張倩穎，耿宗澤，鄧羽翔，羅誠，李東亮*，丁重陽

1 四川中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，四川省成都市錦江區(qū)成龍大道一段56號 610000；

2 江南大學(xué)生物工程學(xué)院，糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室，江蘇省無錫市蠡湖大道1800號 214122

部分非主料區(qū)煙葉存在香氣不足、雜氣較大、刺激性較大、余味欠舒適等缺點，工業(yè)可用性較低。研究表明通過改進(jìn)烘烤方式[1]、高壓處理[2]、噴施復(fù)烤添加劑[3]和生物制劑[4]、微生物強(qiáng)化發(fā)酵[5-10]等方法能提升煙葉品質(zhì)，提高煙葉工業(yè)可用性。微生物在煙葉上代謝能夠產(chǎn)生許多香味物質(zhì)，在煙草發(fā)酵過程中選擇適當(dāng)?shù)奈⑸锖瓦m宜的發(fā)酵條件，可明顯增加煙葉香氣，降低青雜氣，提高煙葉品質(zhì)[11-12]。已報道的用于煙草發(fā)酵的微生物主要有枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、環(huán)狀芽孢桿菌（B.circulans）[5]、巨大芽孢桿菌（B. megaterium）[6]、克雷伯氏菌（Klebsiella）[7]、白地霉（Galactomyces candidum）[8]、安 琪 酵 母[9]和 米 根 霉（Rhizopus oryzae）[10]等。

冬蟲夏草為我國著名的食藥兼用真菌，不僅含有豐富的營養(yǎng)成分，還含有一定的藥效物質(zhì)，具有獨特的鮮香氣味，是“非綠色的綠色食品”和天然藥物資源[13]。對冬蟲夏草的研究絕大多數(shù)停留在菌株篩選、發(fā)酵技術(shù)的開發(fā)、發(fā)酵產(chǎn)物評價與應(yīng)用上，尚無采用冬蟲夏草菌株菌絲體發(fā)酵非主料區(qū)煙葉，提升煙葉品質(zhì)的報道。我國菌種資源豐富，合理開發(fā)和利用我國天然菌種資源，將這些菌株用于發(fā)酵非主料區(qū)煙葉，提升非主料區(qū)煙葉的可用性，對提升非主料區(qū)煙葉有效使用率、優(yōu)化煙葉庫存等具有重要意義。

本研究采用前期篩選得到的對煙葉品質(zhì)具有顯著提升作用的冬蟲夏草菌株（Ophiocordyceps sinensis，syn Cordyceps sinensis）對非主料區(qū)宜賓煙葉進(jìn)行發(fā)酵，對發(fā)酵煙葉進(jìn)行感官質(zhì)量評價并測定其常規(guī)化學(xué)成分和揮發(fā)性成分，結(jié)合偏最小二乘法（Partial Least Squares，PLS）探討發(fā)酵對煙葉感官質(zhì)量與常規(guī)化學(xué)成分和揮發(fā)性成分的影響，揭示對感官品質(zhì)具有顯著貢獻(xiàn)的因子，并基于PLS分析結(jié)果采用主成分 分 析 法（Principal Component Analysis，PCA）進(jìn)一步揭示顯著貢獻(xiàn)因子對發(fā)酵煙葉和未發(fā)酵煙葉的貢獻(xiàn)程度，旨在為我國特有食藥兼用真菌發(fā)酵改善非主料區(qū)煙葉品質(zhì)提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

冬蟲夏草（Ophiocordyceps sinensis，syn Cordyceps sinensis）純菌菌株SCT-F1由四川中煙技術(shù)中心前期從四川藏區(qū)產(chǎn)冬蟲夏草子實體中分離得到。菌株分離、鑒定過程簡述如下：取冬蟲夏草子實體，用10% 84消毒液浸泡4～5 min后用無菌蒸餾水清洗干凈。將清洗干凈的冬蟲夏草子實體用無菌手術(shù)刀切取黃豆大小，置于含1%氯霉素的煙草提取物固體培養(yǎng)基上。將培養(yǎng)皿置于25℃～28℃、相對濕度75%恒溫恒濕箱培養(yǎng)5～7 d。待菌絲體長出后，在培養(yǎng)皿四周和中心位置，用無菌接種鏟截取黃豆大小帶瓊脂塊的菌絲體，置于含1%氯霉素的煙草提取物培養(yǎng)基中，置于搖床中25℃～28℃、150 rpm培養(yǎng)5～7 d。將培養(yǎng)物梯度稀釋后涂布于煙草提取物固體培養(yǎng)基上，得到單菌落。經(jīng)過形態(tài)學(xué)結(jié)合菌株18S rRNA基因測序，篩選出冬蟲夏草（Ophiocordyceps sinensis）純菌菌株，編號為SCT-F1。該菌株保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，其保藏編號為CGMCC No.22451。

