趙欣桐，陳曉東，李子吉，張巨明，劉天增

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院，廣東省草業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東廣州510642）

草坪對(duì)于目前的生活來(lái)說(shuō)是建設(shè)人類文明的重要組成部分，對(duì)生態(tài)環(huán)境的保護(hù)與改善起到良好作用。但目前由于氣候變化和水資源的不合理利用，加劇了土壤鹽漬化程度，致使草地資源退化嚴(yán)重，嚴(yán)重影響農(nóng)牧業(yè)的發(fā)展和生態(tài)環(huán)境建設(shè)［1］。草坪是陸地的主要生態(tài)系統(tǒng)之一，對(duì)改善生態(tài)環(huán)境有著重要作用［2］。因此，培育或篩選合適的耐鹽草種或改善鹽堿地環(huán)境對(duì)草坪草的建植與發(fā)展具有重要意義。

鹽脅迫是目前限制植物生長(zhǎng)的主要逆境因子之一，極大地影響了植物的生長(zhǎng)［3］，研究表明，鹽堿環(huán)境會(huì)限制植物生長(zhǎng)，植物生長(zhǎng)的不同時(shí)期對(duì)鹽堿的敏感程度不同，其中種子萌發(fā)期最為敏感，鹽濃度越高，種子萌發(fā)受抑制程度越高［4－5］。而種子的萌發(fā)之所以會(huì)率先受到抑制，是因?yàn)樵谠撾A段種子對(duì)外界環(huán)境脅迫的抗性和耐性最弱［6］。有研究［7］表明，土壤中鹽分會(huì)通過(guò)滲透調(diào)節(jié)與離子效應(yīng)等途徑影響種子的萌發(fā)，導(dǎo)致植物的水分利用效率降低、氣孔關(guān)閉、葉綠素降解，使草坪草生長(zhǎng)發(fā)育受阻，并直接影響草坪成坪質(zhì)量。李源［8］的研究以海濱雀稗（Paspalum vaginatum）“Salam”和“Seaspray”、馬尼拉結(jié)縷草（Zoysia matrella）、結(jié)縷草“蘭引三號(hào)”（Zoysia japonica）和狗牙根（Cynodon dactylon）“Tifway”5種暖季型草坪草為試驗(yàn)材料，表明鹽脅迫會(huì)降低草坪草的坪用質(zhì)量和葉綠素含量，還會(huì)引起植物的損傷，限制其生長(zhǎng)發(fā)育［9－10］。Munns等［11］的研究表明，鹽脅迫對(duì)植物造成損害是由于高濃度鹽離子（Na+和Cl－）產(chǎn)生的高滲透壓。此外，鹽脅迫還會(huì)造成植物根系過(guò)度積累單一離子（如Na+）形成單鹽毒害，并干擾其他離子（如K+、Ca2+）的吸收與代謝，破壞植物體內(nèi)離子的動(dòng)態(tài)平衡［12］，降低植物根系的吸水能力，致使草坪草的生長(zhǎng)受損［13］。因此土壤鹽漬化逐漸成為影響草坪發(fā)展的主要問(wèn)題之一［14－15］。

植物內(nèi)生細(xì)菌是一類在健康植物組織中存活而不會(huì)導(dǎo)致宿主植物表現(xiàn)出明顯感染癥狀的細(xì)菌［16］。內(nèi)生細(xì)菌與宿主植物之間互利共生，幾乎所有植物中都有內(nèi)生細(xì)菌，并且與植物在不同環(huán)境中協(xié)同進(jìn)化［17］，增強(qiáng)植物對(duì)病害、鹽堿、重金屬等的抗逆能力［18－19］，并引發(fā)各種脅迫條件下的系統(tǒng)抗性。這些有益內(nèi)生菌被稱為植物促生細(xì)菌（plant growth promoting bacteria，PGPB），其多存在于根際和葉際［20］。Mayak等［21］研究推測(cè)在一定鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌可促進(jìn)植物對(duì)礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收，改變植物體內(nèi)離子平衡，并增加植物對(duì)水分的吸收和利用能力。此外，促進(jìn)植物生長(zhǎng)的細(xì)菌還可以作為植物刺激劑或生物肥料，因?yàn)槠溆兄诰S持土壤肥力，并且是可持續(xù)農(nóng)業(yè)中農(nóng)藥和其他化學(xué)肥料的有利替代物［22］。

