李裕珍馮麗娟潘益巧阮博文周曉玲

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧53000；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，廣西 柳州 545000)

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stem cells，BMSCs)是屬于中胚層的一類(lèi)多能干細(xì)胞，存在于骨髓中的基質(zhì)干細(xì)胞，為最早發(fā)現(xiàn)的多向分化潛能干細(xì)胞，具有自我增殖、多向分化、免疫調(diào)節(jié)、促進(jìn)造血及修復(fù)損傷器官的作用[1－2]，且在不同誘導(dǎo)條件下可以向肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞等分化[3－4]。由于BMSCs多向分化功能，且容易獲取、體外增殖快、傳代基因穩(wěn)定性良好、移植免疫排斥少等優(yōu)點(diǎn)使其成為近年誘導(dǎo)分化研究的熱點(diǎn)[5]。大量動(dòng)物研究表明，通過(guò)細(xì)胞移植技術(shù)將BMSCs移植進(jìn)入受損肝中，對(duì)損傷的肝具有一定的修復(fù)作用，其主要是通過(guò)不同的誘導(dǎo)條件使BMSCs定向分化為有功能的肝細(xì)胞[6－7]；臨床研究也發(fā)現(xiàn)，自體移植BMSCs可以改善肝病患者各項(xiàng)生化指標(biāo)，減少晚期肝病患者不良反應(yīng)，有效提高其生活質(zhì)量[8－9]。然而，對(duì)于BMSCs的常用分離培養(yǎng)和鑒定方法，以及其向肝細(xì)胞分化的誘導(dǎo)方法及分化機(jī)制尚缺乏系統(tǒng)整理及總結(jié)。因此本文主要對(duì)此進(jìn)行綜述，為更好發(fā)揮BMSCs在肝損傷性疾病治療中的應(yīng)用提供思路。

1 BMSCs的常用分離培養(yǎng)和鑒定方法

1.1 BMSCs的常用分離培養(yǎng)方法

目前常用的BMSCs分離培養(yǎng)方法有全骨髓貼壁分離培養(yǎng)法、骨組織消化分離法、離心法、流式細(xì)胞儀分離法、免疫磁珠分選法等[10－12]，其中后兩者因操作復(fù)雜、分離成本高且分離后細(xì)胞轉(zhuǎn)化效果差等使其運(yùn)用受限，目前大多數(shù)研究中使用的是操作更為方便且獲得細(xì)胞數(shù)量較多、增殖能力較強(qiáng)的全骨髓貼壁分離法和密度梯度離心法[13]，但因其分離純度欠佳，因此有學(xué)者在全骨髓貼壁分離法基礎(chǔ)上進(jìn)行創(chuàng)新優(yōu)化，其中徐麗娟等[14]創(chuàng)新性地使用小鼠3 d乳鼠骨片法，將乳鼠骨片直接進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)梭形細(xì)胞在骨片周?chē)芏却笥?0%時(shí)，按比例進(jìn)行三次傳代，此法獲得了純度較高的BMSCs；向俊西等[15]則在接種一定時(shí)間后將接種不滿(mǎn)意的細(xì)胞進(jìn)行重新接種，并按12、24 h更換一次培養(yǎng)液，經(jīng)優(yōu)化后的誘導(dǎo)方法更簡(jiǎn)便、快捷地獲得了滿(mǎn)意的大鼠BMSCs；兩者改良后的培養(yǎng)方法最后均可得到純度較高的BMSCs，有效解決因細(xì)胞分離純度不佳影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的問(wèn)題，更有利于實(shí)驗(yàn)的研究。

1.2 BMSCs常用鑒定方法

在BMSCs鑒定方面，文獻(xiàn)多報(bào)道BMSCs在形態(tài)上表現(xiàn)為纖維狀或長(zhǎng)梭形[16－17]，未發(fā)現(xiàn)其特異性的表面標(biāo)志物，但因其不表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物，故常用陰性和陽(yáng)性選擇相結(jié)合的方法進(jìn)行鑒定?，F(xiàn)認(rèn)為成熟且合格的BMSCs多表達(dá)陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性的CD29、CD90、CD73、CD105、CD49，不表達(dá)或弱表達(dá)CD11、CD31、CD34、CD44、CD45等[18－20]。