1.1.2 煙葉樣品

非主料區(qū)煙葉樣品取自四川中煙工業(yè)有限責(zé)任公司煙葉醇化庫，煙葉產(chǎn)地為四川宜賓，年份為2013年，品種為K326，煙葉等級為中部橘黃三級（C3F）和上部橘黃二級（B2F）。

1.1.3 主要儀器設(shè)備

傅里葉變換近紅外光譜儀（MPA）：德國Bruker公司；三重四級桿氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（TSQ8000）：美國ThermoFisher Scientific公司；頂空固相微萃取儀、二乙基苯/碳分子篩/聚二甲基硅氧烷（DVB/CAR/PDMS）萃取纖維：美國Supelco公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株培養(yǎng)

培養(yǎng)基：麩皮10.0 g/L，玉米粉10.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L，MgSO4·7H2O 1.0 g/L，KH2PO42.0 g/L。

菌株活化：取-80℃保藏的冬蟲夏草菌株接種于培養(yǎng)基中，活化2代，待用。

1.2.2 發(fā)酵煙葉及樣品制備

活化后的冬蟲夏草菌株培養(yǎng)液按照10%的比例，噴灑于10 kg煙葉表面，邊噴灑邊混勻煙葉，將混勻后的煙葉裝入無色聚乙烯吹塑薄膜塑料袋內(nèi)放入瓦楞紙箱，置于溫度為26℃±2℃、濕度為75%±2%的煙葉醇化庫中培養(yǎng)，發(fā)酵時垛內(nèi)溫度為26℃±1℃。采用五點法取樣，從箱四角和中心分別取樣100 g，共取樣500 g，將樣品混合均勻，用無菌袋擠出空氣后密封，放置于-20℃低溫保存?zhèn)溆?，于培養(yǎng)第0 d、5 d、10 d和15 d取樣，以添加10%蒸餾水的煙葉為對照。對照組、未發(fā)酵組（發(fā)酵0 d）、發(fā)酵5 d、發(fā)酵10 d、發(fā)酵15 d宜賓C3F煙葉樣品，分別標(biāo)記 為C3F-C、C3F-0D、C3F-5D、C3F-10D和C3F-15D；對照組、未發(fā)酵組（發(fā)酵0 d）、發(fā)酵5 d、發(fā)酵10 d和發(fā)酵15 d宜賓B2F煙葉樣品，分別標(biāo)記為B2F-C、B2F-0D、B2F-5D、B2F-10D和B2F-15D。

1.2.3 發(fā)酵煙葉感官評價

將平衡后的發(fā)酵煙葉切絲制成卷煙，由9位全國評煙委員會專家進(jìn)行感官質(zhì)量評價。參照《YC/T 138-1998煙草及煙草制品·感官評價方法》[14]和《QJ/02.J.001—2016.A 四川中煙產(chǎn)品技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)·單料煙感官評價標(biāo)準(zhǔn)》[15]，將最大標(biāo)度設(shè)為9，對煙支勁頭、濃度、香氣質(zhì)、香氣量、余味、甜感、雜氣和刺激性進(jìn)行賦分評價。

1.2.4 發(fā)酵煙葉化學(xué)成分分析

采用傅里葉變換近紅外光譜儀，測定發(fā)酵煙葉樣品常規(guī)化學(xué)成分。取80.0 g煙末樣品，裝入石英旋轉(zhuǎn)樣品杯中，放入壓樣器加壓20 s，利用積分球漫反射采樣系統(tǒng)采集其NIR。光譜采集條件為：波數(shù)范圍12000～4000 cm-1，掃描次數(shù)64次，掃描速度10 kHz，分辨率8 cm-1。每個樣品重復(fù)裝樣、掃描3次。采用OPUS QUANT 2.0定量分析軟件處理采集到的光譜數(shù)據(jù)，并根據(jù)四川中煙前期建立的烤煙煙葉通用常規(guī)化學(xué)成分測定模型進(jìn)行數(shù)據(jù)擬合。