狗牙根為禾本科狗牙根屬多年生草本植物，為世界三大暖季型草坪草之一，因具有繁殖力強(qiáng)、抗旱、抗鹽堿、耐踐踏、色澤好等優(yōu)點(diǎn)，可作為重要的牧草、草坪草及水土保持種質(zhì)資源，被國(guó)內(nèi)外廣泛用于建植運(yùn)動(dòng)場(chǎng)、公園及固土護(hù)坡［23－25］。目前，我國(guó)草坪和綠地面積在持續(xù)增加，但是由于水資源緊缺，使用再生水和非生活用水進(jìn)行灌溉已經(jīng)不可避免。然而再生水中含有大量的鹽分離子，長(zhǎng)期使用再生水灌溉草坪綠地必然導(dǎo)致土壤含鹽量上升，進(jìn)而影響草坪質(zhì)量和使用年限。目前狗牙根耐鹽性研究多為培育新品種及篩選新品系［24］，而植物內(nèi)生菌有利于植物緩解鹽脅迫，其具有巨大的應(yīng)用潛力。本研究以植物內(nèi)生腸桿菌（Enterobacter）為研究對(duì)象，探討其對(duì)狗牙根種子萌發(fā)、生長(zhǎng)及耐鹽性調(diào)控的生理機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

狗牙根種子選用從天津百綠國(guó)際草業(yè)有限公司所購(gòu)的“Common”品種。內(nèi)生細(xì)菌Enterobacter ludwigii（B30）和Enterobacter bugandensis（B14）由本課題組前期從耐鹽植物海濱雀稗中分離篩選獲得，現(xiàn)保存于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)科學(xué)實(shí)驗(yàn)室低溫冰箱中。

1.2 內(nèi)生細(xì)菌的菌懸液配制

試驗(yàn)于2019年10月－2020年1月于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。將低溫保存的B30和B14菌株活化，后在營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中加入2 mL B30菌液作為單一菌液，在營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中分別加入B30和B14各1 mL作為混合菌液，然后在200 r·min－1、30℃的搖床中震蕩培養(yǎng)48 h，測(cè)定菌液細(xì)菌細(xì)胞密度OD600=0.8時(shí)待用。本研究前期的菌株耐鹽能力測(cè)試發(fā)現(xiàn)，菌株B30的耐鹽能力較強(qiáng)，菌株B14的耐鹽能力很弱，而混合菌液（B3014）耐鹽能力高于B30菌液且無(wú)拮抗作用，故本試驗(yàn)中沒(méi)有配制B14菌液接種狗牙根種子和幼苗。

1.3 狗牙根種子萌發(fā)試驗(yàn)

選取籽粒飽滿的狗牙根種子用75%酒精表面消毒60 s，無(wú)菌水沖洗3次，在無(wú)菌水中浸泡24 h。將100粒種子置于直徑為9 cm鋪有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中，用移液槍分別移取配制好的B30菌液和B3014混合菌液，浸泡種子，對(duì)照組接種等體積的液體培養(yǎng)基，每個(gè)處理5次重復(fù)，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接菌處理24 h后，在培養(yǎng)皿中加入150 mmol·L－1的NaCl溶液進(jìn)行鹽脅迫處理，從處理第3天開(kāi)始，每天觀察并統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，第14天后統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率并用游標(biāo)卡尺測(cè)量狗牙根幼苗的胚根和胚芽。