2 BMSCs誘導(dǎo)向肝細(xì)胞分化的常用方法

BMSCs具有多向分化性，但其向肝細(xì)胞分化需要嚴(yán)格的分化條件及多種細(xì)胞因子的參與，因此如何提高及保證BMSCs向肝細(xì)胞分化的有效率并將其應(yīng)用于臨床治療是目前研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)相應(yīng)的物質(zhì)誘導(dǎo)，如中藥含藥血清、細(xì)胞因子、模擬肝樣微環(huán)境或其他物理干預(yù)等誘導(dǎo)的方式，可促使BMSCs不同程度地向肝細(xì)胞分化。

2.1 中藥含藥血清誘導(dǎo)

目前中藥被廣泛應(yīng)用于肝病的臨床治療中，特別是對(duì)于中晚期肝病，中藥有明顯改善患者臨床癥狀且毒副作用小、不良反應(yīng)少等特點(diǎn)，為中藥方劑聯(lián)合BMSCs移植治療終末期肝病提供新思路，但由于中藥復(fù)方成分多樣且復(fù)雜，作用靶點(diǎn)廣泛，同時(shí)也限制了對(duì)其機(jī)制的研究。因此探索利用中藥含藥血清促使BMSCs向肝細(xì)胞分化也是現(xiàn)今熱點(diǎn)。

活血化瘀類(lèi)中藥復(fù)方是治療氣滯血瘀型肝硬化的經(jīng)典方劑。研究表明鱉甲煎丸含藥血清對(duì)BMSCs向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用，且有改善肝纖維化及調(diào)節(jié)免疫等作用，肯定了中藥對(duì)BMSCs誘導(dǎo)分化的作用，但具體的作用機(jī)制尚未明確[21]。韓海嘯等[22]研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)肝益氣通絡(luò)湯藥物血清不僅可以有效誘導(dǎo)BMSCs定向分化為肝細(xì)胞，且對(duì)BMSCs具有增殖作用，并隨著藥物濃度的增加及培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)量就不斷增多。另外，基于“腎主骨生髓”理論，Zhou等[23]通過(guò)評(píng)估不同干預(yù)辦法移植BMSCs治療肝硬化大鼠的療效，選用BMSCs聯(lián)合中藥濟(jì)生腎氣湯(JSSQ組)進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果證實(shí)了中藥濟(jì)生腎氣湯聯(lián)合BMSCs移植對(duì)改善肝硬化大鼠的治療作用，其機(jī)制可能JSSQ具有滋補(bǔ)肝腎，促進(jìn)骨髓再生的功能，其在體內(nèi)發(fā)揮了類(lèi)似于細(xì)胞歸巢誘導(dǎo)劑的作用，促進(jìn)了BMSCs的誘導(dǎo)分化及遷移，從而參與肝細(xì)胞的再生修復(fù)。瘀血阻絡(luò)、肝腎陰虛型均是終末期肝病患者的主要證型之一[24]，在誘導(dǎo)BMSCs向肝細(xì)胞分化過(guò)程中，多數(shù)學(xué)者[21－22]以活血化瘀、調(diào)肝通絡(luò)功效的方藥為主，誘導(dǎo)分化結(jié)果良好，而部分學(xué)者[23，25]以補(bǔ)腎生髓、滋陰養(yǎng)血法也明顯改善了大鼠肝纖維化程度，詳見(jiàn)表1。因此活血化瘀法中藥血清誘導(dǎo)是否適應(yīng)于所有終末期肝病尚待進(jìn)一步研究，針對(duì)不同證型的肝病所采用中藥含藥血清的可進(jìn)行不斷地探索。

