梁津杰

（廣東省江門市中心醫(yī)院 病理科，廣東 江門 529000）

0 引言

傳統(tǒng)手工染色是臨床病理標(biāo)本照片染色的常規(guī)手段，但由于其效率低、原材料成本高，在諸多標(biāo)本送檢量較大的醫(yī)院中，傳統(tǒng)手工標(biāo)本照片染色的缺陷逐步凸顯，因而近年來逐漸被現(xiàn)代儀器染色工具所替代。但為了準確了解傳統(tǒng)手工染色與現(xiàn)代儀器染色的實際效果，本文對比了傳統(tǒng)手工然色與現(xiàn)代儀器染色程序、方法、效果，并選擇我院手術(shù)室以及門診的300 例病理標(biāo)本作為研究對象，分別采取傳統(tǒng)手工染色與現(xiàn)代儀器染色，探究染色后兩組標(biāo)準的染色效率與染色效果情況[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇廣東省江門市中心醫(yī)院手術(shù)室以及門診2019年7 月至2019 年12 月內(nèi)的300 例病理標(biāo)本作為研究對象，隨機將研究對象分成手工組與儀器組，每組標(biāo)本150 例，病理標(biāo)本主要來自婦科、甲乳外科以及胃腸外科。

1.2 方法

1.2.1 儀器組方法

染色方法：儀器組本次處理標(biāo)本共150 例，每例病例有2 張制片，共300 張照片，采用全自動染色機進行染色，染色過程中使用伊紅溶液，其中一張使用醋酸化伊紅溶液（共150 張），另一張則單獨使用水溶性伊紅溶液（共150 張），以便判斷醋酸化伊紅產(chǎn)生的影響。染色后使用全自動封片機對制片進行封固[2]。

染色過程：蠟塊完成切片處理后，將其置于載玻片上進行染色，染色后編號、入架，將恒溫鼓風(fēng)干燥箱溫度設(shè)置在65℃干燥載玻片，時長20min；再使用全自動染色機進行染色：（1）使用二甲苯脫蠟，脫蠟時間每步4min；（2）無水乙醇Ⅰ，時間為1min；（3）無水乙醇Ⅱ，時間為1min；（4）95%乙醇，時間為1min；（5）85%乙醇，時間為1min；（6）水洗2min；（7）1.5%醋酸，時間為1min，（8）蘇木素，時間為7min；（9）水洗1min；（10）0.5%鹽酸乙醇，時間為4s；（11）水洗2min；（12）促藍液，時間為2min；（13）水洗2min；（14）95%乙醇（每例病理標(biāo)本僅一張玻片使用，共150 張），時間為1min（使用普通水溶性伊紅的150 張?zhí)^此步）；（15）0.2%醋酸化醇溶性伊紅，時間為5s（普通水溶性伊紅的染色時間為2min）；（16）85%乙醇，時間為6s；（17）95%乙醇，時間為8s；（18）無水乙醇，時間1min；（19）苯酚+TO，時間為2min；（20）二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅲ，時間均為3min，完成染色后，全自動封片機封固，貼裱，成片[3]。

1.2.2 手工組方法

染色方法：在干燥箱中取出切片后進行手工染色，并采用中性樹膠封固。

染色過程：（1）使用TO，微波爐中火加熱脫蠟，脫蠟時間每步5min；（2）無水乙醇Ⅰ，時間為1min；（3）無水乙醇Ⅱ，時間為1min；（4）95%乙醇，時間為1min；（5）85%乙醇，時間為1min；（6）水洗2min；（7）1.5%醋酸，時間為1min；（8）蘇木素，時間為6min；（9）水洗2min；（10）0.5%鹽酸乙醇，時間為4s；（11）水洗2min；（12）促藍液，時間為2min；（13）水洗2min，（14）95%乙醇（每例病理標(biāo)本僅一張玻片使用，共150 張），時間為1min（使用普通水溶性伊紅的150 張?zhí)^此步）；（15）0.2%醋酸化醇溶性伊紅，時間為5s（普通水溶性伊紅的染色時間為2min）；（16）85%乙醇，時間為6s；（17）85%乙醇，時間為6s；（18）95%乙醇，時間為8s；（19）無水乙醇，時間2min；（20）苯酚+TO，時間為2min；（21）TO Ⅰ、TO Ⅱ、TO Ⅲ，時間均為5min，完成染色后，全自動封片機封固，貼裱，成片[4]。

1.3 觀察指標(biāo)

對比兩組標(biāo)本照片染色所需時間；對比兩組標(biāo)本照片染色效果，包括紅藍適度、核質(zhì)鮮明、色彩亮麗三項指標(biāo)；對比儀器組伊紅溶液使用中添加醋酸化醇溶性伊紅的效果[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

使用SPSS 23.0 軟件對所獲數(shù)據(jù)進行分析，其中染色所需時間以及伊紅溶液添加80%乙醇效果數(shù)據(jù)為計量資料，檢驗應(yīng)使用Student’s test 工具；標(biāo)本照片染色效果為計數(shù)資料，檢驗使用χ2test 工具。P<0.05，代表差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本照片染色所需時間對比結(jié)果