1.4 狗牙根盆栽試驗(yàn)

狗牙根種子經(jīng)75%的酒精表面消毒后，將100粒籽粒飽滿的狗牙根種子均勻播種于口徑10 cm，高9 cm的方形花盆中，播種深度0.5 cm，底部鋪設(shè)白色紗網(wǎng)，土壤基質(zhì)由泥炭和河沙1∶1配置而成，播種后置于人工氣候箱中（白天30℃14 h，晚上26℃10 h，相對(duì)濕度80%）培養(yǎng)。育苗期間早晚各澆一次水，保持土壤濕潤(rùn)，待出苗后逐漸減少澆水次數(shù)，以正常的草坪管理方式養(yǎng)護(hù)至成坪，此期間保證各處理生長(zhǎng)條件及養(yǎng)護(hù)方式處于同一條件。待狗牙根成坪后，向?qū)?yīng)處理盆栽中澆灌40 mL對(duì)應(yīng)菌液（OD600=0.8），分4次進(jìn)行，每次10 mL，每次間隔24 h，空白對(duì)照澆灌等量的培養(yǎng)基［26］。每個(gè)接種處理設(shè)置5次重復(fù)，澆灌菌液1周后，對(duì)其進(jìn)行鹽脅迫處理。鹽脅迫處理采用鹽水澆灌方式，每次澆灌50 mL NaCl溶液，隔天澆灌一次。為避免鹽濃度過(guò)高對(duì)其造成損傷，NaCl溶液濃度從50 mmol·L－1開(kāi)始逐漸遞增至200 mmol·L－1的最終濃度。在達(dá)到最終鹽濃度后的5、10、15 d取樣測(cè)定以下指標(biāo)。

1.5 測(cè)定內(nèi)容與方法

采用目測(cè)打分法測(cè)定草坪質(zhì)量，8～9分很均勻、6～7分較均勻、4～5分均勻、2～3分不均勻、1分極不均勻。每個(gè)處理由3位觀測(cè)人員獨(dú)立打分，計(jì)算平均數(shù)為評(píng)分結(jié)果。

苗長(zhǎng)與根長(zhǎng)測(cè)定：鹽處理15 d后，取不同處理的完整植株5株，除去葉片灰塵，洗凈根系基質(zhì)土，將其分為地上部分與根系部分，用游標(biāo)卡尺測(cè)量。

生物量測(cè)定：鹽處理15 d后，取不同處理的完整植株5株，除去葉片灰塵，洗凈根系基質(zhì)土，將其分為地上部分與根系部分，然后放置于烘箱中，105℃殺青15 min，80℃烘干24 h后稱取干重。

相對(duì)電導(dǎo)率測(cè)定：取剪碎并混勻的葉片0.1 g，分別置于5 mL去離子水刻度試管中，蓋上玻璃塞置于室溫下浸提12 h，測(cè)定外滲溶液電導(dǎo)率C1，之后將試管放入沸水中水浴15 min，冷卻至室溫后搖勻并測(cè)定外滲溶液電導(dǎo)率C2［27］。相 對(duì)電導(dǎo)率=C1/C2×100%。

葉片相對(duì)含水量測(cè)定：取剪碎并混勻的葉片0.1 g，除去表面灰塵，稱其鮮重，常溫浸泡24 h后用吸水紙擦干葉片，稱重得飽和鮮重，然后置于烘箱中，105℃殺青15 min，80℃烘干24 h后取出稱其干重［28］。葉片相對(duì)含水量=［（鮮重－干重）/（飽和鮮重－干重）］×100%。

葉綠素含量測(cè)定：取0.1 g樣品浸泡在裝有10 mL丙酮/無(wú)水乙醇（體積比1∶1）溶液的帶蓋10 mL離心管中，遮光處理24 h，至葉片發(fā)白。以空白溶劑作為對(duì)照，分別在波長(zhǎng)645和663 nm處測(cè)定吸光度［29］。

