靳 然 楊夢(mèng)夢(mèng)

（南陽(yáng)農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 河南南陽(yáng) 473000）

草莓是薔薇科草本植物，果肉中營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，深受廣大人民群眾喜愛(ài)。隋珠草莓植株高大，長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)旺，成熟早，抗病能力強(qiáng)，產(chǎn)量要比紅顏草莓更高，約是紅顏草莓的1.5 倍[1]。隋珠草莓種植將成為多地經(jīng)濟(jì)發(fā)展和農(nóng)民增收的重要途徑。

傳統(tǒng)草莓繁殖方式為匍匐莖繁殖或分株繁殖，但營(yíng)養(yǎng)繁殖育苗，體內(nèi)病毒累積，導(dǎo)致草莓植株矮小、果實(shí)畸形，種苗退化，產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重下降。植物組織培養(yǎng)技術(shù)可有效解決這一問(wèn)題[2]。

目前關(guān)于隋珠草莓組織培養(yǎng)快繁研究較少。為此，文章以隋珠草莓的莖尖為外植體，建立簡(jiǎn)單易行的隋珠草莓組培快繁體系，以期為隋珠草莓的規(guī)?；S生產(chǎn)提供完整可行的技術(shù)支持，更好地促進(jìn)草莓的種植發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

供試的草莓品種為隋珠，采用匍匐莖的莖尖為試驗(yàn)材料，所有材料來(lái)源一致，采摘于長(zhǎng)江路生態(tài)草莓園。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 取樣

選擇生長(zhǎng)健壯的草莓植株，剪取植株上頂芽飽滿(mǎn)，并且小葉尚未展開(kāi)的匍匐莖放入玻璃燒杯中備用。

1.2.2 外植體的預(yù)處理和消毒

將匍匐莖莖尖放在洗潔精或洗衣粉的水溶液中浸泡3 min～5 min，用軟毛刷輕輕刷洗除去表面塵土后用自來(lái)水沖洗干凈，再用流水沖洗3 h～4 h，裝入干凈玻璃瓶放置到超凈工作臺(tái)備用。在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡30 s，無(wú)菌水沖洗2 次～3 次，后轉(zhuǎn)入濃度為0.1%的升汞溶液中處理8 min，無(wú)菌水沖洗5 次～6 次，放入無(wú)菌盤(pán)中，用無(wú)菌吸水紙吸取表面水分，切取2 mm莖尖備用。

1.2.3 初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽

MS為基本培養(yǎng)基，使用不同濃度的激素配比組合誘導(dǎo)不定芽。添加6-BA、NAA兩種激素，設(shè)置6個(gè)處理，6-BA濃度為0.50 mg/L、1.00 mg/L，NAA濃度為0.02 mg/L、0.05 mg/L，標(biāo)號(hào)A1～A6。每處理接種30 瓶，每瓶接1個(gè)消毒莖尖，后置于培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度25 ℃，光照強(qiáng)度2 000 lx～3 000 lx。30 d后觀察生長(zhǎng)情況。

1.2.4 增殖培養(yǎng)

選取長(zhǎng)勢(shì)一致的不定芽轉(zhuǎn)接入不同激素配比的增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基添加不同濃度的6-BA、NAA、2,4-D，共設(shè)置8個(gè)處理，6-BA濃度為0.50 mg/L、1.00 mg/L，NAA濃度為0.05 mg/L、0.10 mg/L，2,4-D濃度為0.05 mg/L、0.10 mg/L，標(biāo)記為B1～B8。培養(yǎng)基中添加30 g/L蔗糖和7 g/L瓊脂，每個(gè)處理接種30 瓶，每瓶接種2株，30 d后觀察叢生芽的生長(zhǎng)狀況。

1.2.5 生根培養(yǎng)

將生長(zhǎng)健壯、生長(zhǎng)狀況一致3 cm～4 cm的隋珠草莓苗分株接種至生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基可采用MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，分別添加0.10 mg/L、0.30 mg/L的IBA，共設(shè)置4個(gè)處理，標(biāo)記為C1～C4，每個(gè)處理接種30 瓶，每瓶接種1 株～2 株，30 d后觀察組培苗的生根情況。

1.2.6 馴化移栽

將生根2 cm以上、長(zhǎng)勢(shì)良好的組培苗先進(jìn)行煉苗，在煉苗室放置2 d，半開(kāi)封口2 d，隨后全部去除封口蓋3 d～4 d，讓組培苗逐步適應(yīng)外界環(huán)境。經(jīng)煉苗后把隋珠草莓苗從培養(yǎng)瓶中取出，清水洗凈附著在根部的培養(yǎng)基后用于移栽。移栽的基質(zhì)選擇三種：草炭與蛭石的比例分別為2∶1、1∶1、1∶2，記為D1～D3。前期保證水分供應(yīng)充足，2周后觀察統(tǒng)計(jì)成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 無(wú)菌組培苗的建立

外植體的滅菌是無(wú)菌組培苗建立的前提。75%的酒精+0.1%的升汞溶液滅菌效果良好。隋珠草莓匍匐莖莖尖污染率為42.6%，死亡率達(dá)13.7%。

2.2 初代培養(yǎng)

