廖 德 權

(廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 湛江 524000)

PCT屬于抗炎物質，一般情況下其半衰期為25～30h，收集標本1d后放置于常溫狀態(tài)下其指標水平會下降大約12%，在體外具備一定的穩(wěn)定性，蛋白酶對降鈣素原有特異性降解效果，機體受到細菌感染后促使該指標分泌[1～3]。諸如新生兒肺炎、急性胰腺炎等感染性疾病中，細菌內存在的毒素刺激機體降鈣素原分泌速度，在短時間內急速提升，根據該變化來作為對病情早期診斷以及臨床使用藥物選擇有指導價值，在預后評估是如PCT指標長時間保持在高水平狀態(tài)，則提示控制效果較差[4]。量子點(Quantumdots，QDs)屬于新型半導體納米材料，近年來，量子點因其具有受激發(fā)光照射發(fā)出熒光的特性而備受人們關注，目前正被大量用于分子標記技術和醫(yī)學影像成像技術，同時也被視為新的理想的免疫標志物[5～6 ]。為探究基于量子點標記的降鈣素原快速、高靈敏熒光免疫層析檢測方法的建立及應用方法，本次研究收集我院2019年8月臨床檢測降鈣素原標本20例，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料

收集廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院2019年8月臨床檢測降鈣素原標本20例 ，使用《WS/T 420-2012》行業(yè)標準，用量子點免疫熒光層析法和羅氏 Roche電化學發(fā)光法進行降鈣素原檢測，分析其診斷符合率、Kappa 一致性、ROC曲線和定量線性回歸分析[7]。

1.2 方法

1.2.1精密度驗證實驗

實驗目的：驗證檢測系統的重復性不精密度(Sr)、室內不精密度(S1)。實驗方法：使用《WS/T 420-2012》行業(yè)標準，選擇室內質控品(高值、低值)各1份，每個水平重復測定3次，連續(xù)5天。離群值檢驗：單次測量值超過總均值±4SD；數據剔除量：小于總測量數據量的5%；評價標準：重復性不精密度≤1/4TEa；室內不精密度≤1/3TEa或小于驗證值。或按照中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 403-2012≤臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質量指標》對精密度的要求進行。

1.2.2驗證實驗室內檢測系統的檢驗結果一致性

實驗方法：使用《WS/T 420-2012》行業(yè)標準，選取參加室間質評的系統作為比對方法，用實驗方法、比對方法分別檢測最少20份血清標本，標本濃度在線性范圍內均勻分布，每個標本測定1次，1天4h內完成。評價標準：偏倚圖中不同濃度處偏倚分布均勻；若不均勻則分段處理Bias按照中國衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評要求小于1/2TEa，或按照中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 403-2012《臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質量指標》對正確度的要求進行[8～9]。實驗方法：深圳金準量子點免疫熒光層析法；比對方法：羅氏 Roche 電化學發(fā)光法；實驗儀器：深圳金準；比對儀器：cobas e601。

1.2.3所有樣本均無反復凍融

每一例標本均用量子點免疫熒光層析法和電化學發(fā)光法進行降鈣素原檢測，并將所有樣本的量子點免疫熒光層析法降鈣素原檢測結果作為試驗組，相應的將電化學發(fā)光法檢測所有標本的降鈣素原濃度結果作為對照組[10～11]。

1.3 統計學方法

應用Excel對本次研究的數據進行收集，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 精密度驗證實驗結果

水平1實驗不精密度大于允許不精密度，檢測系統精密度不可接受，水平2實驗不精密度小于允許不精密度，檢測系統精密度可以接受，水平1、水平2實驗數據見表1～4。

表1 精密度驗證試驗結果(水平1)

批間方差=0.001

室內標準差=0.040

總均值=0.316

表2 實驗室允許不精密度、實驗不精密度結果對照表(水平1)

表3 精密度驗證試驗結果(水平2)

表4 實驗室允許不精密度、實驗不精密度結果對照表(水平2)

2.2 驗證實驗室內檢測系統的檢驗結果一致性

實驗室內檢測系統的檢驗結果一致性結果表明，檢測系統可比性驗證通過,回歸方程為:y=1.0472x+0.2444，R2=0.999。

表5 驗證實驗室內檢測系統的檢驗結果一致性

兩方法間絕對偏倚=-0.11

兩方法間相對偏倚=-4.03%

絕對偏倚標準差=0.394

相對偏倚標準差=13.99%

圖1 偏移圖(絕對偏倚)

圖2 偏移圖(相對偏倚)

圖3 線性回歸圖

2.3 不同 cut-off 值下量子點免疫熒光層析法診斷效能評價

以羅氏公司電化學發(fā)光法作為標準，對分析量子點免疫熒光層析法的診斷效能進行比較，當PCT濃度為0.5ng/ml時，2種方法間診斷符合率達97.87%；當PCT濃度為2.0ng/ml時，2種方法間診斷符合率達98.44%。

3 討論

PCT水平增高通常發(fā)生在感染后2h，其表達水平高低能反映全身炎癥反應及感染的活躍程度[12 ]。PCT是血清降鈣素(CT)前肽物質，由116個氨基酸組成糖蛋白質，正常生理下，由甲狀腺C細胞分泌產生。健康人群血清PCT水平很低，低于0.05ng/ml，在創(chuàng)傷、炎性反應刺激尤其是細菌感染或膿毒癥狀態(tài)下，機體各組織、多種細胞類型均可產生PCT并釋放進入血液循環(huán)系統。驗證實驗室內檢測系統的檢驗結果一致性結果表明，檢測系統可比性驗證通過,回歸方程為:y=1.0626x+0.0044，R2=0.9913。當PCT濃度為0.5ng/ml時，兩種方法間診斷符合率達97.87%；當PCT濃度為2.0ng/ml時，量子點免疫熒光層析法與電化學發(fā)光法兩種方法間診斷符合率達98.44%。Cut-off值為0.5ng/ml和2.0ng/ml時，兩者ROC曲線下面積分別為0.964和0.985，均表明兩種檢測方法無顯著差異(P>0.05)。綜上所述，在檢測系統上的精密度驗證實驗基本符合實驗室要求，檢測系統檢驗結果可比性符合要求。量子點免疫熒光層析法和電化學發(fā)光法之間具有診斷一致性和相關性。