劉平賢，張浩，李偉漢，宋春峰

（河南省南陽(yáng)市中心醫(yī)院乳腺分泌腺外科，河南 南陽(yáng) 473009）

乳腺癌（Breast cancer,BC）是人類最早知曉具有高度異質(zhì)性的癌癥之一，從臨床病理學(xué)、臨床生物學(xué)、治療反應(yīng)等均存在很大程度不同，BC的異質(zhì)性究其根本在于分子水平上存在的多樣性和異質(zhì)性[1]。目前，BC的病死率隨著現(xiàn)代診療技術(shù)不斷進(jìn)步下有所下降，患者總生存時(shí)間有所延長(zhǎng)，但BC的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)仍較大[2]。臨床上治療BC 以手術(shù)、手術(shù)+術(shù)前新輔助化療或術(shù)后化療、放療為主，大部分患者對(duì)化療敏感度較高，但也有部分患者對(duì)化療的敏感度不高，化療效果受到限制，且當(dāng)下尚無(wú)評(píng)價(jià)化療敏感性、預(yù)測(cè)化療效果的有效指標(biāo)[3]。Ki-67 為核增殖的標(biāo)志物，反映腫瘤細(xì)胞增殖活性[4]。Her-2 屬于跨膜糖蛋白原癌基因，與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化有關(guān)。周曉芳等[5]研究發(fā)現(xiàn)Ki-67表達(dá)與ER、PR 呈負(fù)相關(guān),與Her-2 正相關(guān),上述指標(biāo)變化對(duì)BC 有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。與其他腫瘤相比，BC在分子生物學(xué)、病理組織學(xué)方面異質(zhì)性較強(qiáng)，Ki-67、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2（Her-2）不僅對(duì)BC 治療有指導(dǎo)作用，而且可作為患者預(yù)測(cè)療效及預(yù)后判斷[5-7]。最近發(fā)現(xiàn)POK 紅髓生成因子（Pokemon）直接抑制關(guān)鍵糖酵解基因的表達(dá)，其缺失可誘導(dǎo)糖酵解，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，酪氨酸激酶2（TYK2）參與人類癌癥的腫瘤免疫監(jiān)視，可通過(guò)激活MCL1表達(dá)促進(jìn)間變性大細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，腫瘤蛋白P53（P53）是由抑癌基因表達(dá)生成，具有抑制腫瘤細(xì)胞惡性增殖、促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[8,9]。但目前關(guān)于POK、TYK2與病理參數(shù)及P53的相關(guān)性研究尚少。基于此，本研究主要分析POK、TYK2、P53在BC患者癌組織中的表達(dá)，以及POK、TYK2與ER、PR 等病理特征指標(biāo)及P53的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2019年1 月-2020年12月收治的BC患者78例?；颊吣挲g平均（45.89±3.47）歲；其中絕經(jīng)前45例，絕經(jīng)后33例。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照ASCO的《乳腺癌臨床實(shí)踐指南》。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)影像學(xué)檢查、穿刺活檢病理確診為乳腺癌；⑵年齡18～70 歲，均為女性；⑶術(shù)前均未遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，術(shù)前接受新輔助化療；⑷預(yù)期生存時(shí)間超過(guò)半年；⑸均配合完成相關(guān)檢查，資料完整；⑹受試者知情，自愿簽署知情同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴伴有自身免疫性疾病、血液功能障礙者；⑵伴有其他類型惡性腫瘤者；⑶不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；⑷妊娠期或哺乳期婦女；⑸相關(guān)資料不全者。

1.2 研究方法 收集并整理78例BC患者臨床病理資料，包括年齡（＜50 歲與≥50 歲）、月經(jīng)情況（絕經(jīng)前與絕經(jīng)后）、腫瘤直徑（≤2cm與＞2cm）、ER狀態(tài)（陽(yáng)性與陰性）、PR 狀態(tài)（陽(yáng)性與陰性）、HER-2 狀態(tài)（陽(yáng)性與陰性）、Ki-67表達(dá)（≥14%與＜14%）、三陰性乳腺癌（是與否）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（是與否）等。

1.3 觀察指標(biāo) 采用免疫組化法進(jìn)行Pokemon、TYK2、P53 測(cè)定。石蠟切片進(jìn)行脫蠟、復(fù)水，用內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷液室溫孵育20min,之后PBS 清洗3 次；加入0.01mol 枸椽酸緩沖液（PH=6.0）進(jìn)行抗原修復(fù)，之后加入一抗Cox1（ARG23725，Arigo Biologicals）和Cox4（GB11250，Servicebio），4℃過(guò)夜，PBS 清洗3 次；滴加生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育30min，PBS 清洗3 次；滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS 清洗3次；DAB 進(jìn)行加強(qiáng)，之后流水沖洗終止；脫水，中性樹(shù)脂封片。顯微鏡（DM3000，Leica）觀察陽(yáng)性細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將所采集數(shù)據(jù)輸入2013Excel表建立證候量表數(shù)據(jù)庫(kù)。將所有資料導(dǎo)入計(jì)算機(jī)，采用SPSS20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)表和百分率表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，行t 檢驗(yàn)；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織Pokemon、TYK2、P53表達(dá)情況 免疫組化結(jié)果顯示，乳腺癌組織內(nèi)Pokemon、TYK2、P53 均呈棕黃色顆粒分布，Pokemon 陽(yáng)性表達(dá)率為87.18%（68/78），TYK2 陽(yáng)性表 達(dá)率為79.49%（62/78），P53 陽(yáng)性表 達(dá)率為71.79%（56/78），均明顯高于癌旁正常組織，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 乳腺癌組織Pokemon、TYK2、P53表達(dá)[n（%）]

