李江萍 劉宗玉 辛焰 成曦子 廖國林 謝躍文

人類乳頭瘤病毒 (Human papilloma virus，HPV) 是一種 DNA雙鏈病毒，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的四百多種亞型中，約40種可特異性感染人的皮膚和黏膜鱗狀上皮細胞，誘發(fā)宮頸上皮等部位的良、惡性病變。宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位。其發(fā)生發(fā)展經(jīng)歷了癌前病變，早期浸潤癌和浸潤癌3個階段。近年來宮頸癌發(fā)生率呈上升趨勢。其發(fā)生與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)的持續(xù)感染密切相關(guān)[1]，HPV感染被視為宮頸癌疾病發(fā)生的主要潛在病因[2]。本研究對武漢市青山區(qū)2016年1月至2019年12月共計11 409例婦科體檢HPV標(biāo)本檢測情況進行統(tǒng)計分析。以了解本地區(qū) HPV 感染和基因型分布的情況，為本地區(qū)提供HPV感染的流行病學(xué)資料，為宮頸癌的干預(yù)治療，HPV 疫苗及試劑的研發(fā)提供參考。

1 對象與方法

1.1 調(diào)查對象 HPV標(biāo)本人群為2016年1月至2019年12月于我院婦科門診查體患者和健康體檢中心婦科查體人員，排除已確診宮頸癌患者和其他嚴(yán)重疾病患者標(biāo)本。標(biāo)本人群均為武漢市青山地區(qū)居民。年齡14～85歲，共計11 409例。

1.2 儀器與試劑 HPV25分型使用儀器：博日基因擴增儀；試劑：艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司人乳頭瘤病毒基因分析(25型)檢測試劑盒(PCR反向點雜交法)。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集：暴露宮頸，將采樣刷置于宮頸口順時針旋轉(zhuǎn)3～5圈，取出宮頸刷置于采樣瓶中，折斷刷頭，密閉送檢。所有樣品在 4℃下運送至實驗室，并在 48 h 內(nèi)進行測試。對每個患者，分別獨立收集每個標(biāo)本進行 HPV 基因分型檢測。

1.3.2 檢測：應(yīng)用PCR反向點雜交法檢測取得的宮頸脫落細胞，檢測高危HPV(16.18.31.33.35.39.45.51.52.53.56.58.59.66.68.73)，低危HPV(6.11.26.40.42.43.44.81.83)共計25個型別。標(biāo)本處理與PCR擴增、雜交、顯色各個步驟操作嚴(yán)格按照儀器與試劑盒使用說明進行。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染率青山區(qū)11 409例女性HPV標(biāo)本檢測中，HPV陽性1 646例，HPV感染陽性率14.43%。1 646例陽性標(biāo)本共檢出1 650個有高危亞型及469個有低危亞型，分別占比77.9%、22.1%。見表1。

表1 HPV感染率 例

2.2 不同HPV感染模式比較 HPV感染模式比較單一亞型感染為1 324例，混合型感染322例，分別占感染總例數(shù)的80.43%和19.57%?；旌细腥疽噪p重感染較多見，占71.7%。1例標(biāo)本檢測出7個亞型，比較罕見。多重感染中，以高高危、高低?；旌细腥据^多見，低低危混合感染較少見，HPV 52.16.58.18是多重感染中檢出率最高的型別。見表2。

表2 不同HPV感染模式比較

2.3 HPV感染亞型 1 646例HPV陽性標(biāo)本中，25種亞型均有檢出，前10位中，高危型占8型，低危型2型。檢出率最高的3種高危型分別是HPV52.16.58，分別占高危亞型20.1%(332/1 650)、14.1%(233/1 650)、11.5%(189/1 650)。低危型前3位分別為HPV81.6.42，分別占低危型22.2%(104/469)、18.6%(87/469)、15.8%(74/469)。見表3。

2.4 HPV52.16.58.陽性的年齡段分布 HPV52.16.58陽性年齡段分布HPV52.16.58感染率最高，且均為高危型，構(gòu)成比超過8%。三型的年齡分布特征見表?？梢钥闯鲈?0～49歲年齡段HPV52.16.58三型陽性例數(shù)最多。此年齡段為女性性活躍期，也是HPV感染與宮頸疾病及宮頸癌發(fā)生的高發(fā)年齡段。見表4。

表4 HPV52.16.58.陽性的年齡段分布 例

3 討論

因地域和民族的不同，各地區(qū) HPV感染情況也是有差異的，明確流行的HPV 主要型別，可幫助設(shè)計常見感染亞型的檢測試劑，并為疫苗的研制和應(yīng)用提供依據(jù)。本研究發(fā)現(xiàn)：武漢地區(qū)女性 HPV 感染率為14.43%，宮頸脫落細胞中所檢測的25種 HPV 亞型均有檢出，其中高危型別 16 種，低危型別 9 種，最常見 5 種高危型別依次為:HPV52、16、58、53、56 型，需重視上述 HPV 感染的篩查及防治，針對武漢地區(qū) HPV 感染的疫苗的研制及使用時，以及設(shè)計武漢地區(qū)常見感染亞型的監(jiān)測試劑盒時，需考慮武漢地區(qū) 16 種高危型別，尤其是 HPV52、16、58、53、56型。