表1 常用中藥含藥血清分類(lèi)及代表Table 1 Classification and representation of commonly used Chinese medicine sera containing drugs

2.2 細(xì)胞因子誘導(dǎo)

細(xì)胞因子是一類(lèi)由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激而合成、分泌的具有廣泛生物活性的小分子蛋白質(zhì)，現(xiàn)多被應(yīng)用于誘導(dǎo)BMSCs向肝細(xì)胞分化。潘興南等[26]研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor，HGF)體外誘導(dǎo)BMSCs向肝細(xì)胞分化以質(zhì)量濃度≥20μg/L且誘導(dǎo)時(shí)間≥6 h/d為宜，誘導(dǎo)效果與HGF濃度及每日誘導(dǎo)時(shí)間呈正相關(guān)性。Putra等[27]發(fā)現(xiàn)在血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的刺激下，BMSCs可向損傷肝組織遷移并可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為原代肝細(xì)胞，且發(fā)現(xiàn)靜脈內(nèi)給藥途徑是BMSCs移植的最佳途徑。吳增城等[28]探討半乳糖凝集素-3(Gal-3)聯(lián)合HGF誘導(dǎo)大鼠BMSCs向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化的可行性及最佳誘導(dǎo)劑量，觀(guān)察記錄不同濃度及不同時(shí)間下BMSCs的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各組BMSCs形態(tài)逐漸向肝細(xì)胞分化，與陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞相似，其中濃度0.5μg/mL的組別在第28天時(shí)間段與對(duì)照組IAR20細(xì)胞最為相似，且甲胎蛋白、清蛋白熒光染色陽(yáng)性率最高，mRNA表達(dá)較其它各組明顯增高。譚銘輝等[29]發(fā)現(xiàn)使用galectin-3誘導(dǎo)BMSCs分化為肝細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)白蛋白(albumin，ALB)mRNA及角蛋白18(cytokeratin 18，CK－18)mRNA及AFP蛋白表達(dá)增加，與HGF聯(lián)合進(jìn)行誘導(dǎo)時(shí)可提高BMSCs向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的效率。

2.3 中藥含藥血清聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)

Fu等[30]采用中藥一貫煎含藥血清聯(lián)合HGF和基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell derived factor-1，SDF-1)在體外誘導(dǎo)BMSCs向肝細(xì)胞分化，結(jié)果表明含中藥血清組(YGJ組)經(jīng)過(guò)一定的時(shí)間誘導(dǎo)后，BMSCs的形態(tài)逐漸向肝細(xì)胞樣轉(zhuǎn)化，其所含ALB和CK－18陽(yáng)性細(xì)胞的比例均比其它組升高。由此說(shuō)明一貫煎含藥血清聯(lián)合與HGF和SDF-1誘導(dǎo)小鼠BMSCs可以促進(jìn)其定向分化為肝細(xì)胞，較單純的細(xì)胞因子誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化率高。陳艷等[31]從中藥姜黃中提取姜黃素聯(lián)合成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子－4，F(xiàn)GF-4)誘導(dǎo)BMSCs定向分化發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)適當(dāng)劑量的姜黃素可單獨(dú)有效誘導(dǎo)BMSCs分化為肝細(xì)胞，但聯(lián)合FGF-4的時(shí)候可降低姜黃素的濃度，且安全可靠，值得進(jìn)一步研究其具體作用機(jī)制。