式中：C表示總?cè)~綠素濃度（mg·mL－1），V表示測(cè)試液體積（mL），m表示樣品重量（g）。A表示吸光值。

葉片K+、Na+含量測(cè)定：取不同處理的葉片鮮葉，置于烘箱中，烘干至恒重后磨成細(xì)碎的粉末，取0.5 g加入30 mL硝酸－高氯酸（5∶1）混合酸，瓶口放一只彎頸漏斗，靜置過(guò)夜。第2天消煮時(shí)保持微沸狀態(tài)，這時(shí)放出大量煙霧（NO2）。當(dāng)棕色氣體消失，升高爐溫使SiO2脫水至冒白煙為止。冷卻后，加入20 mL去離子水，過(guò)濾到150 mL容量瓶?jī)?nèi)，用熱的1%鹽酸溶液洗滌三角瓶和濾渣，直至無(wú)Fe3+反應(yīng)后定容搖勻，作為待測(cè)溶液［30］。用空氣－C2H2火焰，分別在766.5和589.0 nm處測(cè)定鉀和鈉含量。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0進(jìn)行差異顯著性分析（Duncan，P＜0.05），利用Microsoft Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根種子萌發(fā)的影響

在150 mmol·L－1鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根種子萌發(fā)有顯著的促進(jìn)作用（P＜0.05）。與CK相比，接種混合菌液B3014的種子發(fā)芽率提高了8.7%，而接種單一菌液B30的種子發(fā)芽率提高了5.0%。在接菌處理中，接種混合菌液B3014對(duì)種子萌發(fā)的促進(jìn)效果顯著高于接種單一菌液B30（P＜0.05）（圖1）。

圖1 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根種子萌發(fā)的影響Fig.1 Seed germination of bermudagrass inoculated with endophytic bacteria under salt stress

2.2 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根幼苗的影響

在鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根胚根和胚芽的長(zhǎng)度均有顯著的促進(jìn)作用（P＜0.05）。與CK相比，接種混合菌液B3014的胚根和胚芽分別增加了2.01%和0.65%，而接種單一菌液B30的胚根和胚芽分別增加了0.38%和0.27%。在接菌處理中，接種混合菌液B3014的胚根增加量顯著高于接種單一菌液B30（P＜0.05），但胚芽的增加量差異不顯著（P＞0.05）（圖2）。

圖2 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根幼苗的影響Fig.2 Seedling growth of bermudagrass inoculated with endophytic bacteria under salt stress

2.3 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根草坪質(zhì)量和葉綠素含量的影響

在200 mmol·L－1鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌能顯著提升狗牙根草坪綜合質(zhì)量和葉片葉綠素含量（P＜0.05）（圖3）。隨著鹽脅迫處理時(shí)間的增加，草坪綜合質(zhì)量和葉綠素含量均呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)。雖然接種混合菌液B3014和單一菌液B30的草坪綜合質(zhì)量也呈下降趨勢(shì)，但與CK相比，下降幅度較小，而在兩個(gè)接菌處理中，接種混合菌液B3014更能減緩草坪質(zhì)量的下降。在鹽脅迫下，通過(guò)接種混合菌液B3014和單一菌液B30在很大程度上提升了狗牙根葉片葉綠素含量，而接種混合菌液B3014對(duì)葉片葉綠素含量的提升高于接種單一菌液B30。

圖3 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根草坪質(zhì)量和葉綠素含量的影響Fig.3 Turf quality and chlorophyll content of bermudagrass inoculated with endophytic bacteria under salt stress

2.4 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根苗長(zhǎng)和根長(zhǎng)的影響

在200 mmol·L－1鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌能顯著提升狗牙根植株的根長(zhǎng)與苗長(zhǎng)（P＜0.05）（圖4）。與CK相比，接種混合菌液B3014的植株根長(zhǎng)與苗長(zhǎng)分別提升了0.46%和0.20%。而接種單一菌液B30的植株根長(zhǎng)與苗長(zhǎng)分別提升了0.14%和0.10%。在接種菌液的處理中，接種混合菌液B3014對(duì)植株根長(zhǎng)與苗長(zhǎng)的促進(jìn)效果顯著（P＜0.05）高于接種單一菌液B30。