將消毒滅菌的隋珠草莓匍匐莖莖尖接種于A1～A6培養(yǎng)基中，接種7 d后，在生長(zhǎng)點(diǎn)基部首先出現(xiàn)綠色芽點(diǎn)，隨后不斷長(zhǎng)大，在16 d～18 d后萌發(fā)出幼芽。由表1可看出，在相同培養(yǎng)條件下，誘導(dǎo)不定芽分化的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.02 mg/L。當(dāng)6-BA濃度為0.50 mg/L時(shí)，不定芽萌發(fā)率隨著NAA濃度的升高先上升后下降。NAA濃度一定時(shí)，6-BA濃度的升高反而使不定芽萌發(fā)率下降（如A2與A5對(duì)比，A3與A6對(duì)比），且A4和A6處理下不定芽萌發(fā)率差異不大。

表1 不定芽誘導(dǎo)結(jié)果

2.3 增殖培養(yǎng)

將隋珠草莓生長(zhǎng)一致的不定芽轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中，表2結(jié)果可以看出，不同培養(yǎng)基處理的增殖倍數(shù)差異明顯，增殖培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.05 mg/L，在該種激素配比下，叢生芽生長(zhǎng)健壯。當(dāng)6-BA濃度一定時(shí)，6-BA和NAA的組合促進(jìn)不定芽增殖的效果要優(yōu)于6-BA和2,4-D組合。在6-BA和NAA的組合中，NAA濃度一定時(shí)，隨著6-BA濃度的升高，增殖倍數(shù)反而下降，即6-BA濃度為0.50 mg/L時(shí)促進(jìn)增殖的效果要優(yōu)于6-BA濃度為1.00 mg/L處理組。

表2 不定芽增殖結(jié)果

2.4 生根培養(yǎng)

當(dāng)隋珠草莓苗長(zhǎng)至3 cm～4 cm時(shí)，移至生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根。從表3可以看出，誘導(dǎo)生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.10 mg/L。不同培養(yǎng)基處理對(duì)生根率影響不大，1/2MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根效果稍?xún)?yōu)于MS培養(yǎng)基。加入IBA后更有利于根的發(fā)生，當(dāng)IBA濃度為0.10 mg/L時(shí)，生根條數(shù)最大，但較高濃度IBA反而會(huì)抑制根的萌發(fā)。

表3 生根培養(yǎng)結(jié)果

2.5 馴化移栽

將煉苗后草莓苗移栽到不同基質(zhì)，14 d后統(tǒng)計(jì)成活率。表4可以看出，不同移栽基質(zhì)中組培苗成活率差異不明顯，最優(yōu)移栽基質(zhì)為草炭∶蛭石=1∶1。移栽2 周后生長(zhǎng)達(dá)到穩(wěn)定，平均株高約4.8 cm，根系發(fā)達(dá)，生長(zhǎng)健壯。

表4 不同基質(zhì)對(duì)隋珠草莓苗成活率的影響

3 結(jié)論與討論

隋珠草莓組培快繁研究中，外植體選用匍匐莖莖尖，用0.1%的升汞溶液消毒8 min，滅菌效果良好，成活率達(dá)86.3%。本試驗(yàn)中，選用MS培養(yǎng)基，向其添加不同濃度的6-BA、NAA、2,4-D來(lái)進(jìn)行隋珠草莓苗莖尖初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)的研究。對(duì)于不定芽的誘導(dǎo)，最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.02 mg/L，萌發(fā)率高達(dá)86.7%。在初代培養(yǎng)階段，以紅顏草莓為材料，鄧淵確定促進(jìn)草莓萌發(fā)的6-BA最適濃度為0.50 mg/L[3]，與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。

草莓組培苗的增殖培養(yǎng)階段，受多種植物激素影響，6-BA與NAA的組合促進(jìn)不定芽增殖的效果要優(yōu)于6-BA和2,4-D組合。對(duì)于隋珠草莓，增殖培養(yǎng)的最適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.05 mg/L。此外6-BA濃度升高增殖倍數(shù)反而會(huì)有所下降，在今后的研究中，可探究低濃度6-BA對(duì)增殖培養(yǎng)的影響，一方面可節(jié)約成本，另一方面有利于叢生芽生長(zhǎng)健壯。

生根培養(yǎng)階段，選用了MS與1/2MS比較來(lái)研究基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)生根的影響，結(jié)果表明：1/2MS在生根率、生根數(shù)上都要稍?xún)?yōu)于MS培養(yǎng)基。同時(shí)適宜濃度的IBA能夠促進(jìn)根的萌發(fā)，較低濃度能夠促進(jìn)根的發(fā)生，高濃度反而抑制生根，隋珠草莓苗生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1 mg/L。該結(jié)果與其他報(bào)道的草莓品種差異不大，說(shuō)明各草莓品種對(duì)于激素誘導(dǎo)生根的差異較小。

馴化移栽階段，一般需要在煉苗室培育7 d左右，使組培苗逐漸適宜外界環(huán)境便于移栽。本研究中選用的移栽基質(zhì)對(duì)成活率的影響差異不明顯，最適宜的移栽基質(zhì)為草炭∶蛭石=1∶1，成活率高達(dá)89.3%。移栽后的管理也比較重要，初期要勤澆水，搭拱棚遮陰，1 周后可噴施營(yíng)養(yǎng)水，2 周后可補(bǔ)充噴施氮肥，4 周后即可長(zhǎng)成商品苗。