2.4 模擬肝微環(huán)境

微環(huán)境在BMSCs向肝細(xì)胞定向分化過(guò)程中有至關(guān)重要的作用，通過(guò)模擬肝臟微環(huán)境可誘導(dǎo)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化，但具體的機(jī)制尚待研究。彭琴等[32]發(fā)現(xiàn)肝衰竭組及中藥含藥組中的甲胎蛋白、肝組織蛋白、吲哚胺2，3—雙加氧酶表達(dá)均高于正常組，且中藥含藥組的蛋白表達(dá)量高于肝衰竭組，證明了中藥含藥血清能增強(qiáng)BMSCs在肝衰竭微環(huán)境下的肝細(xì)胞分化趨勢(shì)及免疫調(diào)節(jié)活性，提高肝細(xì)胞分化率。Razban等[33]選用硫酸乙酰肝素和IV型膠原模擬肝微環(huán)境對(duì)BMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)分化，結(jié)果表明CYP3A4酶活性，AFP，ALB和c-MET蛋白水平升高，證明力BMSCs具有分化為肝樣細(xì)胞、改善肝功能的功效。李偉等[34]認(rèn)為膽汁淤積的病理狀態(tài)下，可以為BMSCs向肝細(xì)胞的分化提供良好的細(xì)胞微環(huán)境，因此探討?zhàn)瞿懷鍖?duì)大鼠BMSCs向肝細(xì)胞分化的影響，結(jié)果證明瘀膽血清可誘導(dǎo)BMSCs向肝細(xì)胞的定向分化，促進(jìn)肝細(xì)胞的生長(zhǎng)。

大量研究表明肝細(xì)胞和非肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞在體外共培養(yǎng)可通過(guò)異質(zhì)細(xì)胞間的相互作用充分模擬肝細(xì)胞在體內(nèi)的生存環(huán)境，促進(jìn)肝細(xì)胞增殖與分化，并保持肝細(xì)胞特有的生物學(xué)功能。因此，共培養(yǎng)是肝細(xì)胞大規(guī)模、高活性培養(yǎng)并最終推廣運(yùn)用的理想培養(yǎng)方式。Zhang等[35]研究證明在共培養(yǎng)系統(tǒng)中，BMSCs保持正常增殖和活力的同時(shí)，強(qiáng)烈表達(dá)ALB、AFP和cytokeratin-18的mRNA蛋白水平，對(duì)BMSCs分化為肝細(xì)胞起了決定性的作用。另外，與傳統(tǒng)的2 D培養(yǎng)基相比，3 D系統(tǒng)可高度模擬天然器官環(huán)境，既保持BMSCs的分化能力，也有利于維持肝細(xì)胞的高復(fù)制能力。Liu等[36]利用poly(lactic acid-glycolic acid)(PLGA)支架模擬3 D系統(tǒng)，將BMSCs和肝細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，結(jié)果證明了PLGA支架中BMSCs誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的能力，而且表明1∶5(BMSCs:hepatocyte-like cells)的比例最適合BMSCs支持PLGA支架中的肝細(xì)胞代謝和穩(wěn)定。

2.5 其它誘導(dǎo)方法

此外，張瑋等[37]采用物理性的辦法研究在針刺對(duì)治療肝纖維化的體外作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)損傷及治療均等物理刺激療法可誘導(dǎo)BMSCs向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高大鼠血清中細(xì)胞因子水平和改善肝纖維化程度，其機(jī)制可能與自身修復(fù)代償機(jī)制相關(guān)。孫婷[38]基于無(wú)創(chuàng)的超聲靶向微泡破壞技術(shù)探討誘導(dǎo)BMSCs靶向歸巢及分化為肝細(xì)胞的可行性，發(fā)現(xiàn)該技術(shù)可改善受損肝組織功能及抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)肝細(xì)胞的生長(zhǎng)。Li等[39]研究發(fā)現(xiàn)超聲輻照結(jié)合HGF可加速人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的肝分化。選擇物理性干預(yù)方法進(jìn)行誘導(dǎo)BMSCs分化為肝細(xì)胞具有創(chuàng)傷小，副作用少的特點(diǎn)，對(duì)于實(shí)驗(yàn)的研究可控及可操作性強(qiáng)。