1.2.5 發(fā)酵煙葉揮發(fā)性成分分析

采用頂空固相微萃取結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用（SPME-GC/MS）測定發(fā)酵煙葉揮發(fā)性成分。稱取1.0 g煙葉置于20 mL玻璃氣相樣品瓶中，在60℃下萃取30 min，260℃解吸1 min沖入GC色譜柱，以丙酸苯乙酯為內(nèi)標(biāo)，采用面積歸一化法定量。氣相色譜條件：色譜柱為DB/WAX，載氣為氦氣，流速1.2 mL·min-1；程序升溫條件為50℃維持2 min，3℃·min-1升溫至180℃，15℃·min-1升溫至230℃，維持8 min。質(zhì)譜條件：接口溫度為230℃，離子源溫度為260℃，四級桿溫度為150℃，電離電勢為70 eV，離子化模式為EI+，質(zhì)量掃描范圍（m/z）為33～350 amu。檢測獲得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)與NIST數(shù)據(jù)庫（Agilent Technologies Inc.）進(jìn)行比對。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

所有試驗數(shù)據(jù)至少有3組平行，數(shù)據(jù)分析采用SPSS（version 19，IBM）中Duncan多重比較進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA）（P＜0.05），利用SIMCA-P（version 13.0，UMETRICS）軟件中偏最小二乘法（Partial Least Squares，PLS）對發(fā)酵煙葉常規(guī)化學(xué)成分、揮發(fā)性成分與感官質(zhì)量總分之間相關(guān)性進(jìn)行分析，基于PLS分析結(jié)果采用Canoco for Windows（version 4.5，Wageningen UR）主成分分析（Principal Component Analysis，PCA）解析顯著貢獻(xiàn)變量對發(fā)酵煙葉和未發(fā)酵煙葉的貢獻(xiàn)情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵煙葉感官評價

發(fā)酵煙葉感官評價結(jié)果，見表1。由表1可知，添加冬蟲夏草培養(yǎng)液后煙葉的感官評價總分顯著高于對照組（P＜0.05），感官評價總分隨發(fā)酵時間呈先升高后降低的趨勢，發(fā)酵后煙葉的香氣質(zhì)、香氣量和甜感顯著增加（P＜0.05），雜氣和刺激性降低，余味改善。在發(fā)酵第10 d時，C3F組與B2F組煙葉感官評價得分均為對應(yīng)組內(nèi)最高，發(fā)酵第5 d時感官質(zhì)量顯著低于發(fā)酵10 d和15 d。具體來說，C3F-10D煙氣濃度增加醇和、細(xì)膩，潤甜感明顯增加，舌面殘留降低。B2F組樣品，發(fā)酵后煙氣變?nèi)岷?；B2F-10D表現(xiàn)為煙氣清晰、細(xì)膩，雜氣和刺激性降低，潤甜感明顯。

表1 發(fā)酵煙葉感官評價結(jié)果Tab. 1 Sensory evaluation results of fermented tobacco leaves

2.2 發(fā)酵煙葉常規(guī)化學(xué)成分分析

不同發(fā)酵時間煙葉樣品常規(guī)化學(xué)成分測定結(jié)果，見表2。由表2可知，發(fā)酵C3F組煙葉與對照組和未發(fā)酵組相比總植物堿、還原糖、總氮和總糖含量顯著降低（P＜0.05），對應(yīng)地，總氮/總植物堿、總糖/總植物堿及兩糖差顯著增加。發(fā)酵后的B2F組煙葉與對照組和未發(fā)酵組相比總植物堿和總氮含量顯著降低（P＜0.05），對應(yīng)地，總氮/總植物堿、總糖/總植物堿及兩糖差顯著增加。

2.3 發(fā)酵煙葉揮發(fā)性成分分析

利用SPME-GC/MS測定發(fā)酵煙葉揮發(fā)性成分，共檢測出340余種物質(zhì)。將GC-MS所得譜圖在標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫NIST中進(jìn)行比對，分析各峰對應(yīng)的匹配物，結(jié)合正向檢索結(jié)果相似指數(shù)（SI）和反向檢索結(jié)果的相似指數(shù)（RSI）對化合物進(jìn)行鑒定，鑒定出83種主要揮發(fā)性物質(zhì)，發(fā)酵后的C3F煙葉和B2F煙葉中分別有26種和24種物質(zhì)含量顯著增加（P＜0.05），分別有10種和7種物質(zhì)含量顯著降低（P＜0.05），有14種物質(zhì)僅在發(fā)酵煙葉中檢出。發(fā)酵煙葉主要揮發(fā)性物質(zhì)、質(zhì)體色素降解物總量、美拉德反應(yīng)產(chǎn)物總量、芳香族氨基酸降解物總量、西柏烷類降解物總量和煙堿降解物總量統(tǒng)計情況，見表3。

