金俊超 徐曉戰(zhàn) 劉偉迪

乳腺癌是最常見的1種女性惡性腫瘤，據(jù)報道，2010年乳腺癌在我國的發(fā)病率居于首位，病死率居于第四位[1]。以手術(shù)為主的綜合治療是乳腺癌目前治療最有效的手段，其在改善患者預(yù)后，提高其生存期和生存質(zhì)量方面發(fā)揮著重要作用，但總體來說，患者的預(yù)后仍不理想，乳腺癌術(shù)后的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是導(dǎo)致患者死亡最主要的原因，因此尋求簡單、方便、有效的預(yù)后評價手段和指標對于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤和盡早進行個體化的干預(yù)來改善患者預(yù)后有重要意義[2]。三葉因子1(TFF1)屬于三葉因子(TFF)家族，是1種主要由胃體和胃竇中胃腸道黏液細胞分泌產(chǎn)生的對胃腸道黏膜有重要修復(fù)和保護作用的小分子蛋白，近年來的一些研究發(fā)現(xiàn)，TFF1與包括胃癌、肺癌、乳腺癌等在內(nèi)的腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[3]。人類泛素偶聯(lián)酶E2C(UBE2C)是細胞周期蛋白在泛素化途徑中降解必不可少的蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，UBE2C在腫瘤組織中的表達水平顯著升高，與腫瘤發(fā)生、增殖、惡變有關(guān)，可能是某些腫瘤潛在的診斷、治療和預(yù)后評價的新靶標[4]。金屬硫蛋白1E(MT1E)屬于金屬硫蛋白(MT)家族，具有特定的金屬結(jié)合能力，研究發(fā)現(xiàn)，MT1E具有促進乳腺上皮細胞膜表面金屬蛋白酶磷酸化和巰基化的作用，進而可提高乳腺癌細胞的侵襲力，還會引起癌細胞其他方面的生物學(xué)特征變化[5]。本研究通過檢測和比較乳腺癌、乳腺良性病變和健康對照女性血清TFF1、UBE2C、MT1E水平，分析血清TFF1、UBE2C、MT1E水平與乳腺癌患者病理特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在明確其在乳腺癌患者預(yù)后評估中的價值，現(xiàn)將具體結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 資料

取2017年12月至2019年12月在我院接受乳腺手術(shù)的132例患者，均經(jīng)手術(shù)病理切片診斷，將其根據(jù)疾病診斷分為乳腺癌組(n=78)和乳腺良性病變組(n=54)，另選取同期在我院體檢中心體檢的60名年齡相匹配的健康女性作為健康對照組。乳腺癌組患者均行常規(guī)臨床體檢和腹部B超或腹部、胸部、頭顱CT或全身放射性計算機斷層掃描(ECT)檢查等，排除存在其他惡性腫瘤者、入組前接受病灶切除或局部放療者和遠隔部轉(zhuǎn)移者。乳腺良性病變組診斷主要為乳腺囊性增生癥和(或)乳腺纖維腺瘤，其心、肺、肝、腎等重要器官均無功能障礙，既往或現(xiàn)在無惡性腫瘤。健康對照組女性均無乳腺、心血管、肝臟、腎臟等疾病。乳腺癌組年齡28～72歲，平均(44.10±10.95)歲；體重43～62 kg，平均(52.13±4.02)kg。乳腺良性病變組患者年齡26～70歲，平均(45.57±13.26)歲；體重42～60 kg，平均(50.97±5.15)kg。健康對照組年齡26～68歲，平均(44.39±12.51)歲；體重42～62 kg，平均(52.05±4.96)kg。3組研究對象年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有入組研究對象均自愿參與本研究，簽署知情同意書，本研究通過醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.2 方法

1.2.1 血清TFF1、UBE2C、MT1E水平檢測 收集所有患者術(shù)前和對照組的清晨空腹靜脈血3 ml，4 ℃下3000 r/min離心10 min，取上層血清置于-20 ℃冰箱中保存待測。血清TFF1、UBE2C、MT1E水平檢測均應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法進行，TFF1試劑盒購買自上海超研生物科技有限公司，UBE2C試劑盒購買自上海常今生物科技有限公司，MT1E試劑盒購買自南京伯斯金生物公司，儀器為英國Lndinite M200系列酶聯(lián)免疫檢測儀。所有檢測均嚴格按照試劑盒說明書進行操作。血清TTF1臨界值為1.09 ng/ml、血清UBE2C0.53 ng/ml、血清MT1E為0.85 ng/ml。