隨著肝疾病進(jìn)展至終末期肝病，門(mén)脈阻塞及門(mén)脈高壓情況越來(lái)越嚴(yán)重，進(jìn)一步導(dǎo)致的血流動(dòng)力學(xué)改變?cè)斐筛谓M織嚴(yán)重缺血缺氧，因此學(xué)者Rehn等[40]探討缺氧環(huán)境下BMSCs與肝細(xì)胞再生的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)缺氧預(yù)處理可增強(qiáng)BMSCs和肝勻漿中的中VEGF的表達(dá)，提高細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)并伴隨血清白蛋白水平的提高，證明了缺氧情況下BMSCs可促進(jìn)肝細(xì)胞的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)化，改善肝纖維化程度。許欣婷等[41]也證明了低氧環(huán)境下可促進(jìn)BMSCs的增殖，利用細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。

3 BMSCs的體內(nèi)誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的途徑

BMSCs不僅能在體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞，在體內(nèi)也具有分化為肝樣細(xì)胞的途徑。Hwang等[42]將BMSCs植入肝硬化大鼠中，發(fā)現(xiàn)歸巢至肝組織中的BMSCs，可經(jīng)誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞，改善肝硬化大鼠的纖維化程度。Jang等[43]也證實(shí)了證實(shí)了BMSCs在體內(nèi)被誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)TGFβ1信號(hào)通路的下游效應(yīng)子P-Smad3/Smad3，且BMSCs移植抑制了Smad3的磷酸化。

4 BMSCs分化為肝細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制

已有的研究表明，運(yùn)用不同的誘導(dǎo)方法無(wú)論是在體內(nèi)還是體外均可誘導(dǎo)BMSCs成功定向分化為肝細(xì)胞，但具體的分子機(jī)制尚未明確[44－45]。目前大部分學(xué)者認(rèn)為，BMSCs定向分化為肝細(xì)胞是基于部分基因被選擇性激活或出現(xiàn)差異性表達(dá)，從而使某些特異性蛋白合成及其空間分布。

4.1 Notch信號(hào)通路

Notch信號(hào)影響細(xì)胞正常形態(tài)發(fā)生的多個(gè)過(guò)程，包括細(xì)胞的分化、凋亡、增殖及細(xì)胞邊界的形成。柳柯等[46]發(fā)現(xiàn)BMSCs向肝細(xì)胞定向分化過(guò)程中其關(guān)鍵基因mRNA表達(dá)也會(huì)下降，在第11天的時(shí)候以Jagged-2、Delta-1、Delta-3、Notch-1、Notch-2、Notch-3和Presenilin-1的mRNA下降最為明顯；利用Jagged與BMSCs共同培養(yǎng)上調(diào)Notch信號(hào)通路其發(fā)現(xiàn)至21 d BMSCs才表達(dá)其表面標(biāo)志物M2-PK和GST-P，明顯晚于對(duì)照組，且分化至26 d時(shí)仍未見(jiàn)白蛋白表達(dá)，證明了下調(diào)Notch信號(hào)通路有助于BMSCs定向分化為肝細(xì)胞。徐洪雨等[47]在研究者發(fā)現(xiàn)隨著細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)BMSCs分化為肝細(xì)胞的分化率的增高，Notch-1蛋白表達(dá)及Notch-1 mRNA呈逐漸下降趨勢(shì)。

4.2 NF-κB信號(hào)通路

NF-κB信號(hào)通路是控制許多細(xì)胞類(lèi)型中細(xì)胞增殖，分化和凋亡的主要因素。Yang等[48]研究表明當(dāng)阻斷了NF-κB信號(hào)后HGF誘導(dǎo)BMSCs分化為肝細(xì)胞效果下降，表明了HGF通過(guò)NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)誘導(dǎo)BMSC向肝樣細(xì)胞的分化，其中機(jī)制可能與NF-κB信號(hào)的激活對(duì)于肝細(xì)胞的增殖和微管形成相關(guān)。王怡等[49]探討NF-κB在HGF和肝組織液(LTF)誘導(dǎo)BMSCs分化為肝細(xì)胞的影響中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)兩種細(xì)胞因子誘導(dǎo)下，細(xì)胞內(nèi)NF-κB蛋白及AAT蛋白表達(dá)量顯著增加，但予NF-κκB抑制劑干預(yù)后，兩者蛋白表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)而明顯下降。表明了NFκB信號(hào)通路對(duì)定向分化誘導(dǎo)的積極作用。