圖4 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根根長(zhǎng)和苗長(zhǎng)的影響Fig.4 Shoot and root length of bermudagrass inoculated with endophytic bacteria under salt stress

2.5 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根生物量的影響

在200 mmol·L－1鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌會(huì)顯著提升狗牙根的生物量（P＜0.05）。與CK相比，接種混合菌液B3014對(duì)狗牙根地上、地下生物量分別提升了0.31%和0.24%。而接種單一菌液B30對(duì)狗牙根地上、地下生物量分別提升了0.56%和0.31%。在接種菌液的處理中，接種混合菌液B3014對(duì)狗牙根生物量的提升效果顯著（P＜0.05）高于接種單一菌液B30（圖5）。

圖5 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根生物量的影響Fig.5 Root and shoot biomass of bermudagrass inoculated with endophytic bacteria under salt stress

2.6 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根相對(duì)含水量和細(xì)胞膜透性的影響

在200 mmol·L－1鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌會(huì)顯著提升狗牙根葉片的相對(duì)含水量，降低細(xì)胞滲透率（P＜0.05）。隨著鹽脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，狗牙根葉片的相對(duì)含水量均呈降低趨勢(shì)，與CK相比，接種內(nèi)生細(xì)菌會(huì)使葉片保持較高的相對(duì)含水量，且接種混合菌液B3014的作用效果高于接種單一菌液B30（P＜0.05）。與此同時(shí)，狗牙根葉片的細(xì)胞滲透率在不斷地增加，但與對(duì)照相比，接種內(nèi)生細(xì)菌會(huì)顯著降低細(xì)胞滲透率（P＜0.05）。在鹽處理5 d后，接種混合菌液B3014對(duì)狗牙根葉片細(xì)胞滲透率的降低效果顯著高于接種單一菌液B30（P＜0.05），但在鹽處理10、15 d后，接種混合菌液B3014與接種單一菌液B30相比，葉片細(xì)胞滲透率的降低效果差異不顯著（P＞0.05）（圖6）。

圖6 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根相對(duì)含水量和電導(dǎo)率的影響Fig.6 Relative water content and electrolyte leakage of bermudagrass inoculated with endophytic bacteria under salt stress

2.7 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根鈉、鉀含量的影響

在200 mmol·L－1鹽脅迫下，接種內(nèi)生細(xì)菌顯著降低狗牙根鈉離子的積累，并增加鉀離子的含量（P＜0.05）。與CK相比，接種混合菌液B3014后狗牙根葉片鈉離子含量降低了21.54%，而鉀離子含量提升了9.79%。接種單一菌液B30后狗牙根葉片鈉離子含量降低了12.11%，而鉀離子含量提升了4.53%。但在接種菌液的處理中，接種混合菌液B3014對(duì)葉片鈉含量的降低作用強(qiáng)于接種單一菌液B30，同時(shí)，接種混合菌液B3014對(duì)葉片鉀含量的提升效果也強(qiáng)于接種單一菌液B30（圖7）。

圖7 鹽脅迫下內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根鈉、鉀含量的影響Fig.7 Na+and K+content of bermudagrass inoculated with endophytic bacteria under salt stress