1.2.2 隨訪 對乳腺癌組所有患者進行術(shù)后情況的隨訪，隨訪開始時間為第1次手術(shù)的日期，隨訪截止時間為2020年1月1日，隨訪結(jié)局變量為患者死亡，隨訪形式為門診定期復(fù)查結(jié)合電話，時間范圍為6～24個月，中位隨訪期為14.7個月。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 3組研究對象血清TFF1、UBE2C、MT1E水平比較

乳腺癌組血清TFF1、UBE2C、MT1E水平明顯高于乳腺良性病變組和健康對照組(P<0.05)，乳腺良性病變組和健康對照組的血清TFF1、UBE2C、MT1E水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1 3組研究對象血清TFF1、UBE2C、MT1E水平比較

2.2 乳腺癌組患者血清TFF1、UBE2C、MT1E水平與臨床病理特征的關(guān)系

112例乳腺癌患者血清TFF1高水平68例(87.18%)，血清UBE2C高水平60例(76.92%)，血清MT1E高水平53例(67.95%)。血清TFF1、UBE2C、MT1E水平與乳腺癌患者腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)(P<0.05)，與患者年齡、腫瘤大小、病理分級、絕經(jīng)狀態(tài)、孕激素受體(ER)、雌激素受體(ER)表達狀態(tài)等無關(guān)(P>0.05)(表2)。

表2 血清TFF1、UBE2C、MT1E水平與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 乳腺癌患者術(shù)前血清TFF1、UBE2C、MT1E水平與預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Merier生存分析顯示：血清高TFF1水平者2年總生存率為69.12%，血清TFF1低水平者2年總生存率為100.00%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.226,P=0.040)；血清高UBE2C水平者2年總生存率為70.00%，低水平者為94.44%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.490，P=0.034)；血清高MT1E水平者的2年生存率為66.04%，低水平者為92.00%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.005,P=0.014)。多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型分析顯示，血清高TFF1、UBE2C、MT1E均是乳腺癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05)(表3)。

表3 乳腺癌患者預(yù)后影響因素的多因素Cox回歸分析

3 討論

自上世紀80年代開始，我國女性乳腺癌的發(fā)病率一直呈現(xiàn)出不斷升高的趨勢，而且患者的發(fā)病年輕也越來越年輕化，乳腺癌已經(jīng)成為影響女性身心健康最重要的1種惡性腫瘤。乳腺癌的早期診斷和在預(yù)后評價基礎(chǔ)上的以手術(shù)為主的綜合治療是提高患者生存率的關(guān)鍵，因此乳腺癌診斷和預(yù)后指標的尋找一直以來都是1個備受關(guān)注的熱點課題[6]。隨著新的檢測方法和與診斷、預(yù)后有關(guān)的腫瘤標志物的不斷出現(xiàn)，臨床學(xué)家對乳腺癌的病程進展和生物學(xué)行為改變的估計越來越充分，這對于指導(dǎo)臨床合理治療有重要意義。

TFF1屬于TFF家族，是1個主要由消化道黏膜上皮細胞合成和分泌的具有三葉因子結(jié)構(gòu)域的多肽小分子，其又被稱為乳腺癌相關(guān)肽(pS2)。作為胃腸道激素的1種類型，TFF1在胃腸道黏膜保護和損傷修復(fù)中具有至關(guān)重要的作用，機制可能與其對細胞移行的促進作用有關(guān)，還可能與其通過下調(diào)某些黏附因子水平來降低細胞黏附作用有關(guān)。近年來越來越多的研究指出，TFF1是1種癌基因，參與了包括胰腺癌、膀胱癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等很多腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程[7]。研究指出，除了胃癌，TFF1在其他部位腫瘤中具有促進炎癥和促癌作用，主要表現(xiàn)為促進血管生成、促進癌細胞侵襲、抑制癌細胞凋亡等[3]。此外，其還被指出是ER經(jīng)典途徑中的一種重要蛋白，可誘導(dǎo)女性雌激素失衡[8]。有學(xué)者在體外實驗中證實，TFF1可促進乳腺癌細胞的生長，還有學(xué)者通過臨床試驗證實，乳腺癌組織中TFF1表達陽性率相比正常乳腺組織顯著升高，由此可見，在乳腺癌中，TFF1作為1種腫瘤促進因子可能也是1種潛在的乳腺癌腫瘤標記物[9-10]。本研究則對乳腺癌、乳腺良性病變和健康對照女性的外周血TFF1水平進行比較，結(jié)果顯示，乳腺癌患者的血清TFF1要明顯高于乳腺良性病變組和健康對照組，而后兩組之間比較差異不顯著，提示乳腺癌患者的血清TFF1水平顯著升高，同時研究發(fā)現(xiàn)，TFF1的血清水平狀態(tài)與乳腺癌患者的腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及3年總生存率有相關(guān)性，提示血清TFF1水平的升高可能會導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)展和患者預(yù)后不良。