續(xù)表3

由表3可知，所有煙葉樣品中含量最高的揮發(fā)性化合物為煙堿，其次為新植二烯和茄酮，含量范圍分別為29.06%～51.87%、14.42%～18.08%和2.67%～9.81%，發(fā)酵后的煙葉煙堿含量顯著降低，新植二烯和茄酮含量顯著增加。

所有發(fā)酵煙葉中質(zhì)體色素降解物總量和西柏烷類降解物總量顯著高于對照組和未發(fā)酵組，具體來說大馬士酮、新植二烯和茄酮在所有發(fā)酵煙葉中含量高于對照組和未發(fā)酵組；二氫獼猴桃內(nèi)酯含量在C3F發(fā)酵煙葉中含量顯著低于對照組。美拉德反應(yīng)產(chǎn)物總量在發(fā)酵煙葉中隨發(fā)酵時間延長呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在C3F煙葉中第10 d含量最高，在B2F中第5 d含量最高，發(fā)酵后的煙葉中包括2-糠醛、2-乙酰基吡咯和5-羥甲基糠醛等在內(nèi)的7種美拉德反應(yīng)產(chǎn)物含量增加。發(fā)酵煙葉中正己醛、乙酸、2,3-丁二醇等3種物質(zhì)含量降低。發(fā)酵煙葉中芳香族氨基酸降解物中苯甲醛含量增加，苯甲醇降低，2-苯乙醇則呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。同時，發(fā)酵煙葉中3-乙酰基吡啶和2,3'-聯(lián)吡啶等煙堿降解物含量有所增加。

2.4 發(fā)酵煙葉常規(guī)化學(xué)成分、揮發(fā)性成分與感官質(zhì)量相關(guān)性分析

采用SIMCA-P軟件以常規(guī)化學(xué)成分和主要揮發(fā)性成分為X變量，以感官評價總分結(jié)果為Y變量進(jìn)行PLS分析，提取2個主成分，模型對X變量的可解釋性R2X為93.8%，對Y變量的可解釋性R2Y為99.2%，預(yù)測值Q2為98.6%，結(jié)合這些指標(biāo)可知PLS模型適用于本研究。

發(fā)酵煙葉樣品PLS三維得分圖，見圖1。由圖1可知，C3F組樣品均落在三維圖右邊，B2F組樣品均落在三維得分圖左邊，對照組（B2F-C和C3F-C）和未發(fā)酵組（B2F-0D和C3F-0D）落在三維得分圖上部，發(fā)酵組樣品（B2F-5D、B2F-10D、B2F-15D和C3F-5D、C3F-10D、C3F-15D）落在三維得分圖下部。

圖1 發(fā)酵煙葉樣品PLS三維得分圖Fig.1 Three-dimensional score plot of PLS

考察各變量對感官評價總分的貢獻(xiàn)情況，在PLS中記為VIP值，其中VIP值大于1說明變量為“重要”變量，小于0.5則說明其為“非重要”變量。本研究PLS擬合模型中“重要”變量的VIP值及相關(guān)系數(shù)見表4。

表4 變量VIP值和變量與感官評價總分相關(guān)系數(shù)*Tab. 4 VIP values and correlation coefficients between variables and total score of sensory evaluation*

由表4可知總植物堿、還原糖、總氮、總糖、總氮/總植物堿、總糖/總植物堿、兩糖差、大馬士酮、新植二烯、巨豆三烯酮、二氫獼猴桃內(nèi)酯、2-糠醛、香茶酮、2-乙?；量⒈郊状?、2-苯乙醇、茄酮、二烯煙堿、2,3'-聯(lián)吡啶、煙堿為對煙葉感官評價總分具有顯著正效應(yīng)的重要貢獻(xiàn)變量。