4.3 Wnt/β-catenin信號(hào)通路

Wnt/β-catenin信號(hào)通路是Wnt途徑中的經(jīng)典信號(hào)通路之一，在BMSCs分化為肝細(xì)胞中發(fā)揮重要的作用。Xiang等[50]在研究中發(fā)現(xiàn)使用中藥一貫煎可促進(jìn)BMSCs向肝細(xì)胞分化，在機(jī)制方面，當(dāng)下調(diào)Wnt信號(hào)通路的同時(shí)會(huì)抑制干細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)而分化為有功能的肝細(xì)胞。吉楊丹等[51]發(fā)現(xiàn)miR-26b可通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)BMSCs向肝樣細(xì)胞分化；曾令鋒等[52]發(fā)現(xiàn)17β-E2作用于BMSCs時(shí)，除影響其生長(zhǎng)激素的分泌量，還降低在氧化應(yīng)激時(shí)的凋亡率，最后證明17β-E2對(duì)BMSCs分化為肝樣細(xì)胞的促進(jìn)作用，其機(jī)制可能與17β-E2下調(diào)Wntβ-catenin信號(hào)蛋白Wnt3a和β-Catenin有關(guān)。

4.4 鈣離子對(duì)誘導(dǎo)分化的影響

鈣離子是機(jī)體各項(xiàng)生理活動(dòng)不可缺少的離子，在細(xì)胞的發(fā)生、生長(zhǎng)及凋亡過(guò)程有著重要作用。焦淑賢等[53]發(fā)現(xiàn)鈣離子參與了BMSCs分化為肝細(xì)胞的過(guò)程，當(dāng)加入鈣拮抗劑后BMSCs分化率明顯降低，但是具體的作用機(jī)制及過(guò)程仍待進(jìn)一步研究。

5 總結(jié)

運(yùn)用BMSCs移植誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞技術(shù)治療終末期肝病在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面取得了廣泛的認(rèn)可，通過(guò)中藥含藥血清、細(xì)胞生長(zhǎng)因子和物理刺激等誘導(dǎo)方法均使BMSCs定向誘導(dǎo)分化肝細(xì)胞，都不同程度地改善了大鼠肝纖維化情況，為在臨床上運(yùn)用BMSCs移植治療終末期肝病提供了重要的借鑒意義，也為重癥肝病患者帶來(lái)希望的曙光。但是即使BMSCs移植技術(shù)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面取得了一定的療效，而真正將該技術(shù)運(yùn)用于臨床仍是困難重重。首先從取材上來(lái)講，20歲以后，人體BMSCs的分化能力明顯下降，并且隨著年齡的增長(zhǎng)BMSCs的增殖能力也會(huì)逐漸下降，極有可能限制由BMSCs所分化得到的肝細(xì)胞的臨床應(yīng)用；其次對(duì)于BMSCs鑒定仍未能確定其特異性的表面標(biāo)志物，最后BMSCs分化為肝細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制尚未明確，對(duì)移植后會(huì)出現(xiàn)的不良反應(yīng)及是否會(huì)進(jìn)一步加重肝纖維化或加速疾病的進(jìn)展尚待研究等。但BMSCs是具有巨大分化潛能及廣闊臨床應(yīng)用前景的多功能干細(xì)胞之一，積極探索最佳的、能夠定向誘導(dǎo)BMSCs向肝細(xì)胞分化的誘導(dǎo)方法或誘導(dǎo)劑、移植途徑等，促進(jìn)BMSCs的增值分化，發(fā)揮BMSCs對(duì)肝疾病的積極作用，提高BMSCs移植的臨床運(yùn)用率仍然是現(xiàn)今肝病領(lǐng)域研究的重點(diǎn)內(nèi)容。