UBE2C屬于E2基因家族中的泛素偶聯(lián)酶成員，又被成為泛素結(jié)合酶10(UBH10)。UBE2C是及極其重要的泛素結(jié)合酶復(fù)合體組成部分，在與腫瘤抑制基因和癌基因編碼的蛋白降解有關(guān)的泛素蛋白酶途徑(UPS)中起著關(guān)鍵性作用。UPS途徑的紊亂會引起癌基因和腫瘤抑制基因相關(guān)蛋白在人體內(nèi)大量積累，從而引發(fā)癌癥，是臨床提出的一種新的癌癥治療靶點。國外有學(xué)者應(yīng)用RT-PCR法對人類正常組織和腫瘤細胞中的UBE2C蛋白RNA表達情況進行檢測，結(jié)果顯示，其在正常組織中不表達或低表達，蛋白很多腫瘤細胞中均呈現(xiàn)明顯高表達的狀態(tài)[11]。之后則有學(xué)者指出，UBE2C表達水平升高可能與乳腺癌有關(guān)，而且其與腫瘤的轉(zhuǎn)移傾向、分化程度、惡性程度和不良預(yù)后等密切相關(guān)，UBE2C高表達者的生存率相對較低[12]。國外已經(jīng)有很多研究和數(shù)據(jù)都證實乳腺癌組織中UBE2C出現(xiàn)高表達，而且能作為乳腺癌的獨立預(yù)后評價指標。本研究結(jié)果也顯示，乳腺癌組患者的血清UBE2C水平相比乳腺良性冰病變組和健康對照組女性均明顯升高，其表達狀態(tài)與乳腺癌患者的腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和總生存率密切相關(guān)，這與之前其在乳腺癌組織中的表達狀況一致，提示UEB2C可能是一種潛在的乳腺癌腫瘤標志物，但其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用和潛在的分子功能目前尚不明確，筆者推測可能與其增強癌細胞的DNA修復(fù)能力和促進癌細胞細胞周期進程有關(guān)[13]。

MT1E是MT1的構(gòu)成亞基，具有與特定金屬結(jié)合的能力，其表達變化被認為與多種人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞的細胞核和細胞漿中存在包括MT1E在內(nèi)的MT基因蛋白，而MT1E可作為調(diào)控因子直接或間接參與靶基因表達的調(diào)控。還有研究指出，MT1E結(jié)構(gòu)中含有很多巰基化結(jié)構(gòu)，其能夠通過激活乳腺上皮細胞膜表面的巰基酶來促進能引起癌細胞生物學(xué)特征和侵襲能力改變的金屬蛋白酶的巰基化和磷酸化，進而為腫瘤細胞的生長、增殖和轉(zhuǎn)移提供有利條件[14]。此外，MT1E還能促進乳腺癌細胞通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換過程突破基底膜，進一步促進乳腺癌的發(fā)展。有學(xué)者對乳腺癌患者血清MT1E水平進行檢測和比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清MT1E水平要明顯高于良性組，其指出高水平的MT1E可能參與了乳腺癌的發(fā)生和病情進展[15]。本研究進一步發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清高MT1E水平與患者的病理特征密切相關(guān)，包括臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生和患者生存率的降低等，提示血清MT1E水平與乳腺癌患者的病理學(xué)特征有關(guān)，分析原因可能是MT1E血清水平升高會影響乳腺癌腫瘤細胞的分化成熟，促進其對淋巴結(jié)組織的黏附力，進而造成病情的進展。

最后本研究應(yīng)用Cox比例風(fēng)險比例模型對乳腺癌患者預(yù)后影響因素進行分析，結(jié)果顯示除了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期外，高TFF1、UBE2C、MT1E血清水平均是乳腺癌患者預(yù)后的獨立危險因素，提示血清TFF1、UBE2C、MT1E的檢測能夠與乳腺癌患者預(yù)后的評估提供依據(jù)，其可作為常規(guī)腫瘤大小、病理類型等預(yù)后評估手段的補充，來更準確的對患者預(yù)后進行評價，從而對臨床腫瘤評價、治療和治療方案的決定進行指導(dǎo)。

綜上所述，乳腺癌患者血清TFF1、UBE2C、MT1E水平均明顯升高，其血清水平與患者腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，同時還與患者預(yù)后有關(guān)，其血清水平可作為乳腺癌患者預(yù)后的判斷指標應(yīng)用于臨床。