李新源，張 娜，張 琰，黃晶晶，賀 爽，趙東利

(大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院，遼寧大連 116622)

廣藿香(Pogostemoncablin(Blanco)Benth.)為唇形科刺蕊草屬植物，其干燥地上部分為中國常用中藥材“廣藿香”[1]，具有抗菌、抗病毒、驅(qū)蟲和調(diào)節(jié)免疫等功效[2-3]。除藥用之外，還用于食品和香料等領(lǐng)域[4]。1 000多年以前，由菲律賓、印度尼西亞等引進(jìn)中國廣東省進(jìn)行栽培，由于氣候條件差異，鮮見開花結(jié)籽，故以扦插無性繁殖為主，導(dǎo)致品種退化，產(chǎn)量降低[5]，育種研究變得尤為重要。植物組織培養(yǎng)是一種有效且成熟的植物育種技術(shù)，本研究利用該技術(shù)，以MS(Murashige and Skoog)[6]為基本培養(yǎng)基，添加6-芐氨基嘌呤(6-Benzyladenine，6-BA)、萘乙酸(naphthalene acetic acid，NAA)和吲哚乙酸(indole-3-acetic acid，IAA)等3種激素，單獨(dú)或配合使用誘導(dǎo)廣藿香試管苗再生芽的發(fā)生，為廣藿香的快速繁殖及育種研究提供新的方法。

1 材料與方法

材料為大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院本科生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的廣藿香脫毒苗的莖尖。

以6-BA、NAA和IAA等3種激素單獨(dú)或配合使用誘導(dǎo)廣藿香試管苗再生芽的發(fā)生，設(shè)計(jì)10個(gè)組合，見表1?；A(chǔ)培養(yǎng)基為MS，另外含蔗糖3%，瓊脂0.55%，pH值6.5，121 ℃高壓滅菌15 min[7]。

剪取無菌苗莖尖2～5 mm，去掉葉片，接種于培養(yǎng)基中，每個(gè)處理3瓶重復(fù)，每瓶6株。培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計(jì)再生芽誘導(dǎo)率(再生芽誘導(dǎo)率=有芽發(fā)生的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù))、繁殖系數(shù)(繁殖系數(shù)=苗的總數(shù)/接種的外植體數(shù))、苗高度和生長情況。

培養(yǎng)條件：7:00到19:00，25 ℃，光照2 000 lx；19:00到次日7:00，18 ℃，無光照。

2 結(jié)果與分析

不添加激素的對照組，不僅再生芽誘導(dǎo)率低(19.2%)，繁殖系數(shù)也較低(1.2)，且苗的生長狀態(tài)不佳，玻璃化嚴(yán)重，葉片淺綠(表1和圖1)。而添加激素的組合，均優(yōu)于對照組。其中單一激素組，以6-BA 0.5 mg/L組為最佳，誘導(dǎo)率達(dá)到100%，繁殖系數(shù)達(dá)到4.2(表1的7號組)，且生長狀態(tài)較好，苗的高度比較均勻，葉片深綠，較為茂盛(圖2)。其次為NAA 0.5 mg/L組，誘導(dǎo)率達(dá)到82.3%，繁殖系數(shù)為3.1(表1的8號組)，但是苗的狀態(tài)明顯不及6-BA 0.5 mg/L組，玻璃化嚴(yán)重，葉片淺綠(圖3)。

6-BA與NAA組合使用情況下，NAA質(zhì)量濃度不變，隨著6-BA質(zhì)量濃度升高，再生芽誘導(dǎo)率也上升，且6-BA在0.5～1.0 mg/L范圍內(nèi)，誘導(dǎo)率均為100%，但是繁殖系數(shù)卻呈現(xiàn)先上升后下降的情況，即中間質(zhì)量濃度組MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L的繁殖系數(shù)為最高(3.2)；生長狀態(tài)呈現(xiàn)兩端低中間高的情況(見表1的1-3號)，即兩端質(zhì)量濃度組，苗的高度要么參差不齊，要么矮小，葉片淺綠，或者呈現(xiàn)玻璃化。故最佳組合為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L。

6-BA與IAA組合，IAA質(zhì)量濃度不變，隨著6-BA質(zhì)量濃度升高，繁殖系數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢，以MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L組為最佳，達(dá)到4.3；而誘導(dǎo)率則在6-BA 0.5 mg/L時(shí)，即達(dá)到100%，之后保持不變。生長狀態(tài)以MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L組為最佳，不僅苗的高度比較均勻，葉片深綠，而且長勢茂盛(表1的6號組，圖4)，故最佳激素組合是MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L。

表1 不同激素組合對廣藿香試管苗再生芽發(fā)生的影響Tab.1 Effects of different phytohormone combinations on regeneration bud induction of test-tube plantlet of Pogostemon cablin (Blanco) Benth.

再生芽誘導(dǎo)率達(dá)到100%，且繁殖系數(shù)超過4.0的有2組，即MS+6-BA 0.5 mg/L組和MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L組，這2組的生長狀態(tài)無明顯差異，均較好。故綜合各項(xiàng)指標(biāo)，以MS+6-BA 0.5 mg/L組和MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L組為較佳的誘導(dǎo)廣藿香試管苗再生芽發(fā)生的組合。

3 討 論

廣藿香的組織培養(yǎng)研究一直較受關(guān)注，陸續(xù)有報(bào)道[5,7-13]。再生芽的誘導(dǎo)途徑主要有2種：一種是通過外植體的脫分化與再分化過程實(shí)現(xiàn)，即以葉片、莖段為外植體誘導(dǎo)其脫分化形成愈傷組織，之后誘導(dǎo)愈傷組織再分化為芽；另外一種是直接器官發(fā)生途徑，即以莖尖、莖節(jié)為外植體直接誘導(dǎo)再生芽發(fā)生[5]。第一種方式報(bào)道較多，其愈傷組織的再分化過程中，多數(shù)研究采用單一且較低質(zhì)量濃度的6-BA即6-BA 0.1～0.3 mg/L[8-10]，少數(shù)學(xué)者采用較高質(zhì)量濃度的6-BA，即6-BA 0.5～2 mg/L[11-12]，也有個(gè)別學(xué)者采用6-BA與NAA組合使用[13]，可見各家研究報(bào)道并不一致。直接采用外植體誘導(dǎo)叢芽發(fā)生的報(bào)道不多，僅黃鋒和曾勁松[14]報(bào)道，采用6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L獲得較好的芽誘導(dǎo)效果，繁殖系數(shù)達(dá)到5.8，且如果6-BA質(zhì)量濃度過高，則長勢下降，無效芽增多，芽短簇，無法切割繁殖。本研究6-BA和NAA組合中，得出MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L為最佳的激素組合，但是繁殖系數(shù)未能達(dá)到該報(bào)道5.8的水平。用6-BA與IAA組合誘導(dǎo)廣藿香再生芽發(fā)生的研究尚未見有報(bào)道。本研究表明，除與前人研究相類似的結(jié)果，即6-BA 0.5 mg/L對芽再生有較好的效果之外，6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L獲得較好的誘導(dǎo)率及繁殖系數(shù)。本研究為廣藿香的快速繁殖及育種研究提供更多方法。

4 結(jié) 論

以6-BA、NAA和IAA等3種激素單獨(dú)或配合使用誘導(dǎo)廣藿香試管苗再生芽的發(fā)生，MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L及MS+6-BA 0.5 mg/L均獲得較好效果。