基于顯著正效應(yīng)重要貢獻(xiàn)變量，采用Canoco for Windows進(jìn)一步分析顯著正效應(yīng)重要貢獻(xiàn)變量對發(fā)酵組、對照組和未發(fā)酵組的貢獻(xiàn)程度。根據(jù)PCA分析結(jié)果，主成分PC1和PC2累計貢獻(xiàn)率達(dá)到97.0%（圖2）?？偟⒖傊参飰A、煙堿、二烯煙堿、苯甲醇、二氫獼猴桃內(nèi)酯、還原糖和總糖與對照組和未發(fā)酵組呈正相關(guān)，總氮/總植物堿、總糖/總植物堿、兩糖差、大馬士酮、新植二烯、巨豆三烯酮、2-糠醛、香茶酮、2-乙?；量?-苯乙醇、茄酮、2,3'-聯(lián)吡啶與發(fā)酵煙葉組呈正相關(guān)。

圖2 基于不同發(fā)酵時間煙葉樣品PCA分析Fig.2 The PCA of fermented tobacco leaves with different fermentation time

3 討論

以2013年宜賓C3F和B2F煙葉為研究對象，冬蟲夏草菌株發(fā)酵后的宜賓煙葉，感官質(zhì)量明顯提升，煙葉感官質(zhì)量隨發(fā)酵時間延長呈先升高后降低的趨勢。煙葉感官質(zhì)量在第10 d時表現(xiàn)為最佳，主要表現(xiàn)在香氣質(zhì)和香氣量提升，余味、雜氣和刺激性改善。發(fā)酵后的煙葉總植物堿和總氮含量降低。還原糖和總糖含量在煙葉發(fā)酵的不同時間呈現(xiàn)波動，主要原因可能為：菌株生長消耗還原糖、還原糖與氨基酸發(fā)生美拉德反應(yīng)（C3F煙葉中，發(fā)酵樣品中還原糖含量較未發(fā)酵樣品顯著低，而美拉德反應(yīng)產(chǎn)物總量則表現(xiàn)為相反的趨勢）、大分子物質(zhì)酶解或水解[16]。

已報道的具有降解煙堿能力的細(xì)菌包括節(jié)桿菌屬（Arthrobacter）、假單胞菌屬（Pseudomonas）、無色桿菌屬（Achromobacter）、農(nóng)桿菌屬（Agrobacterium）、劍菌屬（Ensifer）、蒼白桿菌屬（Ochrobactrum）、紅球菌屬（Rhodococcus）、申氏桿菌屬（Shinella）、費氏中華根瘤菌屬（Sinorhizobium）、假黃單胞菌屬（Pseudoxanthomonas）、鞘氨醇單胞菌屬（Sphingomonas）和摩根氏菌屬（Morganella），主要真菌包括薄膜革菌屬（Pellicularia）、小孢子癬菌屬（Microsporum）、小克銀漢霉屬（Cunninghamella）和曲霉屬（Aspergillus）等[17-20]。經(jīng)過冬蟲夏草菌屬（O. sinensis）菌株發(fā)酵后的宜賓煙葉煙堿、總植物堿和總氮等化學(xué)成分含量降低，3-乙?；拎ず?,3'-聯(lián)吡啶等在內(nèi)的煙堿降解物含量增加，造成這種現(xiàn)象的原因推測為冬蟲夏草菌株代謝過程中的一些中間產(chǎn)物參與到含氮物質(zhì)的轉(zhuǎn)化過程中或菌株在代謝過程中利用含氮物質(zhì)。

煙葉中各種化學(xué)物質(zhì)的協(xié)調(diào)和平衡，決定了煙葉的感官質(zhì)量。有研究表明質(zhì)體色素降解物和西柏烷類降解物的積累，有助于提升煙葉內(nèi)在品質(zhì)[21]，其中具有刺激性氣味的1-戊烯-3-酮和能夠消除刺激性的二氫獼猴桃內(nèi)酯[24]含量降低，大馬士酮（增加煙氣濃度、似白肋煙味[22]）、新植二烯（弱令人愉快的氣味、增進(jìn)煙葉吃味和香氣[22]）和茄酮（類似新鮮胡蘿卜香味、增加煙草香、煙氣豐富醇和細(xì)膩[23]）含量增加。美拉德反應(yīng)是煙草特征香味形成的重要反應(yīng)之一，發(fā)酵后的煙葉中共有包括丁二酮（黃油、奶香味[25]）、2-糠醛（奶油、焦糖香味[23]）、香茶酮（濃郁茶葉香氣、增加煙草本香和清香風(fēng)味[23]）、3-甲基-1,2-環(huán)戊二酮（甜的、楓味[22]）、2-乙?；量ɑㄏ恪⑶逑?、酒香[24]）、2,3-二氫-3,5-二羥基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮（濃郁焦糖風(fēng)味[26]）和5-羥甲基糠醛（甜、花香、增加煙氣濃度[22]）等在內(nèi)的7種美拉德反應(yīng)產(chǎn)物含量增加。乙酸（刺激性氣味[23]）、己醛（調(diào)料、青蘋果香[24]）和2,3-丁二醇（清香、花香[17]）等3種物質(zhì)含量降低。發(fā)酵煙葉中芳香族氨基酸降解物中苯甲醛（杏仁香、櫻桃香、甜香[24]）含量增加，苯甲醇（弱花香、平和[22]）降低，2-苯乙醇（玫瑰花香[22]）則隨發(fā)酵時間延長呈先升高后降低的趨勢。同時，經(jīng)過冬蟲夏草菌株發(fā)酵后的煙葉生成了生物活性物質(zhì)，如人參炔醇具有抗癌、抑菌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降壓、抗炎和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用[27]，2,3-二氫-3,5-二羥基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮具有抗腫瘤活性[28]。

