【摘要】目的：于血液HBV（乙型肝炎病毒）篩查中應(yīng)用核酸檢測的價值進(jìn)行探究。方法：對54863份HBsAg（乙型肝炎病毒表面抗原）陰性獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本進(jìn)行篩查，在酶聯(lián)免疫法檢測基礎(chǔ)上，通過實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對陰性（乙型肝炎病毒表面抗原、酶聯(lián)免疫法）血液標(biāo)本做乙型肝炎病毒核酸擴增檢測，陽性血液標(biāo)本做乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物、核酸定量等檢測。結(jié)果：在本課題的54 863份血液標(biāo)本中，共檢測出7份乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸陽性，其陽性率是0.013 %。7份乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸陽性標(biāo)本中，有兩份標(biāo)本乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物均呈陰性，所有標(biāo)本的乙型肝炎病毒表面抗原均呈陰性，其余5份標(biāo)本其他標(biāo)志物為陽性。1號標(biāo)本的核算定量是28.9 IU/mL，2號標(biāo)本的核算定量是27.5 IU/mL，3號標(biāo)本的核算定量是56.3 U/mL，4號標(biāo)本的核算定量是115.3 IU/mL，5號標(biāo)本的核算定量是28.9 IU/mL，6號標(biāo)本的核算定量是<6 IU/mL，7號標(biāo)本的核算定量是45.36 IU/mL。結(jié)論：對于酶聯(lián)免疫法檢測呈乙型肝炎病毒表面抗原陰性的血液標(biāo)本，仍可能是乙型肝炎病毒感染者的血液標(biāo)本，酶聯(lián)免疫法檢測+核酸檢測可縮短血液HBV篩查的檢測窗口期，尤其可提高乙型肝炎病毒表面抗原陰性血液標(biāo)本的乙型肝炎病毒檢出率。

【關(guān)鍵詞】血液標(biāo)本；乙型肝炎病毒；篩查；核酸檢測；價值

[中圖分類號]R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）09-0203-02

在臨床中，輸血是重要治療手段之一，該方法挽救了很多患者的生命，但是輸血存在不安全性，會對患者造成嚴(yán)重?fù)p害[1]。所以，就要確保輸血安全。隨獻(xiàn)血者的篩選程序不斷改進(jìn)，再加上病毒血清學(xué)檢測的靈敏度提高，明顯降低乙型肝炎病毒經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險[2]。但因血液感染病毒后的免疫靜默、血清轉(zhuǎn)換窗口期、病毒變異等情況，可導(dǎo)致酶聯(lián)免疫法檢測乙型肝炎病毒表面抗原時發(fā)生漏檢，所以，輸血、輸注血液制品等仍存在乙型肝炎病毒傳播的殘余風(fēng)險[3]。病毒窗口期較長是輸血感染主要的原因，因此就要讓窗口期變短，提高病毒的檢出率，確保輸血安全。有研究指出：核酸擴增檢測同酶聯(lián)免疫檢測存在互補作用，可提高血液病毒感染窗口期檢出率，明顯減少病毒經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險[4]。本課題主要是進(jìn)一步研究血液HBV篩查中應(yīng)用核酸檢測的價值，見下文。

1 資料和方法

1.1試劑和儀器 全自動酶免分析儀，核酸提取儀，實時熒光定量檢測系統(tǒng)，乙型肝炎病毒表面抗原ELISA試劑，乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物試劑（乙型肝炎病毒表面抗原、乙型肝炎表面抗體、乙型肝炎E抗原、乙型肝炎E抗體、乙肝核心抗體），乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸篩查試劑以及定量試劑。

1.2標(biāo)本和信息儲存 血液標(biāo)本均來自我市的無償獻(xiàn)血者，無添加劑，2℃～8℃環(huán)境下保存，確保在24 h內(nèi)完成血清分離。核算檢測陽性標(biāo)本在零下80℃的環(huán)境下保存。標(biāo)本條碼信息經(jīng)掃描儀記錄、儲存。

1.3核酸篩查 提取200μL的血液標(biāo)本，磁珠法經(jīng)自動核酸提取儀提取核酸，于100μL的洗脫液中進(jìn)行洗脫，當(dāng)做擴增的模板。之后取25μL的模板，加15μL含探針、乙型肝炎病毒特異引物、Taq酶等PCR反應(yīng)液，先在50℃環(huán)境下放置2 min，之后在90℃環(huán)境下放置3 min，之后按94℃、10 s；50℃、10 s；65℃、35 s的順序重復(fù)進(jìn)行45個循環(huán)，實時熒光定量檢測系統(tǒng)判讀、分析結(jié)果。嚴(yán)格按試劑盒的說明書進(jìn)行操作。

1.4追蹤檢測 核酸篩查呈陽性的標(biāo)本，經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物， 乙型肝炎病毒核酸定量試劑進(jìn)行核酸定量檢測。

2 結(jié)果

2.1總結(jié)篩查結(jié)果 在本課題的54 863份血液標(biāo)本中，共檢測出7份乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸陽性，其陽性率是0.013 %。

2.2總結(jié)陽性標(biāo)本的乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測結(jié)果 7份乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸陽性標(biāo)本中，有兩份標(biāo)本乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物均呈陰性，所有標(biāo)本的乙型肝炎病毒表面抗原均呈陰性，其余5份標(biāo)本其他標(biāo)志物為陽性。