2.2 乳腺癌組織Pokemon、TYK2與P53 相關(guān)性情況 BC患者癌組織Pokemon、TYK2與P53水平呈正相關(guān)關(guān)系，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=0.328，P=0.003；r=0.239，P=0.035）。見(jiàn)表2。

表2 乳腺癌組織Pokemon、TYK2與P53 相關(guān)性

2.3 不同臨床病理參數(shù)患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達(dá)情況 不同年齡、月經(jīng)情況及腫瘤大小患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達(dá)比較差異不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同ER狀態(tài)、PR 狀態(tài)、HER-2 狀態(tài)、Ki-67表達(dá)、三陰性乳腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達(dá)比較差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 不同臨床病理參數(shù)患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達(dá)[n（%）]

3 討論

乳腺癌是全球第二常見(jiàn)的癌癥，每年約有170萬(wàn)新病例，它占所有女性侵襲性腫瘤的20%以上，占女性所有癌癥的16%[10]。臨床乳腺癌的分子分型與患者預(yù)后和治療密切相關(guān)，根據(jù)雌激素受體ER、孕激素受體PR及人表皮生長(zhǎng)因子受體HER2表達(dá)情況，可將乳腺癌分為4 個(gè)分子亞型:即Luminal、HER2 陽(yáng)性、基底樣（basal-like breast carcinoma,BLBC）和正常乳腺樣3。前三種亞型分別與根據(jù)免疫組化特點(diǎn)所分的ER 陽(yáng)性和/或PR 陽(yáng)性、HER2 陽(yáng)性和三陰性乳腺癌均陰性,Triple negative breast cancer,TNBC）相對(duì)應(yīng)，具有相似的臨床經(jīng)過(guò)和預(yù)后，當(dāng)然近年來(lái)有研究指出它們?cè)谠u(píng)估新輔助化療方面還是存在一定的優(yōu)劣差異。盡管臨床在診斷方法和治療技術(shù)方面取得了巨大進(jìn)展，但患者的長(zhǎng)期生存率仍然不令人滿意，對(duì)BC患者進(jìn)行更準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、優(yōu)化治療及探究BC 預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。

Pokemon，也稱為FBI、ZBTB7A、LRF和OCZF，是轉(zhuǎn)錄因子POZ/BTB和POK 家族的成員之一POK 轉(zhuǎn)錄因子是重要的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[11]。Pokemon 可通過(guò)抑制腫瘤ARF的轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮原癌蛋白的功能，Pokemon在未成熟的小鼠T和B 淋巴譜系中的表達(dá)導(dǎo)致侵襲性淋巴瘤[12]。Pokemon 還可以通過(guò)激活SRY 盒9 依賴的致癌途徑，促進(jìn)PTEN 凋亡，并促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖、存活和侵襲[13]。TYK2是JAK（just another kinase 或janus kinase）是非受體酪氨 酸激酶 家族成 員 (JAK1、JAK2、JAK3和TYK2)之一,其結(jié)構(gòu)不含SH2、SH3,C段具有兩個(gè)相連的激酶區(qū)，JAKs 從N 端到C 端共有四個(gè)功能域，分別是FERM 同源域、非典型Src-同源性2 結(jié)構(gòu)域、負(fù)調(diào)節(jié)激酶活性的激酶樣或假激酶同源性2結(jié)構(gòu)域和酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域。主要通過(guò)JAK-STAT信號(hào)途徑,激活STAT (STAT1-4、STAT5A、STA T5B、STAT6),促進(jìn)細(xì)胞因子與受體結(jié)合,使STAT 二聚體化,與JAK 相互靠近、磷酸化,使受體上的酪氨酸殘基磷酸化,STAT與受體分離,轉(zhuǎn)位到核內(nèi),結(jié)合到DNA 序列,從而調(diào)控基因表達(dá),促進(jìn)腫瘤增值[14]。

本研究結(jié)果顯示，Pokemon在乳腺癌組織中呈陽(yáng)性高表達(dá)（87.18%），TYK2在乳腺癌組織中呈陽(yáng)性高表達(dá)（79.49%），P53在乳腺癌組織中呈陽(yáng)性高表達(dá)（71.79%），提示Pokemon、TYK2 可作為BC 潛在的腫瘤標(biāo)志物，P53 參與了BC的發(fā)病及發(fā)展，且Spearman 相關(guān)分析顯示，Pokemon、TYK2和P53在BC 總體樣本中的表達(dá)具有正相關(guān)性，可以推測(cè)Pokemon、TYK2 可能是上游關(guān)鍵基因，對(duì)P53 具有正向調(diào)節(jié)作用。這與周蕾[15]等人研究結(jié)果相符合。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，Pokemon、TYK2 陽(yáng)性表達(dá)與ER 狀態(tài)、PR 狀態(tài)、HER-2 狀態(tài)、Ki-67表達(dá)、三陰性乳腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，提示Pokemon、TYK2 能夠作為預(yù)測(cè)BC 轉(zhuǎn)移及預(yù)后的生物標(biāo)志物。這與孫釋然[16]等人研究結(jié)果相符合。

綜上所述，BC患者的Pokemon、TYK2、P53 異常表達(dá)率較高，且Pokemon、TYK2和P53 呈正相關(guān)，Pokemon、TYK2、P53表達(dá)與ER陰性、PR 陰性、Ki-67 高表達(dá)、Her-2 陽(yáng)性正相關(guān)。檢測(cè)BC患者中的Pokemon、TYK2、P53表達(dá)水平對(duì)預(yù)測(cè)及預(yù)后具有一定臨床指導(dǎo)價(jià)值。