李少暉，任丹丹，謝云峰，等.食品中黃曲霉毒素檢測方法研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2015，6（4）：1107-1108.

[6]Kurtzman C P，Horn B W，Hesseltine C W.Aspergillusnomius，a new aflatoxin-producing species related to Aspergillus flavus and Aspergillus tamari[J].Antonie van Leeuwenhoek，1987，53：147-158.

[7]張鑫，王福，陳鴻平，等.中藥中真菌及真菌毒素污染研究現(xiàn)狀[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2015（11）：31.

[8]蘇志.黃曲霉毒素的危害[J].食品安全，2006（3）：44-45.

[9]王長宇.食品中黃曲霉毒素的處理措施[J].中國新技術(shù)新產(chǎn)品，2010（5）：8.

[10]International Agency for Research on Cancer（IARC）-Summaries a未檢出 Evaluations.1993，56：245.

[11]KHAYOONWS，SAADB，YAN C B，et al.Determination of aflatox-ins in animal feeds by HPLC with multifunctional column clean-up[J].Food Chemistry，2010，118（3）：882-886.

[12]LI Peiwu，ZHANG QI，ZHANG Wen，et al.Development of a class-specific monoclonal antibody based ELISA for aflatoxins in peanut[J].Food Chemistry，2009，115（1）：313-317.

[13]BRAICU C，PUIA C，BODOKII E，etal.Screening and quantificationof aflatoxins a未檢出 ochratoxin A in different cereals cultivated in Romaniausing thin-layer chromatography densitometry[J].Journal of Food Quality，2008，31（1）：108-120.

[14]劉麗娜，李耀磊，金紅宇，等.免疫親和凈化HPLC柱后光化學(xué)衍生熒光法測定動物藥中黃曲霉毒素[J].中草藥，2017，48（06）：1220-1224.

[15]黎睿，謝剛，王松雪.高效液相色譜法同時(shí)檢測糧食中常見8種真菌毒素的含量[J].食品科學(xué)，2015，36（06）：206-210.

[16]陳旭明，李婷.酶聯(lián)免疫吸附結(jié)合免疫親和柱-高效液相色譜法檢測大米中黃曲霉毒素B1的研究[J].包裝與食品機(jī)械，2016，34（06）：68-70，64.

[17]García-Moraleja A，F(xiàn)ont G，Ma es J，et al.Simultaneous determination of mycotoxin in commercial coffee[J].Food Control，2015，57：282.

[18]Campbell K，Cavalcante A L F，Galvin-King P，et al.Evaluation of an alternative spectroscopic approach for aflatoxin analysis：comparative analysis of food and feed samples with UPLC-MS/MS[J].Sensor Actuat B-Chem，2017，239：1087.

[19]Ediage E N，Poucke C V，Saeger S D.A multi-analyte LC-MS/MS method for the analysis of 23 mycotoxins in different sorghum varieties：the forgotten sample matrix [J].Food Chem.，2015，177：397.

[20]Flores-Flores M E，González-Peas E.An LC-MS /MS method for multi-mycotoxin quantification in cow milk [J].Food Chem.，2017，218：378.

[21]Andrade P D，Dantas R R，Caldas E D.Determination of multimycotoxins in cereals and of total fumonisins in maize products using isotope labeled internal standard and liquid chromatography/ tandem mass spectrometry with positive ionization[J].J Chromatogr A，2017：138.

[22]Al-Taher F，Cappozzo J，Zweigenbaum J，et al.Detection and quantitation of mycotoxins in infant cereals in the U.S.market by LC-MS /MS using a stable isotope dilution assay[J].Food Control，2017，72：27.

[23]宋衛(wèi)得，蘇征，惠希東，等.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在食品真菌毒素檢測中的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2016，37（17）：395-399.

[24]PENAR，ALCARAZM，ARCEL，etal.Screening of aflatoxins in feedsamples using a flow system coupled to capillary electrophoresis[J].Journal of Chromatography A，2002，967（2）：303-314.

[25]陳建彪，董麗娜，劉嬌，等.QuEChERS在食品中真菌毒素檢測的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2014，35（11）：286-291.

[26]陳若恒，譚志熹，張秋麗.荔灣區(qū)茶葉批發(fā)市場普洱茶中黃曲霉毒素B1污染調(diào)查[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，24（14）：2088-2089，2093.

[27]陳建玲，李文學(xué)，楊光宇，等.廣州某茶葉市場普洱茶中多種生物毒素污染現(xiàn)狀調(diào)查[J].癌變-畸變-突變，2011，23（1）：68-71.

[28]李亞莉.LC-MS/MS法檢測普洱茶中黃曲霉毒素及安全性評價(jià)研究[A]//中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會、云南省人民政府.第十六屆中國科協(xié)年會——分12茶學(xué)青年科學(xué)家論壇論文集[C].中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會、云南省人民政府：中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會學(xué)會學(xué)術(shù)部，2014：6.

（責(zé)編：張宏民）