HPV感染在女性中較為普遍，有數(shù)據(jù)顯示，性活躍期女性HPV感染率為50%～80%，且感染時通常無任何癥狀，同時50%～90%HPV感染可在感染后數(shù)月至兩年內(nèi)被體內(nèi)免疫系統(tǒng)清除，只有極少數(shù)持續(xù) HPV 感染，從而誘發(fā)宮頸上皮惡性轉(zhuǎn)化導(dǎo)致宮頸癌[3,4]的發(fā)生。國內(nèi)報道正常宮頸 HPV 感染率為 11%～37%[10-13]。本研究統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，武漢市青山區(qū)女性HPV總的感染率為14.43%。略低于2013年岑堯等[5]報道的15.7%，明顯低于姜樹朋等[6]武漢地區(qū)女性HPV總感染率為21.1%的報道。HPV單一亞型感染檢出率明顯高于多重亞型感染檢出率，占HPV總檢出率的80.43%，與張麗華等[7]報道的有區(qū)別，提示本地區(qū)HPV感染以單一型別感染為主。結(jié)果的差異與實驗室如何進行HPV基因分型檢測標(biāo)準(zhǔn)化有關(guān)，與標(biāo)本采集、患者就診構(gòu)成有關(guān)，楊淑哲等[8]研究分析發(fā)現(xiàn)，我國大陸妊娠期女性HPV感染率25.1%，明顯高于普通女性HPV感染率。

本研究中，混合型感染病例322例，占總感染病例19.57%?；旌细腥疽噪p重感染多見，占71.7%。多重感染中，以高高危、高低?；旌细腥径嘁?，低低危混合感染少見。HPV52.16.58.18是多重感染中檢出率最高的四個亞型。因為高危型HPV感染后被體內(nèi)免疫系統(tǒng)清除機率比低危型HPV小。HPV型別較多，機體單一型別感染與多重型別感染能不能引起宮頸病變發(fā)展，研究觀點尚不一致，部分學(xué)者認為持續(xù)多重感染患者得其他疾病的風(fēng)險明顯增加[9]，HPV多重型感染，會加大持續(xù)性的感染危險性，且HPV 持續(xù)感染是宮頸病變的發(fā)生主要原因，多重感染容易引發(fā)宮頸病變。但也有學(xué)者認為HPV的多重型別感染不會導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生率增加[10]。

HPV亞型眾多，因地域不同有不同的流行特點。歐美地區(qū)高危型HPV16.18與宮頸癌發(fā)生最為密切，也是HPV二價疫苗研制的主要目標(biāo)型別。一項針對全球?qū)m頸癌患者 HPV 型別的 分析指出，宮頸癌的常見型別依次為 16、18、45、31、33、58 和 52 型，而亞洲地區(qū) 58 和 52 型高于歐美地區(qū)常見的 31、33、45型[11]。亞洲地區(qū)常見高危型為HPV16.52.58，國內(nèi)常見為HPV16.18.58[12]。一項對我國 14 個省、市、自治區(qū)宮頸癌患者的 HPV 感染的調(diào)查顯示，宮頸癌患者HPV 總感染率 53.5%，其中以 HPV16 和 58 為最高，并呈現(xiàn)出北方以 16 型為主，南方以58型為最高的地區(qū)分布特征[13,14]。山東地區(qū)女性最常見的三種高風(fēng)險 HPV感染基因型HPV 16、58、52，最常見的三種低風(fēng)險 HPV 基因型HPV 54、6、55[15]。單一和多重感染，純高風(fēng)險、低風(fēng)險和混合感染的流行與年齡相關(guān)[16]。武漢地區(qū)高危型HPV16.52.58為優(yōu)勢感染基因亞型[6]，此次研究發(fā)現(xiàn)武漢青山地區(qū)常見高危型為HPV52.16.58，基本符合我國HPV流行現(xiàn)狀[6,17]。HPV流行盡管存在地域區(qū)別，但HPV16型地域感染情況變化不大，在不同地區(qū)都有較高的檢出率，同時HPV16型是與宮頸癌疾病發(fā)生聯(lián)系最緊密的亞型[18]，也是全球范圍內(nèi)女性最常見的HPV感染型別[19]。

宮頸癌的發(fā)生與HPV高危型持續(xù)感染密切相關(guān)，絕大多數(shù)宮頸癌患者均可檢出HPV高危型別。HPV高危型與宮頸癌前病變相關(guān)已形成共識。是否合并HPV感染對宮頸疾病的治療預(yù)后與評價有重要作用。目前大多數(shù)宮頸癌患者都能夠從早期篩查得到疾病的預(yù)防，并且從感染HPV 到發(fā)展為浸潤癌通常需要至少10年時間，因此通過早期預(yù)防與治療阻止患者宮頸癌的發(fā)生發(fā)展成為可能[20]。

隨著分子生物與免疫學(xué)的發(fā)展，二價、四價、九價宮頸癌疫苗的陸續(xù)出現(xiàn)，為預(yù)防和控制HPV感染相關(guān)的宮頸癌及其癌前病變提供了更多選擇。但因各種疫苗適用人群與年齡存在差異，且沒有一種疫苗能夠抵抗所有的HPV感染，注射了疫苗也并不等于一定不會患宮頸癌，接種過疫苗的女性仍應(yīng)定期進行宮頸癌篩查。同時已上市疫苗不一定能夠滿足中國女性預(yù)防接種的需求[21]。不同地區(qū)應(yīng)重視本地區(qū) HPV感染型別的篩查、防治及相關(guān) HPV 疫苗研發(fā)，建立健全宮頸癌篩查制度，加強 HPV 感染及宮頸癌防治知識的宣教，加強對 HPV 高危人群的管理，早期篩查及防治HPV 感染，可有效降低HR-HPV 感染率，從而降低本地區(qū)宮頸癌的發(fā)病率[22]。