如表1 所示，兩組均處理了150 例病例標(biāo)本照片，每組共300 張照片，兩組單張染色時間與總?cè)旧珪r間均呈現(xiàn)出明顯的對比，儀器組單張染色平均時間為（43.25±1.75）min，而手工組單張染色平均時間突破了60min，差異十分明顯；而總?cè)旧珪r間上手工組消耗時間大大高出儀器組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組標(biāo)本照片染色所需時間對比結(jié)果（）

表1 兩組標(biāo)本照片染色所需時間對比結(jié)果（）

2.2 兩組標(biāo)本照片染色效果對比結(jié)果

本次研究中，選擇紅藍適度、核質(zhì)鮮明、色彩亮麗作為評價標(biāo)本照片染色效果的三項指標(biāo)，從儀器組統(tǒng)計結(jié)果來看，三項均超過了250 張，而手工組均低于250 張，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 兩組標(biāo)本照片染色效果對比結(jié)果（n，%）

2.3 儀器組標(biāo)本伊紅溶液中添加醋酸化醇溶性伊紅效果對比

儀器組300 張標(biāo)本照片中，150 張使用普通水溶性伊紅，150 張使用普通水溶性伊紅+醋酸化醇溶性伊紅，加入醋酸化醇溶性伊紅后，伊紅溶液使用時間有所延長，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 儀器組標(biāo)本伊紅溶液中添加醋酸化醇溶性伊紅效果對比（）

表3 儀器組標(biāo)本伊紅溶液中添加醋酸化醇溶性伊紅效果對比（）

注：本次對比中以500mL伊紅溶液與500mL水溶性伊紅+醋酸化醇性伊紅溶液使用時間為對象。

3 討論

病理標(biāo)本照片染色是臨床觀察與診斷的重要依據(jù)之一，目前臨床上涌現(xiàn)出傳統(tǒng)手工染色以及現(xiàn)代儀器染色兩種染色方法，其中傳統(tǒng)手工染色過程復(fù)雜、單張照片染色耗時長，并且使用大量原材料，隨著標(biāo)本送檢量的不斷增加，該染色方法已不足以滿足臨床所需，逐步被現(xiàn)代儀器染色所取代[6]。利用現(xiàn)代自動化儀器進行標(biāo)本照片染色，有效提升了染色效率以及染色質(zhì)量，具有較強的問題性，彌補了傳統(tǒng)手工染色的弊端。而且整個染色過程在封閉空間內(nèi)進行，可通過與活性炭等過濾裝置的配合，減少化學(xué)試劑揮發(fā)對環(huán)境造成的污染[7]。

本科室儀器染色中將改良Gill 蘇木精作為主要材料，其雖成本高、配制過程復(fù)雜，但染色效率高，保證核膜清晰、色彩鮮艷，是保障染色質(zhì)量的關(guān)鍵，目前是臨床病理標(biāo)本照片染色中最佳的核染液。雖然成本高、配制復(fù)雜，但單次用量少，無需進行加溫等處理，與其它材料混合后也不會產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)、生成沉淀，因此，無需再進行金屬膜過濾。但從本次研究中發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)手工染色以及現(xiàn)代儀器染色中均使用了改良Gill蘇木精作為染料，但手工組染色效率以及染色效果仍然低于儀器組，從而突出染色方法對于染色效率以及染色效果的影響[8]。

而目前研究中對于該課題也有著較為豐富的研究，其中張鵬等[9]學(xué)者的研究中選擇紹興市婦幼保健院手術(shù)室與門診的50 例標(biāo)本作為研究對象，標(biāo)本照片均為婦產(chǎn)科標(biāo)本照片，共計200 張照片，其中2 張為一組，每組100 張，分別采用傳統(tǒng)手工染色以及Leica ST5020 全自動染色機，研究中發(fā)現(xiàn)儀器染色具有效率高、效果好、穩(wěn)定的優(yōu)勢；而在醋酸化伊紅的研究上，也得到了具有延長伊紅溶液使用時間的結(jié)果。從其研究數(shù)據(jù)來看，儀器染色整個過程需43min 左右，而手工染色程序過于復(fù)雜，整個過程需60min 以上；伊紅使用醋酸化伊紅后對1500 張切片進行染色后依然保障色彩鮮艷，但普通水溶性伊紅處理1500 張切片后，顏色則較為陳舊。

綜上所述，可將現(xiàn)代儀器染色廣泛運用于臨床，但在染色程序上，由于蘇木精以及儀器的使用大大提高了染色效果，脫水透明環(huán)節(jié)可減少乙醇與二甲苯處理環(huán)節(jié)，優(yōu)化整個處理程序，減少原料的消耗。并且可根據(jù)臨床使用習(xí)慣確定染液位置、染缸位置，以便使染色操作更加方便，減少不必要時間的浪費，有效提升染色效率。