2.3總結(jié)陽性標(biāo)本的核酸定量結(jié)果 1號標(biāo)本的核算定量是28.9 IU/mL，2號標(biāo)本的核算定量是27.5 IU/mL，3號標(biāo)本的核算定量是56.3 U/mL，4號標(biāo)本的核算定量是115.3 IU/mL，5號標(biāo)本的核算定量是28.9 IU/mL，6號標(biāo)本的核算定量是<6 IU/mL，7號標(biāo)本的核算定量是45.36 IU/mL。

3 討論

對于乙型肝炎來說，病原體主要是乙型肝炎病毒， 主要包含禽嗜肝脫氧核糖核酸病毒和正嗜肝脫氧核糖核酸病毒屬，其中正嗜肝脫氧核糖核酸病毒屬是導(dǎo)致人們出現(xiàn)感染主要的菌屬[5]。從乙型肝炎病毒生物學(xué)特征上來講，可把其主要分成：①結(jié)構(gòu)、形態(tài)，乙型肝炎病毒是包膜、核衣殼組成， 包膜中有糖蛋白、細(xì)胞脂肪、乙型肝炎病毒表面抗原等存在， 核心顆粒是乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸以及乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸多聚酶、乙型肝炎核心抗原，是病毒完整的一個形態(tài)， 存在一定的感染性。②生活周期，乙型肝炎病毒可吸附在肝細(xì)胞表面， 經(jīng)大包膜蛋白PreS1區(qū)同病毒受體相結(jié)合， 可對細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)行介導(dǎo)， 鈉離子-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運蛋白是介導(dǎo)乙型肝炎病毒進(jìn)入細(xì)胞、建立感染的一個重要受體[6]。血液傳播是乙型肝炎病毒主要的傳播方式，我國是乙型肝炎高發(fā)的一個國家，因此要重視控制乙型肝炎的傳播， 在獻(xiàn)血人群中篩查乙肝病毒具有重要的意義。乙型肝炎病毒復(fù)制活躍度可經(jīng)乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸反映出來， 而且乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸還可反映病毒傳染性，因此，乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸可作為指導(dǎo)觀察抗病毒藥物療效、患者預(yù)后重要的一個觀察指標(biāo)[7]。

臨床以往常用酶聯(lián)免疫法對乙型肝炎病毒進(jìn)行檢測，檢測主要的指標(biāo)是乙型肝炎病毒表面抗原， 操作簡單、方便，但檢測乙型肝炎病毒有窗口期， 而漏診。對于定量檢測來說， 突破了免疫學(xué)的方式， 是對病毒核酸的水平進(jìn)行檢測，能夠清晰反映病毒具體水平[8]。我國基因檢測技術(shù)以及醫(yī)療科技在不斷的發(fā)展， 基因診斷技術(shù)在疾病治療中得到廣泛應(yīng)用， 提取核算是基因診斷的關(guān)鍵步驟[9]。乙型肝炎病毒核酸擴增檢測屬于一種生物學(xué)方式， 可測定乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸水平，有效反映機體病毒感染水平， 靈敏度很高。而且，還可讓乙型肝炎病毒的窗口期縮短， 降低病毒傳播風(fēng)險， 彌補酶聯(lián)免疫法的不足[10]。

本課題結(jié)果是：在本課題的54 863份血液標(biāo)本中，共檢測出7份乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸陽性，其陽性率是0.013 %。7份乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸陽性標(biāo)本中，有兩份標(biāo)本乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物均呈陰性，所有標(biāo)本的乙型肝炎病毒表面抗原均呈陰性，其余5份標(biāo)本其他標(biāo)志物為陽性。1號標(biāo)本的核算定量是28.9 IU/mL，2號標(biāo)本的核算定量是27.5 IU/mL，3號標(biāo)本的核算定量是56.3 U/ mL，4號標(biāo)本的核算定量是115.3 IU/mL，5號標(biāo)本的核算定量是28.9 IU/mL，6號標(biāo)本的核算定量是<6 IU/mL，7號標(biāo)本的核算定量是45.36 IU/mL。說明：在54 863份液標(biāo)本中，酶聯(lián)免疫法檢測漏檢了7份，其漏檢率是0.013 %。在兩份乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物均呈陰性的標(biāo)本中，有1份在隨訪中發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗原轉(zhuǎn)陽，此為典型的窗口期感染血液標(biāo)本，對于窗口期標(biāo)本檢出來說，可表明核酸檢測在血液標(biāo)本篩查中存在重要的價值。

總之，對于酶聯(lián)免疫法檢測呈乙型肝炎病毒表面抗原陰性的血液標(biāo)本，仍可能是乙型肝炎病毒感染者的血液標(biāo)本，酶聯(lián)免疫法檢測+核酸檢測可縮短血液HBV篩查的檢測窗口期，尤其可提高乙型肝炎病毒表面抗原陰性血液標(biāo)本的乙型肝炎病毒檢出率。

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作者簡介：崔永利（1977.01-），男，漢族，山東省淄博市人，大學(xué)本科，主管技師，研究方向：檢驗醫(yī)學(xué)。E_mail：CYL0533@126.com