3 討論

種子萌發(fā)期是對(duì)鹽脅迫最為敏感的時(shí)期，種子的萌發(fā)不但影響種子的播種質(zhì)量，還會(huì)影響萌發(fā)后草坪草的生長(zhǎng)發(fā)育［31］，進(jìn)而影響狗牙根的成坪質(zhì)量。植物內(nèi)生菌作為一種促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育、增強(qiáng)宿主抗逆性的天然資源，會(huì)增強(qiáng)鹽脅迫下植物種子的萌發(fā)［32］。Mauricio等［33］與王楠等［34］的研究表明植物內(nèi)生促生細(xì)菌不但可以促進(jìn)種子萌發(fā)，還能促進(jìn)草坪草的生長(zhǎng)。本研究中，接種內(nèi)生細(xì)菌后，狗牙根種子萌發(fā)率得到顯著提升，幼苗的胚根長(zhǎng)與胚芽長(zhǎng)也得到了提升。接種菌液保證了狗牙根在鹽脅迫條件下正常的生長(zhǎng)發(fā)育，減緩鹽脅迫下植株生長(zhǎng)量和生物量受到的抑制，進(jìn)而保證狗牙根的草坪質(zhì)量。

鹽脅迫條件下，植物生理生化過(guò)程會(huì)遭到破壞，使土壤中積累大量鹽離子，致使土壤滲透勢(shì)增高，造成植物缺水。為了緩解鹽脅迫對(duì)植物帶來(lái)的損傷，植物會(huì)通過(guò)離子轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制、滲透調(diào)節(jié)機(jī)制和活性氧清除機(jī)制及三者間相互作用、協(xié)同調(diào)節(jié)來(lái)緩解鹽脅迫對(duì)其產(chǎn)生的毒害作用［35］。質(zhì)膜是活細(xì)胞與外界環(huán)境之間的連接屏障，當(dāng)細(xì)胞受到外界脅迫壓力時(shí)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜透性增大，進(jìn)而損傷細(xì)胞膜的正常生理功能和代謝作用［36］。有研究推測(cè)，在一定的鹽脅迫下，施加內(nèi)生細(xì)菌可以促進(jìn)植物對(duì)礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收，改變植物體內(nèi)離子平衡，增強(qiáng)植物對(duì)水分的吸收和利用，減緩植物在鹽脅迫下因水分吸收不徹底所帶來(lái)的負(fù)面影響［21，37］。在本試驗(yàn)中，接種內(nèi)生細(xì)菌后，鹽脅迫下葉片相對(duì)含水量顯著提升，而細(xì)胞膜透性顯著降低，維持了植物細(xì)胞的穩(wěn)定。同時(shí)，葉片葉綠素含量在鹽脅迫下受抑制程度減弱，保證了在鹽脅迫條件下狗牙根的正常光合代謝。

土壤中的離子濃度處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，任何一種離子濃度的升高對(duì)其他離子的吸收均會(huì)造成影響。植物在鹽漬環(huán)境中是否能維持植物體內(nèi)的離子平衡，對(duì)其在鹽脅迫下是否能正常生長(zhǎng)起到至關(guān)重要的作用［38］。K+是植物生長(zhǎng)的必需營(yíng)養(yǎng)元素［39］，在高鹽濃度土壤中，Na+濃度的升高，對(duì)K+的吸收會(huì)造成拮抗［40］，而將植物吸收的Na+排出體外和保持K+含量的能力是植物抗鹽的重要特性［41］。李靜［42］研究發(fā)現(xiàn)，K+外流與抗鹽能力呈負(fù)相關(guān)，因此可以通過(guò)增強(qiáng)植物細(xì)胞內(nèi)K+含量來(lái)提升植物耐鹽性。本研究中，在鹽脅迫條件下，接種植物內(nèi)生細(xì)菌后，狗牙根葉片中的K+增加，說(shuō)明接種內(nèi)生細(xì)菌后，植株通過(guò)增加K+含量來(lái)減少細(xì)胞內(nèi)離子外泄并增強(qiáng)狗牙根的耐鹽能力。在許芳芳等［43］的研究中發(fā)現(xiàn)施加EnterobacterFYP1101可以降低100 mmol·L－1鹽脅迫條件下小麥（Triticum aestivum）幼苗中Na+的吸收。本研究中，鹽脅迫條件下接種內(nèi)生細(xì)菌后，植株Na+含量明顯降低，說(shuō)明植物內(nèi)生細(xì)菌對(duì)狗牙根葉片Na+的積累會(huì)產(chǎn)生抑制作用，以此來(lái)幫助狗牙根減緩Na+的毒害。