煙葉中化學(xué)成分與感官質(zhì)量具有相關(guān)性[29-30]，本研究采用SIMCA-P中PLS結(jié)合Canoco for Windows中PCA揭示對發(fā)酵煙葉和未發(fā)酵煙葉感官質(zhì)量具有顯著正效應(yīng)的常規(guī)化學(xué)成分和揮發(fā)性成分。結(jié)果表明雖然總糖和還原糖等糖類物質(zhì)（衡量煙葉內(nèi)在品質(zhì)和香吃味品質(zhì)的重要指標(biāo)[31]）和煙堿（保持煙葉吃味和勁頭[24]）、總植物堿（與勁頭呈正相關(guān)[29]）和總氮類物質(zhì)對未發(fā)酵煙葉感官品質(zhì)具有顯著貢獻(xiàn)，同時苯甲醇、二氫獼猴桃內(nèi)酯也對其具有顯著貢獻(xiàn)，總糖/總植物堿、總氮/總植物堿、兩糖差以及7種呈香物質(zhì)茄酮、2-糠醛、香茶酮、大馬士酮、2-苯乙醇、巨豆三烯酮、新植二烯對發(fā)酵煙葉感官質(zhì)量具有顯著貢獻(xiàn)。

本研究以宜賓C3F和B2F煙葉為研究對象，采用冬蟲夏草菌株發(fā)酵煙葉并分析了煙葉感官質(zhì)量提升與煙葉常規(guī)化學(xué)物質(zhì)和揮發(fā)性成分的相關(guān)性，由于不同產(chǎn)區(qū)、不同等級煙葉內(nèi)在品質(zhì)存在不同程度的差異，因此，采用冬蟲夏草菌株發(fā)酵后，是否能顯著提升煙葉品質(zhì)、化學(xué)成分與感官質(zhì)量質(zhì)相關(guān)性是否有類似規(guī)律，還有待進(jìn)一步研究。同時，冬蟲夏草發(fā)酵菌株發(fā)酵煙葉改善煙葉品質(zhì)的機(jī)理仍不清晰，后期將對菌株發(fā)酵煙葉降低煙堿及提質(zhì)增香機(jī)理作深入研究。

4 結(jié)論

冬蟲夏草菌株發(fā)酵后的宜賓煙葉，感官質(zhì)量明顯提升，煙葉感官質(zhì)量隨發(fā)酵時間延長呈先升高后降低的趨勢，發(fā)酵第10 d時煙葉感官質(zhì)量最佳。冬蟲夏草菌株發(fā)酵后的宜賓煙葉中總植物堿、還原糖和總氮含量與對照組和未發(fā)酵組樣品相比顯著降低，發(fā)酵煙葉中質(zhì)體色素降解物總量、西柏烷類降解物總量顯著高于未發(fā)酵煙葉，美拉德反應(yīng)產(chǎn)物總量在發(fā)酵煙葉中隨發(fā)酵時間延長呈先升高后降低的趨勢。發(fā)酵煙葉在保持煙葉風(fēng)格特征不變的同時，刺激性和余味得到改善，煙葉香氣質(zhì)和香氣量提升，達(dá)到柔和、細(xì)膩、醇和煙氣的效果，提升了宜賓煙葉的質(zhì)量，將進(jìn)一步提高其在卷煙配方中的應(yīng)用潛力。