植物促生細(xì)菌（PGPB）可以幫助植物在不同環(huán)境中獲取營(yíng)養(yǎng)，并直接或間接的促進(jìn)植物的生長(zhǎng)［44］。而耐鹽的PGPB可以很好地幫助植物克服鹽脅迫，在鹽脅迫條件下，接種內(nèi)生細(xì)菌不但可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，還可以提高植物的抗性。Diskit等［45］的研究表明腸桿菌屬的部分菌株可以通過(guò)提升鹽脅迫下植株葉片內(nèi)葉綠素含量來(lái)促進(jìn)植物生長(zhǎng)并提高植株的抗逆性，本試驗(yàn)結(jié)果與此一致。在本研究中，鹽脅迫下接種混合菌液B3014對(duì)狗牙根植株的緩解效果優(yōu)于接種單一菌液B30，出現(xiàn)此現(xiàn)象的原因可能是在植物根際存在微生物群落，在此層面，植物與微生物群落之間關(guān)系密切，產(chǎn)生協(xié)同作用，共同減緩鹽脅迫對(duì)狗牙根植株帶來(lái)的損傷。植物促生內(nèi)生細(xì)菌B14和B30雖均為耐鹽菌株，但菌株B30的耐鹽強(qiáng)度優(yōu)于菌株B14，本研究中接種單一菌株的作用效果小于接種混合菌株的原因可能是菌株B14可以加強(qiáng)菌株B30對(duì)狗牙根植株內(nèi)鉀離子的吸收，并減少鈉離子的積累，維持植物體內(nèi)的離子平衡來(lái)加強(qiáng)鹽脅迫下狗牙根的耐鹽能力。

4 結(jié)論

從整體試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，在種子萌發(fā)期間，接種混合菌液B3014會(huì)顯著提升狗牙根種子的發(fā)芽率，增加胚根及胚芽的長(zhǎng)度。在成坪期，接種混合菌液B3014會(huì)大幅度提升草坪質(zhì)量，并提升狗牙根葉片葉綠素含量，葉綠素含量的保證會(huì)加強(qiáng)狗牙根光合系統(tǒng)的活性，保證其進(jìn)行正常的光合代謝。還會(huì)提高狗牙根生物量的積累，促進(jìn)狗牙根的生長(zhǎng)，保證在鹽脅迫條件下株高與根長(zhǎng)的增長(zhǎng)量。在鹽脅迫期間，通過(guò)接種混合菌液B3014，會(huì)使狗牙根葉片保持正常的含水量，并減少細(xì)胞膜破損程度，使植物細(xì)胞可以進(jìn)行正常的代謝作用。而通過(guò)測(cè)定狗牙根植株內(nèi)鈉離子和鉀離子含量也證明了，接種混合菌液B3014后，鉀離子含量的上升，可以增強(qiáng)狗牙根體內(nèi)的滲透調(diào)節(jié)，降低狗牙根植株內(nèi)鈉離子的積累，緩解了鹽脅迫下鈉離子對(duì)狗牙根的毒害。綜上所述，接種混合菌液B3014可以更好地減緩鹽脅迫下對(duì)狗牙根生長(zhǎng)的損傷，使狗牙根在生長(zhǎng)過(guò)程中保持一個(gè)穩(wěn)定狀態(tài)，因此可以通過(guò)施加帶有內(nèi)生細(xì)菌的生物肥料，來(lái)減緩鹽漬土壤對(duì)狗牙根帶來(lái)的損害并減少化學(xué)殘留對(duì)環(huán)境造成的不良影響。